保健食品芪黃參葉片配方工藝的篩選

丁 濤 ，王 鑫，溫富春，崔 健，王宏艷，陳 新，紀(jì)鳳蘭，劉 博，徐惠波*

（1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長(zhǎng)春，130012；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春，130117；3.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬傳統(tǒng)診療醫(yī)院，長(zhǎng)春 130022）

保健食品是指聲稱具有保健功能或者以補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為目的的食品。在《“健康中國(guó)2030”規(guī)劃綱要》和《國(guó)民營(yíng)養(yǎng)計(jì)劃（2017-2030年）》中指出，針對(duì)不同人群的健康需求，應(yīng)著力發(fā)展保健食品等新型營(yíng)養(yǎng)保健食品及發(fā)展健康與食品融合的健康服務(wù)新產(chǎn)業(yè)[1-2]。當(dāng)前，我國(guó)糖尿病患者已有1.1 億人，防控形勢(shì)嚴(yán)峻。中醫(yī)學(xué)從整體出發(fā)，以氣血、陰陽(yáng)、臟腑、寒熱等進(jìn)行辨治，認(rèn)為糖尿?。ㄏ剩┎∫蛑饕獮樗伢w陰虛，飲食不節(jié)，復(fù)因情志失調(diào)，勞欲過(guò)度[3-4]，氣虛和陰虛為始動(dòng)因素，導(dǎo)致燥熱、痰濕、瘀血等；病變臟腑在肺、脾、胃、腎，以腎為主[5-10]。依據(jù)預(yù)防糖尿病的“益氣活血、滋陰補(bǔ)腎、清熱解毒”的中醫(yī)治則，從《可用于保健食品的物品名單》中，選用了補(bǔ)氣固表的黃芪，清熱涼血的生地黃，生津潤(rùn)燥，益肺和肝；培補(bǔ)元?dú)獾娜藚⑷~，活血化瘀的三七，清暑滌熱，明目；以及解毒的蔬菜苦瓜為主要原料，佐以微量的具有降血糖作用的營(yíng)養(yǎng)素添加劑——吡啶甲酸鉻，組成了輔助降血糖的保健食品——芪黃參葉片。本文通過(guò)對(duì)芪黃參葉片配方工藝的篩選、以期明確芪黃參葉片輔助降血糖作用進(jìn)行保健食品開(kāi)發(fā)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，SPF 級(jí)，26～28 g，雌雄均用，購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品研究所，許可證號(hào)：SCXK-（吉）2011-0003；購(gòu)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0018，ICR 小鼠，體質(zhì)量19～23 g，SPF 級(jí)，雄性，購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK-（吉）2011-0004。

1.2 試劑 四氧嘧啶，sigma 產(chǎn)品，Pcode：101083179。

1.3 芪黃參葉片配方工藝的設(shè)定 芪黃參葉片的配方原料中三七屬于傳統(tǒng)細(xì)貴藥材，臨床上常研末吞服。本配方的劑型設(shè)計(jì)為片劑，而片劑的制備工藝過(guò)程中需要加入一定量的輔料，為了制劑成型、增加制劑的穩(wěn)定性及有效地降低服用量和產(chǎn)品成本，將三七藥材作為部分輔料添加；而配方中黃芪的粉性僅次于三七，因此也將預(yù)擬定處方中部分黃芪藥材制備成粉末代替部分輔料。配方中其余原料進(jìn)行水提或水提醇沉，加入不同劑量的營(yíng)養(yǎng)素吡啶甲酸鉻，由此設(shè)計(jì)了三個(gè)配方工藝，得到配方1、配方2 和配方3。配方1：水提液濃縮成稠膏后直接加入三七粉和黃芪細(xì)粉各45 g，混勻，干燥成細(xì)粉，加吡啶甲酸鉻10.8 mg 配研，混勻即得。配方2：水提醇沉后的上清液濃縮成稠膏后加入三七粉和黃芪細(xì)粉各45 g，干燥成細(xì)粉，加吡啶甲酸鉻10.8 mg 配研，混勻即得。配方3：水提液濃縮成稠膏后直接加入三七粉和黃芪細(xì)粉各45 g，混勻，干燥成細(xì)粉，加吡啶甲酸鉻2.7 mg配研，混勻即得。

1.4 高血糖動(dòng)物模型的制備 取適量小鼠適應(yīng)1 d 后，隨機(jī)取15 只禁食5 h，測(cè)空腹血糖，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)血糖值。小鼠禁食24 h 后，靜脈注射四氧嘧啶（用前新鮮配制）50 mg/kg 造模，制備四氧嘧啶高血糖模型，7 d 后測(cè)血糖，血糖值＞10 mmol/L 為高血糖模型造模成功。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 篩選配方工藝的動(dòng)物試驗(yàn)方法 取高血糖模型小鼠100 只，按血糖水平隨機(jī)分組，分別為：模型組，配方1 高、中、低三個(gè)劑量組，配方2 高、中、低三個(gè)劑量組，配方3 高、中、低三個(gè)劑量組（各配方均以等同的原料處方量進(jìn)行試驗(yàn)，即為15.71 g 藥材量/kg、7.86 g 藥材量/kg、3.93 g 藥材量/kg。）每日灌胃1 次，連續(xù)灌胃45 d 后，禁食5 h，眼眶采血，用半自動(dòng)生化儀測(cè)定空腹血糖，比較各組動(dòng)物的血糖值。

1.5.2 初步驗(yàn)證篩選出的配方工藝的動(dòng)物試驗(yàn)方法 取高血糖模型小鼠52 只，按照血糖水平分組，分為模型組和配方1：高（5.5 g 藥材量/kg）、中（3.67 g藥材量/kg）、低（1.83 g 藥材量/kg ）組，每日1 次，連續(xù)灌胃30 d，禁食5 h 測(cè)空腹血糖，比較各組動(dòng)物的血糖值及血糖下降率，計(jì)算公式為血糖下降率=（試驗(yàn)前血糖值-試驗(yàn)后血糖值）/試驗(yàn)前血糖值×100%。

1.5.3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型的影響（由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具） 取雌性高血糖模型小鼠48 只，按血糖水平隨機(jī)分為模型組、芪黃參葉片高、中、低（2.25、1.50、0.75 g/kg）三個(gè)劑量組，每組12 只。每日1 次，連續(xù)灌胃30 d，禁食5 h，用血糖儀測(cè)空腹血糖值。在給予芪黃參葉片后15 min，給予2.0 g/kg 葡萄糖溶液，取尾血測(cè)定給葡萄糖后0、0.5、2 h 血糖值，計(jì)算血糖曲線下面積。血糖曲線下面積=0.25×（0 h 血糖值+0.5 h 血糖值）+0.75×（2 h 血糖值+0.5 h 血糖值）。

1.5.4 芪黃參葉片對(duì)正常動(dòng)物血糖的影響（由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具） 選用雌性小鼠24 只，禁食不禁水5 h，取尾血測(cè)定血糖值，按血糖水平隨機(jī)分為陰性對(duì)照組和1 個(gè)高劑量組，每組12 只。高劑量組給予2.25 g/kg 芪黃參葉片，陰性對(duì)照組給予純水，連續(xù)灌胃30 d 后，禁食不禁水5 h，測(cè)定空腹血糖值，觀察芪黃參葉片對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖的影響。

2 結(jié)果

2.1 不同工藝配方對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖的影響 與模型組比較，各配方灌服45 d后，配方1高、中劑量組、配方3 高劑量組能明顯抑制血糖的升高（P＜0.05 或P＜0.01）。由此可見(jiàn)，配方1 的作用效果強(qiáng)于配方2和配方3。見(jiàn)表1.

表1 不同工藝配方對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響（） mmol/L

表1 不同工藝配方對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響（） mmol/L

注：與模型組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

2.2 初步驗(yàn)證配方1 工藝的試驗(yàn)結(jié)果 調(diào)整配方1 中的劑量，即使劑量降低，動(dòng)物服用的時(shí)間縮短，配方1 高、中劑量均能明顯降低四氧嘧啶致動(dòng)物升高的血糖及血糖下降百分率。提示：可以按照配方1 的工藝進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，制備成芪黃參葉片，送檢湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)，進(jìn)行保健功能驗(yàn)證。見(jiàn)表2。

2.3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖及糖耐量的影響（由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具） 與模型組比較，芪黃參葉片高、中劑量組小鼠空腹血糖明顯降低（P＜0.01），血糖曲線下面積明顯降低（P＜0.01），可見(jiàn)芪黃參葉片具有提高高血糖小鼠糖耐量的功能。見(jiàn)表3。

表2 配方1 對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響（，n =13）

表2 配方1 對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響（，n =13）

注：與模型組比較，## P ＜0.01

表3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖及糖耐量的影響（，n =12）

表3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖及糖耐量的影響（，n =12）

注：與模型組比較，## P ＜0.01

2.4 芪黃參葉片對(duì)正常小鼠血糖的影響（由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具） 正常動(dòng)物高劑量組小鼠空腹血糖與陰性對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異，表明芪黃參葉片對(duì)正常小鼠空腹血糖無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 芪黃參葉片對(duì)正常小鼠血糖的影響（，n =12）

表4 芪黃參葉片對(duì)正常小鼠血糖的影響（，n =12）

2.5 芪黃參葉片的最佳工藝路線 根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定芪黃參葉片最佳工藝路線為：取三七45 g 和1/3 黃芪45 g，115 ℃濕熱滅菌，負(fù)壓干燥，分別粉碎成細(xì)粉，混勻，備用；剩余2/3 黃芪90 g，生地黃90 g，人參葉45 g，苦瓜180 g 等4 味原料，加水煎煮2 次，第1 次加水，浸泡1 h，煎煮1 h，濾過(guò)，第二次加水，煎煮1 h，濾過(guò)，合并濾液，負(fù)壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25 的稠膏，與備用的混合細(xì)粉混合，干燥，粉碎，得中藥混合細(xì)粉，再與吡啶甲酸鉻最細(xì)粉10.8 mg配研，混勻，以80%乙醇為潤(rùn)濕劑，制成顆粒，干燥，整粒，加硬脂酸鎂，混勻，壓片，包薄膜衣，即得。

3 討論

中國(guó)糖尿病的發(fā)病率高達(dá)9.75%[5]。中醫(yī)學(xué)對(duì)糖尿病的認(rèn)識(shí)和治療積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。保健食品芪黃參葉片依據(jù)益氣活血、清熱解毒、滋陰補(bǔ)腎的中醫(yī)治療“消渴”的理念組成的。方中黃芪歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)，固表止汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌之功；現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)了黃芪具有降血糖作用，其活性成分主要為黃芪多糖和皂苷，基于大數(shù)據(jù)的挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的用藥規(guī)律、作用機(jī)制分析，黃芪為治療糖尿病的高頻藥物，影響了淀粉和糖代謝、環(huán)鳥(niǎo)甘酸/蛋白激酶、端粒結(jié)合蛋白R(shí)ap1、神經(jīng)活性配體/受體相互作用、磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B 等信號(hào)通路[11-14]。生地黃歸心、肝、腎經(jīng)，具有清熱涼血，養(yǎng)陰生津之功；現(xiàn)代藥理學(xué)研究及臨床分析，表明生地黃在治療糖尿病處方中也屬于高頻率用藥，具有明顯的降血糖活性，參與了TGF-β/Smads 等多條信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)[13,15]。三七歸肝、胃經(jīng)，具有散瘀止血，消腫定痛之功；現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明三七及其活性成分皂苷、多糖均有明顯的治療糖尿病的作用，從調(diào)節(jié)糖代謝、抗炎、抗纖維化、抗氧化應(yīng)激等途徑抑制糖尿病的并發(fā)癥對(duì)心、腎、視網(wǎng)膜的損傷[16-17]。人參葉歸肺、胃經(jīng)，補(bǔ)氣，益肺，祛暑，生津之功；人參全草入藥，葉可以補(bǔ)肺氣，根莖可以補(bǔ)脾胃之氣，現(xiàn)代研究表明人參和人參葉有相似的化學(xué)成分和藥理活性，均具有調(diào)節(jié)血糖、提高免疫、保護(hù)心肺的作用[18-19]?？喙蠚w心、脾、胃經(jīng)，具有清暑滌熱，明目，解毒之功；苦瓜是日常食用的蔬菜，也有藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有明顯的降血糖作用，其有效成分為皂苷、多糖、多肽[20-21]。組方中人參葉與三七合用，一補(bǔ)一散，相互制約，相互為用，能益氣定痛，扶元固脫，止血化瘀，奏益氣補(bǔ)血，化瘀止痛之功。人參葉與黃芪均能補(bǔ)氣，人參大補(bǔ)元?dú)?，黃芪益氣升陽(yáng)，二藥相伍，補(bǔ)元?dú)?，生精血，化氣行水，淋病日久，氣血俱虛者用之，則小便利而淋證除。人參葉與生地黃配伍使用，提高養(yǎng)陰清熱生津之力。營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑吡啶甲酸鉻具有胰島素樣作用，可降低血糖，配黃芪、生地黃、人參葉、三七，共同起到輔助降血糖的作用。

早期糖尿病主要是血糖調(diào)節(jié)失常，空腹血糖和糖耐量受損，此時(shí)適當(dāng)干預(yù)，可以預(yù)防和延緩糖尿病的發(fā)生[22]。保健食品注冊(cè)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了芪黃參葉片對(duì)正常小鼠空腹血糖沒(méi)有影響，對(duì)高血糖動(dòng)物模型有顯著降血糖作用，也能降低給予外源性葡萄糖后，高血糖動(dòng)物體內(nèi)血糖曲線下面積，增加糖耐量。

綜上所述，本研究篩選出的芪黃參葉片配方，從中醫(yī)理論和實(shí)驗(yàn)研究角度，均能顯示其具有輔助降血糖功能的作用。