浸潤性膀胱癌患者血清高爾基體磷酸化蛋白3和內(nèi)皮生長因子水平與臨床病理特征和術(shù)后生存率的關(guān)系研究

李 蓉，姜 新，金玉明，王敏捷，陳穎虹

(南部戰(zhàn)區(qū)海軍第一醫(yī)院泌尿外科，廣東 湛江 524005)

膀胱癌為高發(fā)病率惡性腫瘤[1]。男性發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位列第4，女性則位列第7[2]。近年來，膀胱癌的發(fā)病率不斷升高，越來越受到社會各界的重視。肌層浸潤性膀胱癌(MIBC)為膀胱癌的重要類型，具有高復(fù)發(fā)、易轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)[3]。目前，診斷MIBC的指標(biāo)大多只能對當(dāng)前腫瘤情況進(jìn)行判斷，并不能有效評估膀胱癌的預(yù)后。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、高爾基體磷酸化蛋白3(GOLPH3)與腫瘤密切相關(guān)[4～6]，但這兩種因子的血清水平與MIBC預(yù)后的關(guān)系的報道較少。本研究對MIBC患者血清中GOLPH3、VEGF進(jìn)行檢測，觀察這兩種指標(biāo)水平在不同臨床病理特征的差異，并探討血清GOLPH3、VEGF水平與患者術(shù)后生存率的關(guān)系，為臨床評估MIBC的術(shù)后生存率提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料2010年4月至2016年9月我院治療的MIBC患者110例(MIBC組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：移行細(xì)胞癌；無其他惡性腫瘤；患者知情同意；膀胱部分切除術(shù)+氨甲喋呤、長春新堿、阿霉素和順鉑方案(MVAC)及吉西他濱、順鉑(GC)化療方案。排除標(biāo)準(zhǔn)：心肺功能不全，多器官衰竭或妊娠。選擇同期健康體檢者90例為對照組，兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 檢測方法MIBC患者于術(shù)前采集空腹時的外周靜脈血5 ml，健康體檢者于體檢當(dāng)日采集空腹時的外周靜脈血5 ml，靜止放置40 min，然后以1500

rpm，4 ℃，10 min的條件離心，將上層血清轉(zhuǎn)移至新的EP管中，放于-80 ℃冰箱保存。GOLPH3、VEGF以ELISA檢測。

1.3 隨訪MIBC患者出院后隨訪，每兩個月進(jìn)行一次隨訪，在隨訪過程中記錄患者是否存活，隨訪時間為36個月。在隨訪過程中未出現(xiàn)失訪病例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。血清指標(biāo)評估術(shù)后生存率的準(zhǔn)確性采用ROC曲線判斷；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析或Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組GOLPH3、VEGF水平比較MIBC組GOLPH3、VEGF水平高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 兩組GOLPH3、VEGF水平比較

2.2 不同臨床病理特征的MIBC患者GOLPH3、VEGF水平比較血清GOLPH3、VEGF水平比較，復(fù)發(fā)者高于初發(fā)者，中、高度分化者高于低度分化者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者，腫瘤數(shù)量多發(fā)者高于單發(fā)者，腫瘤直徑>3 cm者高于直徑≤3 cm者，血管淋巴浸潤者高于無血管淋巴浸潤者(P<0.05)。見表3。

表3 不同臨床病理特征MIBC患者血清GOLPH3、VEGF水平比較

2.3 不同生存情況患者血清GOLPH3、VEGF的ROC曲線隨訪期間，38例死亡(死亡組)，生存者72例(生存組)，以ROC曲線分析兩組術(shù)前血清GOLPH3、VEGF水平。術(shù)后隨訪36個月，不同預(yù)后患者血VEGF、GOLPH3 ROC曲線下面積分別為0.831、0.806，預(yù)測膀胱癌患者預(yù)后的最佳臨界值為403.67 pg/ml、412.45 ng/L，VEGF預(yù)測不同生存情況患者的靈敏度、特異度分別為72.5%、75.0%，GOLPH3預(yù)測不同生存情況患者的靈敏度、特異度分別為82.5%、65.0%。見圖1、表4。

圖1 不同生存情況患者血清GOLPH3、VEGF的ROC曲線 a.VEGF ROC曲線；b.GOLPH3 ROC曲線

表4 不同生存情況患者血清GOLPH3、VEGF的ROC曲線特征

2.4 不同血清GOLPH3、VEGF水平MIBC患者生存率比較以血清VEGF>403.67 pg/ml為臨界值，將MIBC患者分成VEGF高水平組(68例)和VEGF低水平組(42例)，VEGF高水平組術(shù)后36個月的生存率低于VEGF低水平組(P<0.05)；以血清GOLPH3>412.45 ng/L為臨界值，將MIBC患者分成GOLPH3高水平組(57例)和GOLPH3低水平組(53例)，GOLPH3高水平組術(shù)后36個月生存率低于GOLPH3低水平組(P<0.05)，見表5。

表5 不同血清GOLPH3、VEGF水平MIBC患者生存率比較

2.5 GOLPH3、VEGF與不同臨床病理特征的相關(guān)性GOLPH3、VEGF與組織分化程度、初發(fā)和復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管淋巴浸潤、腫瘤數(shù)量和大小呈正相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡和是否存在原位癌無相關(guān)性(P>0.05)。見表6。

表6 GOLPH3、VEGF與不同臨床病理特征的相關(guān)性

3 討論

膀胱癌的致病機(jī)制至今仍未闡明，MIBC易復(fù)發(fā)、預(yù)后差，因此積極探索病因，尋找有效的生物標(biāo)志物評估預(yù)后情況可以促進(jìn)不良預(yù)后膀胱癌患者的個體化治療[8]。VEGF為糖蛋白，能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞加速增殖，誘導(dǎo)血管新生[9]。在人腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)VEGF是一種主要的轉(zhuǎn)移因子，與腫瘤淋巴管的形成密切相關(guān)，Zhang 等發(fā)現(xiàn)膀胱癌中VEGF高表達(dá)，且其水平與膀胱癌侵襲、轉(zhuǎn)移正相關(guān)[10，11]，故認(rèn)為VEGF能誘導(dǎo)生成病灶淋巴管，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)移能力。人外周血的VEGF主要來源于腫瘤組織，本研究中，MIBC組VEGF高于對照組，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管淋巴浸潤患者VEGF較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無血管淋巴浸潤患者，腫瘤數(shù)量多及直徑大的患者VEGF水平升高，說明膀胱癌腫瘤組織分泌和釋放VEGF，可促進(jìn)病灶血管生成，促進(jìn)其生長直徑，還可促進(jìn)其浸潤、轉(zhuǎn)移。本研究中，復(fù)發(fā)患者VEGF高于初發(fā)患者，在中高度分化的患者中顯著高于低度分化的患者，該結(jié)果與鄭元振[12]的結(jié)論一致，提示VEGF可作為診斷膀胱癌并判斷其嚴(yán)重程度的輔助指標(biāo)。術(shù)后隨訪36個月發(fā)現(xiàn)，VEGF較最佳臨界值低的患者生存率高，且VEGF水平與組織分化程度、初發(fā)和復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管淋巴浸潤、腫瘤數(shù)量和大小正相關(guān)，說明血清VEGF水平可以用來輔助評估膀胱癌患者的術(shù)后生存率。

GOLPH3是一種高爾基體基質(zhì)蛋白，最初是在小鼠的高爾基體中發(fā)現(xiàn)，主要與蛋白質(zhì)加工和轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)[13]。近年來的研究顯示，GOLPH3在多種惡性腫瘤組織(如卵巢癌、乳腺癌和黑色素瘤等)中高表達(dá)，并且與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)[14]。GOLPH3基因過表達(dá)可以使腫瘤細(xì)胞體積增加，縮短細(xì)胞周期，GOLPH3基因敲除以后可以減小腫瘤細(xì)胞體積，加快細(xì)胞周期，提示腫瘤細(xì)胞增殖分化與GOLPH3關(guān)系密切[15]，分析其機(jī)制可能和受體酪氨酸蛋白激酶信號通路激活有關(guān)[16]。GOLPH3與腫瘤的化療耐藥有關(guān)，Zhang等[6]使用小鼠模型發(fā)現(xiàn)耐藥的MIBC組織中GOLPH3表達(dá)顯著增加，GOLPH3是miR34a的靶基因，miR34a/ GOLPH3軸的表達(dá)水平與膀胱癌的預(yù)后和復(fù)發(fā)明顯相關(guān)。最新的一項(xiàng)臨床研究表明膀胱癌患者血清中的GOLPH3明顯升高，并且腫瘤組織中GOLPH3水平與病理分級、腫瘤TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，GOLPH3可作為膀胱癌診斷的標(biāo)志物[5]。本研究中，GOLPH3與組織分化程度、初發(fā)和復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管淋巴浸潤、腫瘤數(shù)量和大小正相關(guān)，提示血清GOLPH3能夠輔助診斷膀胱癌并評價其嚴(yán)重程度。術(shù)后隨訪36個月發(fā)現(xiàn)，不同預(yù)后患者血GOLPH3 ROC曲線下面積為0.806，預(yù)測膀胱癌患者預(yù)后的最佳臨界值為412.45 ng/L，低于臨界值水平的患者生存率明顯高于高GOLPH3血清水平患者，說明血清GOLPH3水平也可以用來輔助評估膀胱癌患者的術(shù)后生存率。

綜上所述，血清膀胱癌患者的組織分化程度、初發(fā)和復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管淋巴浸潤、腫瘤數(shù)量和大小等臨床病理特征與GOLPH3、VEGF水平關(guān)系密切，通過檢測這兩種指標(biāo)的血清水平有助于評估患者的病情狀況和術(shù)后生存率。本研究的樣本量較少，后續(xù)研究還應(yīng)該擴(kuò)大樣本量、延長隨訪時間再進(jìn)行驗(yàn)證。