紙片擴(kuò)散法檢測(cè)MRSA 耐藥性的臨床意義

康玲燕 梁艷芝 康俊芳

金川集團(tuán)公司職工醫(yī)院，甘肅 金昌 737100

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）可引起肺炎、中耳炎、膿毒血癥、腦膜炎等嚴(yán)重感染，是一種毒性較強(qiáng)的細(xì)菌。在中老年人、兒童、燒傷患者、免疫系統(tǒng)功能障礙患者中較為常見(jiàn)，現(xiàn)已成為誘發(fā)社區(qū)感染及醫(yī)院感染的重要致病菌。有報(bào)道指出，MRSA 對(duì)四環(huán)素類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)等的抗生素呈現(xiàn)耐藥，雖然萬(wàn)古霉素等糖肽類(lèi)抗生素在MRSA 治療中效果顯著，但隨著其應(yīng)用的廣泛，MRSA 對(duì)其敏感度也明顯下降［1］。若要有效地避免和控制MRSA 感染，及時(shí)、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法至關(guān)重要，全自動(dòng)微生物分析儀、頭孢西丁紙片擴(kuò)散法、免疫學(xué)檢測(cè)等，均為臨床常用的MRSA 檢測(cè)方法，本文將以我院2019 年1 月至2020 年1 月提取分離的268 株金黃色葡萄球菌為研究樣本，對(duì)紙片擴(kuò)散法在MRSA 臨床檢測(cè)和耐藥性研究方面的應(yīng)用價(jià)值和意義進(jìn)行探究，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料 研究樣本為2019 年1 月至2020 年1月我院分離的268 株金黃色葡萄球菌，采用頭孢西丁紙片擴(kuò)散法和Vitek 全自動(dòng)微生物分析儀分別進(jìn)行檢測(cè)。268 株金黃色葡萄球菌以ATCC25923 為對(duì)照組，采用PCR 法進(jìn)行mecA 實(shí)驗(yàn)室基因檢測(cè)，其中陽(yáng)性菌株194 株，陰性菌株74 株。

1.2 方法 Vitek 全自動(dòng)微生物分析儀：操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，采用Vitek 2 Compact 微生物分析儀及藥敏板進(jìn)行檢測(cè)。頭孢西丁紙片擴(kuò)散法：采用無(wú)菌生理鹽水溶液配成0.5 麥?zhǔn)蠁挝坏募?xì)菌懸液，在瓊脂平板（90mm）均勻涂抹放置，待水分充分吸收后，經(jīng)頭孢西丁紙片貼于瓊脂表面，35℃孵育24 小時(shí)。抑菌環(huán)直徑≥20mm 為敏感，≤19mm 為耐藥。MH 瓊脂平板、頭孢西丁紙片（30μg）購(gòu)自英國(guó)Qxoid 公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0 對(duì)收集的數(shù)據(jù)加以分析，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MRSA 檢出率對(duì)比 Vitek 全自動(dòng)微生物分析儀檢出陽(yáng)性菌株194 株，陰性菌株74 株，檢出率為72.39%（194/268）。頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢出陽(yáng)性菌株194株；陰性菌株74 株，檢出率為72.39%（194/268）。

2.2 MRSA 抗菌藥物耐藥率 MRSA 對(duì)替考拉寧、萬(wàn)古霉素的耐藥性均為0；對(duì)慶大霉素、青霉素、左旋氧氟沙星等均存在較高的耐藥性。見(jiàn)表1。

3 討論

金黃色葡萄球菌是導(dǎo)致人和動(dòng)物感染的重要病原菌，在自然界中廣泛存在，且致病力較強(qiáng)。1961 年，首株 MRSA 被學(xué)者發(fā)現(xiàn)，20 世紀(jì)70 年代MRSA 感染率急劇上升，給人們生命安全造成了嚴(yán)重威脅［2］。在介入治療、免疫抑制劑、抗菌藥物廣泛應(yīng)用的背景下，MRSA菌株數(shù)量不斷增多，容易引發(fā)膿毒血癥、血流感染等相關(guān)社區(qū)或醫(yī)院感染。不僅如此，有報(bào)道指出MRSA 對(duì)克林霉素、氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)等非β 內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素呈多重耐藥，且在胸腹水、腦脊液、咽拭子、分泌物和血液中均有檢出，一定程度上增加感染患者死亡風(fēng)險(xiǎn)，提高臨床治療難度?，F(xiàn)階段MRSA 感染仍然是重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一［3-4］。本次研究結(jié)果顯示，頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢出率與Vitek 全自動(dòng)微生物分析儀檢測(cè)、PCR 法mecA 實(shí)驗(yàn)室基因檢測(cè)相同，MRSA 對(duì)替考拉寧、萬(wàn)古霉素的耐藥性均為0；對(duì)慶大霉素、青霉素、左旋氧氟沙星等均存在較高的耐藥性。紙片擴(kuò)散法具有成本低廉、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，最早采用甲氧西林作為藥敏紙片，但經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐可知，甲氧西林藥物容易降解，因此容易存在誤差，影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。頭孢西丁屬于頭霉素抗菌藥物，不受β-內(nèi)酰胺酶的影響，可誘導(dǎo)mecA 基因的表達(dá)，在MRS 檢測(cè)中具有很高的準(zhǔn)確性。全自動(dòng)微生物儀是一種常規(guī)的MRSA檢測(cè)方法，特異性和敏感性較高，但價(jià)格普遍較為昂貴。本次研究發(fā)現(xiàn)，Vitek 全自動(dòng)微生物分析儀和頭孢西丁紙片擴(kuò)散法MRSA 檢出率無(wú)差異，可采用便捷、成本較為低廉的頭孢西丁紙片擴(kuò)散法代替微生物分析儀在基層社區(qū)或醫(yī)院進(jìn)行MRSA 檢測(cè)。

表1 194 株MRSA 抗菌藥物耐藥率

MRSA 耐藥性具有多重性和不均一性，對(duì)多數(shù)種類(lèi)抗菌藥物都有著耐藥性。有學(xué)者研究指出，萬(wàn)古霉素是MRSA 感染治療的首選藥物，MRSA 對(duì)左氧氟沙星、慶大霉素、磺胺甲惡唑、克林霉素、頭孢唑啉、氨芐西林等耐藥率均在60%以上，呋喃妥因、利福平的耐藥率也較為顯著［5］。在重癥MRSA 感染患者治療中，可聯(lián)合呋喃妥因和利福平進(jìn)行治療，其中呋喃妥因適用于尿路感染和腸道感染患者，可提高臨床治療效果，防止細(xì)菌耐藥問(wèn)題發(fā)生；復(fù)方磺胺甲惡唑適用于輕、中度感染患者，但由于該藥只能口服、起效慢，因此不適用于全身治療。在甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌中，含有PBPs，即與β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素親和力高的青霉素結(jié)合蛋白，在細(xì)菌保持正常形態(tài)、生長(zhǎng)繁殖方面起重要作用，參與細(xì)胞壁粘肽層的合成，具有轉(zhuǎn)肽酶或羥肽酶作用，是細(xì)菌繁殖、生長(zhǎng)所必需的。MRSA 通過(guò)獲得mecA基因?qū)Ζ?內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥機(jī)制，但多重耐藥機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚未明確，可知獲得外界耐藥基因是MRSA 產(chǎn)生多重耐藥的重要途徑。由于MRSA所具有耐藥性，因此在臨床治療中應(yīng)選用聯(lián)合用藥方案，切記亂用、濫用抗生素，最大限度保護(hù)萬(wàn)古霉素等對(duì)MRSA 的抗菌活性，防止其敏感度下降。

頭孢西丁紙片擴(kuò)散法在MRSA 檢測(cè)中具有較高的準(zhǔn)確性，且具有操作便捷、有效等應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，是MRSA可行、可靠的檢測(cè)方法，與Vitek 微生物分析儀檢測(cè)法的檢出率無(wú)差異，值得推廣。同時(shí)，MRSA 對(duì)大多數(shù)抗菌藥物耐藥，在臨床治療過(guò)程中，應(yīng)根據(jù)檢測(cè)結(jié)果選用恰當(dāng)、有效的抗菌藥物。