基于GC-MS的陳皮不同炮制品揮發(fā)性成分定性研究△

潘盼盼，孫戡平，鄭艷萍，金俊杰，李淑佩

1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院(南京市婦幼保健院)，江蘇 南京 210004；2.南京海昌中藥集團(tuán)有限公司，江蘇 南京 210061；3.江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京 210029

陳皮為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮，有理氣健脾、燥濕化痰的功效[1]，臨床用于脘腹脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多的治療[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)表明，陳皮具有抗炎[3]、抗氧化[4]、抗心血管疾病[5]等作用，其有效成分主要為揮發(fā)油及黃酮[6]。研究報(bào)道陳皮含揮發(fā)油1.5%(壓榨法)至2%(蒸餾法)，揮發(fā)油主要是由D-檸檬烯、β-月桂烯、α-及β-蒎烯等，另含黃酮類成分橙皮苷、新橙皮苷、柑橘素、二氫川陳皮素等；其中川陳皮含橙皮苷約8.4%，川陳皮素約0.15%。揮發(fā)油是廣陳皮中除黃酮類化合物外另一重要的活性物質(zhì)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.9%～3.5%，陳皮揮發(fā)油中主要成分為右旋檸檬烯、檸檬醛，還含有川皮酮、橙皮苷、肌醇、維生素Bx等。大量研究表明，陳皮揮發(fā)油有抗氧化、抗菌、祛痰、平喘、促進(jìn)消化液分泌、排除腸內(nèi)積氣、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和利膽等功效。

《中華人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)2015年版中對(duì)陳皮含量檢測(cè)只規(guī)定了黃酮類成分橙皮苷的檢測(cè)，對(duì)其揮發(fā)油成分沒有監(jiān)控，查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，陳皮揮發(fā)油成分研究的相關(guān)報(bào)道也局限于不同產(chǎn)地[7]、不同提取方法[8-9]等方面，缺乏對(duì)陳皮不同炮制方法[10]的比較研究。本實(shí)驗(yàn)選取了陳皮醋制、麩炒、蜜制、土炒4種炮制品，以水蒸氣蒸餾法提取陳皮炮制品中揮發(fā)油并通過氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析，初步探討4種陳皮炮制品中揮發(fā)性成分的種類。

1 材料

1.1 儀器

SXHW型電熱套(鞏義市英峪予華儀器廠)；HP6890N.GC15973N型氣質(zhì)聯(lián)用分析儀(安捷倫科技有限公司)；十萬分之一精度電子分析天平、萬分之一精度天平(Sedoris公司)；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；XL-10B型500 g密封搖擺式粉碎機(jī)(廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司)；CKN7630J 30 CM型炒鍋(浙江炊大王炊具有限公司)；YE187AL1168351型移液器(大龍星創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

1.2 試藥

陳皮藥材取于南京海源中藥飲片有限公司，批號(hào)：181006，產(chǎn)地浙江，按《中國(guó)藥典》2015年版一部及四部標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果符合規(guī)定。

純水為南京海昌中藥集團(tuán)有限公司制劑車間所制備的純化水；陳醋(總酸質(zhì)量濃度≥40.0 g·L-1，山西水塔醋業(yè)股份有限公司)；蜂蜜(產(chǎn)地：山東菏澤，山東省歸農(nóng)養(yǎng)蜂股份有限公司)；麥麩(產(chǎn)地：浙江金華，晨曦飼料二部)；灶心土(產(chǎn)地：河北保定，康德瑞琪旗艦店)；花雕酒(酒精度≥12%，產(chǎn)地：浙江紹興，浙江古越龍山紹興股份有限公司)；氦氣、氧氣純度≥99.999 9%；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 陳皮不同炮制樣品制備

2.1.1醋制陳皮 稱取陳皮藥材100 g，加入陳醋337.5 mL，拌勻，稍悶潤(rùn)30 min后轉(zhuǎn)移至炒鍋內(nèi)，用文火(240 ℃)炒制30 min，取出攤放，并篩去碎屑。

2.1.2麩炒陳皮 稱取陳皮藥材100 g，麥麩10 g，將鍋加熱至70 ℃左右后撒入麥麩，見麥麩冒煙時(shí)，迅速將陳皮傾入鍋中，后以中火(120～150 ℃)將陳皮和麥麩快速地拌炒均勻，至將陳皮表面炒成棕黃色時(shí)即可，取出攤放，篩去麥麩以及碎屑。

2.1.3蜜制陳皮 1)配制輔料：稱取生蜜40 g，煉蜜20 g，花雕酒10 g，水20 g，生蜜、酒和水混合備用。2)輔料浸潤(rùn)：稱取陳皮100 g至悶潤(rùn)容器中，加入上述混合輔料拌勻、浸潤(rùn)；悶潤(rùn)至混合輔料被吸收殆盡。3)炙炒：將悶潤(rùn)后的陳皮轉(zhuǎn)移到炒鍋內(nèi)，以文火炒至手按覺硬度為宜，約八分干時(shí)，將煉蜜倒至陳皮上進(jìn)行拌炒，炒至陳皮表面呈蜜樣光澤，觸之不粘手，以握之成團(tuán)，撒手即散為度，取出攤放，并篩去碎屑。

2.1.4土炒陳皮 稱取陳皮藥材100 g，灶心土30 g，在加熱至100 ℃左右的熱鍋中均勻地撒入灶心土，不斷轉(zhuǎn)動(dòng)炒鍋，至其呈流化狀態(tài)，此時(shí)鍋溫約220 ℃，將稱好的100 g陳皮倒入炒鍋內(nèi)，待陳皮表面被炒成焦黃色時(shí)，取出藥材，放涼，篩去灶心土。

2.2 色譜條件

HP-5MS色譜柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；載氣為高純氦氣；進(jìn)樣量1 μL；分流比300∶1；程序升溫條件：柱溫60 ℃，停留3 min，以1 ℃·min-1升溫至80 ℃，維持3 min，再以5 ℃·min-1升溫至125 ℃。

電離方式為電子轟擊離子源(EI)，電子能量70 eV，離子源溫度為230 ℃，四級(jí)桿溫度150 ℃，掃描質(zhì)量范圍m/z：30～550。

2.3 GC-MS檢測(cè)

2.3.1提取方法 稱取各陳皮炮制樣品粉末150 g，置2000 mL圓底燒瓶中，加入1350 mL純化水，按水蒸氣蒸餾法(《中國(guó)藥典》2015年版一部附錄XD方法)提取陳皮中所含揮發(fā)油，經(jīng)3～4 h加熱回流直至揮發(fā)油不再增加，再將所得揮發(fā)油用無水Na2SO4干燥即得。

2.3.2測(cè)定方法 將脫水后的揮發(fā)油加甲醇稀釋4倍，進(jìn)樣量1 μL，按照2.2色譜條件檢測(cè)，得到陳皮炮制品GC-MS圖，見圖1，直接用設(shè)備的數(shù)據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行檢索(美國(guó)NIST 2.0譜庫(kù))，并用標(biāo)準(zhǔn)圖譜結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)比較，確定其成分，具體成分見表1。

圖1 陳皮樣品GC-MS圖

表1 陳皮不同炮制品揮發(fā)油含量測(cè)定結(jié)果

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

3 分析與討論

將4種陳皮的炮制品相應(yīng)GC-MS譜圖與NIST 2.0譜庫(kù)進(jìn)行數(shù)據(jù)檢索、比對(duì)，進(jìn)行數(shù)據(jù)整理分析后發(fā)現(xiàn)，在這4種炮制陳皮中測(cè)定到的揮發(fā)性成分共有180種，其中含量最高的揮發(fā)性成分均為柑橘檸烯(D-limoneoe)，柑橘檸烯是1種單萜類化合物，能夠通過抑制腫瘤微血管形成、誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡來抑制體內(nèi)胃癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[11]；醋制陳皮和土炒陳皮柑橘檸烯含量最高，分別為76.86%和72.56%。其他含量較高的揮發(fā)性成分有萜品烯(土炒9.88%)、松油醇(蜜制12.05%)、(4R)-1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)-環(huán)己烯(麩炒38.61%)等[11]；另外，通過不同輔料炮制后共有的化合物有18種，新出現(xiàn)的化合物有94種，如麩炒陳皮中的guaia-9，11-diene，土炒陳皮中的9-methyl-nonadecane等，說明陳皮的炮制對(duì)其揮發(fā)性成分影響較為顯著，其含量和組分都發(fā)生了變化，這可能是影響不同陳皮炮制品藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。