氣相色譜法測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量

劉中和 姚衛(wèi)波

（1.南華附二醴陵兆和醫(yī)院 湖南醴陵 412200；2.臨湘市聶市鎮(zhèn)西醫(yī)內(nèi)科診所）

1 前言

香砂養(yǎng)胃丸是一種使用率較高的中成藥， 主要藥效成分包括甘草、大棗、木香、砂仁、制半夏、茯苓、陳皮、生姜等，臨床用于胃陽(yáng)不足、濕阻氣滯所致胃痛的治療，具有溫中和胃的作用[1]。 香砂養(yǎng)胃丸在治療嘈雜不適、不思飲食、胃上部隱痛、四肢倦怠、嘔吐酸水等方面均有臨床應(yīng)用，并有相關(guān)報(bào)道[2]。 現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，香砂養(yǎng)胃丸的主要藥效成分為乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦，上述藥物能夠發(fā)揮抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗?jié)?、止瀉等功效，因而對(duì)乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦等含量水平的控制是保證藥效發(fā)揮的前提[3]。鑒于當(dāng)前藥典中沒(méi)有關(guān)于香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦含量的測(cè)定方法，本文通過(guò)氣相色譜法（GC）對(duì)香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量進(jìn)行測(cè)定，可為香砂養(yǎng)胃丸中主要成分的含量控制提供依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 儀器與材料

儀器：電子天平、氣相色譜儀。

材料：乙酸龍腦酯對(duì)照品（含量為99.60%，批號(hào)為110759-201105）、樟腦對(duì)照品（含量為98.70%，批號(hào)為110747-201409）、龍腦對(duì)照品（含量為96.80%，批號(hào)為110881-201508）（所有標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品均來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院）；環(huán)己烷、無(wú)水乙醇（分析純）；香砂養(yǎng)胃丸（從不同藥品生產(chǎn)廠家購(gòu)買，共8批，均有明確的生產(chǎn)廠家、批準(zhǔn)文號(hào)）。

2.2 方法

對(duì)香砂養(yǎng)胃丸中的乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦等含量使用GC 測(cè)定，具體如下。

（1） 色譜條件：色譜柱參數(shù)：30 m×0.320 mm×0.50 μm；進(jìn)樣口溫度：230℃；以氮?dú)鉃檩d氣，流速：4.0 mL/min；氮?dú)狻錃馀c空氣比例：1∶1∶10；進(jìn)樣量：1 μL；選擇分流進(jìn)樣，分流比：10∶1；氫火焰離子檢測(cè)器對(duì)應(yīng)溫度：280℃。通過(guò)程序完成柱溫升溫，初始柱溫：60℃，以每分鐘升高5℃升高到130℃，保持5 min，然后以每分鐘20℃升高到230℃，維持5 min。

（2）制備對(duì)照品溶液，分別稱取乙酸龍腦酯、龍腦、樟腦對(duì)照品 17.19、10.82、11.38 mg，使用無(wú)水乙醇將其制備成不同濃度的對(duì)照品，其濃度分別為乙酸龍腦酯 34.24 μg/mL、龍腦 21.49 μg/mL、樟腦45.06 μg/mL。

（3）制備供試品溶液，選取8 g 供試品，精細(xì)研磨，按照揮發(fā)油測(cè)定方法完成提取操作，加入3 mL環(huán)己烷，加熱至沸騰，持續(xù)1 h，靜置30 min，用5 mL容量瓶提取液體，使用1 mL 環(huán)己烷對(duì)揮發(fā)油測(cè)定器沖洗并倒入5 mL 容量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度線位置，充分混合后搖勻、過(guò)濾。

（4）配制對(duì)照品溶液，橫坐標(biāo)為對(duì)照品進(jìn)樣量（ng），縱坐標(biāo)為峰面積，繪制不同成分標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程。 研究證實(shí)進(jìn)樣量在一定范圍內(nèi)同峰面積有良好的線性關(guān)系。

（5）穩(wěn)定性試驗(yàn)分析，選擇配制的同一供試品溶液，并在 0、4、12、24 h 分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算不同供試品峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

（6）重復(fù)性試驗(yàn)，選擇同一供試品，將其制作成6 份供試品溶液， 分別對(duì)3 種不同成分含量水平予以測(cè)定，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的RSD。

（7）精密度試驗(yàn)分析，準(zhǔn)確吸取 1 μL 對(duì)照品溶液，根據(jù)確定的色譜分析條件進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，共6 次，計(jì)算不同成分峰面積積分值，最終得到不同成分峰面積的RSD。

（8）回收率試驗(yàn)分析，準(zhǔn)確稱取供試品6 份，其中，乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的對(duì)應(yīng)含量分別為0.017、0.011、0.039 mg/g，每份含量 4 g。 將其加入已知濃度的混合對(duì)照品溶液中， 對(duì)不同供試品回收率予以計(jì)算，確定其回收率。

（9）對(duì)8 批次的香砂養(yǎng)胃丸進(jìn)行供試品制備，然后根據(jù)色譜條件完成不同含量的測(cè)定。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS21.0 分析數(shù)據(jù)，其中，計(jì)量資料（±s），計(jì)數(shù)資料（n，%）。

3 結(jié)果

通過(guò)穩(wěn)定性試驗(yàn)分析，乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦峰面積RSD 計(jì)算結(jié)果分別為1.28%、1.43%、1.46%。重復(fù)性試驗(yàn)分析顯示，乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦對(duì)應(yīng)含量測(cè)定的RSD 分別為3.14%、2.38%、2.15%，結(jié)果證實(shí)該測(cè)定方法重復(fù)性較好。 精密度試驗(yàn)分析顯示乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦峰面積RSD 計(jì)算結(jié)果分別為0.68%、0.33%、0.63%，測(cè)定方法精密度較好?；厥章试囼?yàn)分析，乙酸龍腦酯回收率在81.85%～86.38%，平均回收率為（83.56±0.92）%；龍腦回收率在94.47%～101.46%，平均回收率為（98.24±0.81）%；樟腦回收率在 85.45%～91.92%，平均回收率為（87.15±0.84）%，具體數(shù)據(jù)詳見(jiàn)表1，結(jié)果表明該檢測(cè)方法對(duì)應(yīng)的回收率較高。通過(guò)對(duì)8 批次香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量測(cè)定，不同批次藥品上述3 種成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)有偏差，但是偏差不明顯，具體檢測(cè)結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表1 香砂養(yǎng)胃丸不同成分回收率

表2 8 批次香砂養(yǎng)胃丸不同成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)結(jié)果（單位：%）

4 討論

本研究使用GC 對(duì)香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量進(jìn)行測(cè)定分析，供試品提取時(shí)間約為1 h。 從不同角度對(duì)試驗(yàn)予以分析，結(jié)果證實(shí)本研究中所確定的色譜條件能夠滿足不同流速、升溫條件、進(jìn)樣口、檢測(cè)器溫度等條件下的測(cè)定。

通過(guò)對(duì)重復(fù)性、回收率等進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)分析，證實(shí)了GC 對(duì)香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量測(cè)定有良好的重復(fù)性、穩(wěn)定性以及較高的回收率[4]。不同批次香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯含量水平絕大多數(shù)都低于樟腦。 藥典中要求乙酸龍腦酯含量水平需要超過(guò)樟腦，考慮到藥物主要成分會(huì)直接影響療效與使用安全性，而且中藥材容易出現(xiàn)以次充好問(wèn)題以及假冒偽劣產(chǎn)品[5]，使用GC 對(duì)主要成分的含量測(cè)定能夠確認(rèn)不同批次香砂養(yǎng)胃丸的藥效成分特點(diǎn)，對(duì)提高香砂養(yǎng)胃丸的生產(chǎn)質(zhì)量具有重要價(jià)值[6]。使用GC 對(duì)香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量進(jìn)行測(cè)定，獲取的結(jié)果可直觀了解主要成分在藥物中的占比，實(shí)際應(yīng)用期間需要嚴(yán)格按照操作流程進(jìn)行，有效控制色譜氣相檢測(cè)條件。 綜上所述，GC 檢測(cè)結(jié)果安全可靠，能夠用于香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦含量的測(cè)定。