下肢動脈硬化閉塞癥患者支架植入術(shù)后外周血單個核細(xì)胞中SIRT7水平變化及意義

徐永平，陳偉彬，陳俊卯，王長友，楊德久

華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院，河北唐山063000

下肢動脈硬化閉塞癥(LASO)是一種因下肢動脈粥樣硬化斑塊形成堵塞血管導(dǎo)致下肢慢性缺血的疾病，臨床主要表現(xiàn)為間歇性跛行、麻木及靜息痛等，嚴(yán)重時可進(jìn)展為缺血性潰瘍或壞疽[1,2]。支架植入術(shù)是治療LASO的主要方法之一，具有效果顯著、創(chuàng)傷小、術(shù)后恢復(fù)快等特點[3]。近年研究表明，LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄率高達(dá)40%～60%，嚴(yán)重影響患者預(yù)后[4]。沉默信息調(diào)節(jié)因子7(SIRT7)是sirtuins家族中一員，主要表達(dá)于核仁中，參與細(xì)胞衰老、腫瘤及應(yīng)激反應(yīng)等過程[5]。有研究報道SIRT7可調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移[6]。應(yīng)激反應(yīng)、血管平滑肌細(xì)胞異常增殖或遷移均與動脈粥樣硬化密切相關(guān)，可導(dǎo)致血管腔狹窄[7,8]。目前，鮮見SIRT7與LASO支架植入術(shù)后血管再狹窄的報道。2020年5月，我們探究SIRT7與血管再狹窄的關(guān)系，以期為預(yù)測LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年2月—2019年5月于華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院就診的198例LASO患者，根據(jù)《下肢動脈硬化閉塞癥診治指南》[9]診治LASO。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首次經(jīng)CT血管造影檢查確診為LASO；②年齡<80歲；③能夠配合完成研究所需檢查項目；④臨床資料完整；⑤簽署了知情同意書。排除資料：①高同型半胱氨酸血癥史；②嚴(yán)重肝、腎功能異常；③合并大動脈炎癥；④支架植入術(shù)后未規(guī)律服用抗血小板聚集藥物；⑤合并惡性腫瘤；⑥未接受支架植入術(shù)治療。198例LASO患者中男127例、女71例，年齡37～78(58.39±7.14)歲?；颊呔Ｒ?guī)消毒、鋪巾，麻醉，采用Seldinger法穿刺股動脈，行球囊擴(kuò)張血管成形術(shù)，針對血管殘余狹窄率>30%的患者給予支架植入術(shù)治療。支架植入術(shù)后，患者均醫(yī)囑規(guī)律服用氯吡格雷(75 mg/d)和阿司匹林(100 mg/d)6個月，之后規(guī)律服用阿司匹林。采用復(fù)診方式了解LASO患者支架植入術(shù)后1年血管再狹窄情況，每6個月復(fù)診1次。本研究將支架內(nèi)及兩端5 mm內(nèi)血管腔狹窄率≥50%定義為支架內(nèi)再狹窄，根據(jù)是否存在血管內(nèi)再狹窄將LASO患者分為狹窄組63例和對照組135例。本研究經(jīng)華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)(批號：YXLL201602076)。

1.2 外周血單個核細(xì)胞中SIRT7水平檢測 抽取LASO患者支架植入術(shù)前和術(shù)后7 d空腹肘靜脈血10 mL，25 ℃ 800 r/min離心15 min，提取離心后下層沉淀。采用Ficoll密度梯度離心法[10]分離外周血單個核細(xì)胞，將離心后下層沉淀置于10 mL Ficoll分離液中，從中分離出單個核細(xì)胞。采用蛋白質(zhì)免疫印跡法[11]檢測單個核細(xì)胞中SIRT7水平。將RIPA裂解液滴至單個核細(xì)胞中，裂解細(xì)胞獲取總蛋白，然后用BCA蛋白定量試劑盒定量。用10%SDS-PAGE分離膠電泳，電壓由80 V加至120 V，直至溴酚藍(lán)跑出膠面。然后用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡，300 mA轉(zhuǎn)膜60 min，用5%脫脂牛奶封閉1 h。滴加一抗(1∶1 000)，4 ℃孵育過夜；滴加二抗(1∶5 000)，室溫下孵育1 h。用ELC發(fā)光液曝光顯影，然后用Image J軟件分析實驗結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料比較 狹窄組和對照組年齡分別為(58.65±7.30)、(58.27±7.09)歲，男性占比分別為57.14%(36/63)、67.41%(91/135)，女性占比分別為42.86%(27/63)、32.59%(44/135)，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)分別為(23.90±2.84)、(23.88±2.78)kg/m2，高血壓史占比分別為49.21%(31/63)、49.63%(67/135)，高脂血癥史占比分別為74.60%(47/63)、77.78%(105/135)，糖尿病史占比分別為25.40%(16/63)、25.19%(34/135)，冠心病史占比分別為25.40%(16/63)、33.33%(45/135)，缺血性卒中史占比分別為22.22%(14/63)、27.41%(37/135)，單肢病變占比分別為77.78%(49/63)、82.96%(112/135)，雙肢病變占比分別為22.22%(14/63)、17.04%(23/135)，髂-股動脈段病變占比分別為47.62%(30/63)、43.70%(59/135)，腘動脈及遠(yuǎn)端段病變占比分別為52.38%(33/63)、56.30%(76/135)，血管病變長度分別為(7.94±2.12)、(6.37±1.89)cm，完全閉塞占比分別為47.62%(30/63)、25.19%(34/135)。兩組在年齡、性別、BMI、高血壓史、高脂血癥史、糖尿病史、冠心病史、缺血性卒中史、病變肢數(shù)和病變位置方面比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。狹窄組血管病變長度和完全閉塞占比高于對照組(P均<0.05)。

2.2 兩組手術(shù)前后SIRT7水平比較 狹窄組手術(shù)前后SIRT7相對表達(dá)量分別為0.47±0.11、0.66±0.19，對照組手術(shù)前后SIRT7相對表達(dá)量分別為0.45±0.11、1.01±0.32，兩組術(shù)后SIRT7水平均較術(shù)前升高(P均<0.05)，狹窄組術(shù)后SIRT7水平低于對照組(P<0.05)。

2.3 SIRT7評價LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的價值 術(shù)前SIRT7診斷LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的ROC曲線下面積(AUC)、最佳截斷點、靈敏度和特異度分別為0.555(95%CI：0.483～0.626)、0.53、26.98%和85.19%。術(shù)后SIRT7診斷LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的ROC AUC、最佳截斷點、靈敏度和特異度分別為0.834(95%CI：0.775～0.883)、0.81、82.54%和75.56%。術(shù)后SIRT7診斷LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的效能高于術(shù)前SIRT7(Z=5.556，P<0.01)。

2.4 影響LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的因素 將血管病變長度、完全閉塞和術(shù)后SIRT7作為自變量，將LASO患者支架植入術(shù)后是否發(fā)生血管再狹窄作為因變量納入Logistic回歸分析，結(jié)果顯示血管病變長度、完全閉塞是LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的獨立危險因素(P均<0.05)，術(shù)后SIRT7是LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的獨立保護(hù)因素(P<0.05)，見表1。

表1 影響LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的Logistic回歸分析

2.5 SIRT7與LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的關(guān)系 限制性立方樣條擬合Logistic回歸分析結(jié)果顯示節(jié)點個數(shù)為5時，AIC值最小(AIC=181.252)，術(shù)后SIRT7與血管再狹窄有關(guān)(χ2=33.60，P<0.001)，且呈非線性關(guān)系(χ2=14.43，P=0.002)。以術(shù)后SIRT7診斷LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的最佳截斷點為參考點，當(dāng)SIRT7<0.81時，與SIRT7=0.81比較，發(fā)生血管再狹窄的風(fēng)險增加；當(dāng)SIRT7>0.81時，與SIRT7=0.81比較，發(fā)生血管再狹窄的風(fēng)險降低。

3 討論

LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的發(fā)生率較高，馬強(qiáng)等[12]研究顯示，LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的發(fā)生率為44.86%。本研究結(jié)果顯示，LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的發(fā)生率低于上述研究結(jié)果，推測其差異可能與地域、樣本量及個體差異等因素有關(guān)。

研究顯示，SIRT7在應(yīng)激反應(yīng)、血管平滑肌異常增殖和遷移方面均發(fā)揮一定調(diào)節(jié)作用[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，狹窄組術(shù)后外周血單個核細(xì)胞中SIRT7水平低于對照組，提示SIRT7可能參與LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄。本研究結(jié)果顯示，術(shù)后SIRT7診斷血管再狹窄的AUC、靈敏度和特異度分別為0.834、82.54%和75.56%，表明術(shù)后SIRT7評價血管再狹窄的效能較高，但特異度偏低。

研究顯示，高血壓、糖尿病等是LASO患者支架植入術(shù)后再狹窄的危險因素[13]。本研究結(jié)果顯示，狹窄組和對照組在高血壓史和糖尿病史方面比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，推測其原因可能與樣本量大小和地域等因素有關(guān)。孫波等[14]研究顯示，下肢動脈病變長度和下肢動脈完全閉塞是支架植入術(shù)后血管再狹窄的危險因素。本研究結(jié)果顯示，血管病變長度、完全閉塞是LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的獨立危險因素，與上述研究結(jié)果一致。此外，本研究結(jié)果還顯示，術(shù)后SIRT7是LASO患者支架植入術(shù)后血管再狹窄的獨立保護(hù)因素，其原因可能是高SIRT7水平降低了應(yīng)激反應(yīng)對血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥損傷，此外，高SIRT7水平還可抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，進(jìn)而抑制支架植入術(shù)后血管再狹窄。限制性立方樣條擬合Logistic回歸分析結(jié)果顯示，術(shù)后SIRT7與血管再狹窄呈非線性關(guān)系，當(dāng)SIRT7<0.81時，發(fā)生血管再狹窄的風(fēng)險增加；當(dāng)SIRT7>0.81時，發(fā)生血管再狹窄的風(fēng)險降低。

綜上所述，LASO患者支架植入術(shù)后外周血單個核細(xì)胞中SIRT7水平低，檢測SIRT7水平有助于血管再狹窄評價。