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    高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞抑制作用

    2020-11-17 02:58:36焱,劉
    吉林中醫(yī)藥 2020年7期
    關(guān)鍵詞:高良姜培養(yǎng)箱細(xì)胞株

    羅 焱,劉 丹

    (1.三峽大學(xué)附屬仁和醫(yī)院藥學(xué)部,湖北 宜昌 443001;2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,武漢 430061)

    高良姜素(Galangin,3,5,7-三羥基黃酮),是一種天然來(lái)源的黃酮醇類化合物,主要分布于中藥高良姜Alpinia officinarum Hance的干燥根莖中,高良姜味辛,性熱,因此有學(xué)者將高良姜用于細(xì)胞造熱證模型[1]。高良姜素藥理作用廣泛,具有清除自由基,抗氧化功能[2],抑制P450 酶系[3],抗致畸突變作用[4-5],抗微生物活性[6],抗病毒作用[7],心肌細(xì)胞保護(hù)作用[8]?,F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),高良姜素具有顯著的抗腫瘤活性。

    1 材料與方法

    1.1 細(xì)胞株 人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人肺癌細(xì)胞株A549、人胃癌細(xì)胞株MGC-803、人前列腺癌細(xì)胞PC-3、人黑色素瘤細(xì)胞株A875、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、人肝癌細(xì)胞株HepG-2,購(gòu)于武漢大學(xué)典型培養(yǎng)物保藏中心,保存于湖北中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與中藥化學(xué)湖北省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

    1.2 藥物與試劑 高良姜素(實(shí)驗(yàn)室自制,經(jīng)液相檢測(cè)純度>98%),DMEM 培養(yǎng)液(美國(guó)Gibco 公司,批號(hào):8416246),胎牛血清(FBS,美國(guó)Gibco 公司,批號(hào):1715752),胰酶(含0.25%EDTA,上海源培生物科技有限公司,批號(hào):G40308),DMSO(細(xì)胞級(jí),美國(guó)Gibco 公司,批號(hào):RNBC9664),PBS(美國(guó)Gibco 公司,批號(hào):NAF1410),MTT(美國(guó)Sigma公司,批號(hào):2128),其他試劑未經(jīng)說(shuō)明均為分析純,試驗(yàn)時(shí)直接使用。

    1.3 儀器 超凈臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司),XDS-1B 倒置顯微鏡(重慶光電儀器公司),HH-CP-01 型CO2培養(yǎng)箱(上海百典儀器有限公司),Model680 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)BIO-RAD),十萬(wàn)分之一分析天平(BP-211D,德國(guó)Sartorius 公司),超聲波清洗儀(KQ3200DE,昆山市超聲儀器有限公司),恒溫水浴鍋(金壇市易晨?jī)x器制造有限公司),離心機(jī)(大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司),高壓滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠)。

    2 方法

    2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 分別取凍存好的腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇以后,在含有10% FBS 的DMEM 培養(yǎng)液的培養(yǎng)基,37℃,5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每2 d 換1 次培養(yǎng)基,細(xì)胞長(zhǎng)滿即可傳代培養(yǎng)。

    2.2 MTT 法檢測(cè)高良姜素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用 分別取生長(zhǎng)狀態(tài)良好處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)板將細(xì)胞密度調(diào)整為60 000/mL,接種在96 孔板,每孔100 μL。每孔加入10 μL 藥液,藥液分為6 個(gè)濃度,最終濃度為5、10、20、40、80、160 μmol/L,每個(gè)濃度設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔,同時(shí)設(shè)置細(xì)胞對(duì)照組,空白調(diào)零組。在培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24 h、48 h 后,每孔加入10 μL MTT,在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育3~ 4 h 后在490 nm 處測(cè)定吸光度,測(cè)定前吸走舊培養(yǎng)基,然后每孔加入100 μL DMSO,試驗(yàn)重復(fù)3 次。

    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,多組間比較采用單因素方差分析,以P< 0.05 認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    經(jīng)高良姜素處理A549、A875、HepG-2、Hela、MCF-7、PC-3 和MGC-803 共7 種腫瘤細(xì)胞,均表現(xiàn)出不同程度的增殖抑制作用。分別作用24 h、48 h 后,腫瘤細(xì)胞對(duì)高良姜素均表現(xiàn)出了不同的敏感度,腫瘤細(xì)胞顯示出了一定的體外抑制活性,并且隨著藥物濃度增加,細(xì)胞增殖抑制率隨之增加,表現(xiàn)出了濃度依賴性。對(duì)比24 h 與48 h 抑制效果,48 h 抑制效果優(yōu)于24 h,呈現(xiàn)出了時(shí)間依賴性。高良姜素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用結(jié)果,見(jiàn)表1~表2,IC50見(jiàn)表3。

    表1 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用24 h 抑制率(,n =3) %

    表1 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用24 h 抑制率(,n =3) %

    注:與細(xì)胞對(duì)照組比較,# P <0.05,## P <0.01

    表2 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用48 h 抑制率(,n =3) %

    表2 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用48 h 抑制率(,n =3) %

    注:與細(xì)胞對(duì)照組比較,# P <0.05,## P <0.01

    表3 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用IC50 μmol/L

    4 討論

    高良姜素對(duì)這7 類腫瘤細(xì)胞抑制作用中,最敏感的腫瘤細(xì)胞為MCF-7,其次為HepG-2、MGC-803、A549、Hela、PC-3,敏感度較差的為A875。結(jié)果表明:高良姜素是一個(gè)具有廣譜抗腫瘤作用的黃酮醇類化合物,不少黃酮類化合物均表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤活性[9],并且高良姜素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用呈現(xiàn)出了濃度與時(shí)間依賴性。有關(guān)高良姜素抗腫瘤作用近年來(lái)研究比較廣泛,高良姜素可以通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[10-11]、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞自噬[12]、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[13]以及周期阻滯[14]等途徑發(fā)揮抗腫瘤作用[15]。此外,還有學(xué)者研究了高良姜素對(duì)宮頸癌細(xì)胞[16]、人胃癌細(xì)胞[17]、人肝癌細(xì)胞[18]、口腔癌細(xì)胞[19]、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤[20]的抑制作用及其作用機(jī)制,高良姜素對(duì)同一腫瘤細(xì)胞不同亞型作用效果也不盡相同。高良姜素是通過(guò)哪些途徑或者哪種作用機(jī)制對(duì)上述的腫瘤細(xì)胞發(fā)揮抑制作用需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

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