紙片擴散法檢測MRSA 耐藥性的臨床意義

康玲燕 梁艷芝 康俊芳

金川集團公司職工醫(yī)院，甘肅 金昌 737100

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）可引起肺炎、中耳炎、膿毒血癥、腦膜炎等嚴重感染，是一種毒性較強的細菌。在中老年人、兒童、燒傷患者、免疫系統(tǒng)功能障礙患者中較為常見，現(xiàn)已成為誘發(fā)社區(qū)感染及醫(yī)院感染的重要致病菌。有報道指出，MRSA 對四環(huán)素類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類等的抗生素呈現(xiàn)耐藥，雖然萬古霉素等糖肽類抗生素在MRSA 治療中效果顯著，但隨著其應用的廣泛，MRSA 對其敏感度也明顯下降［1］。若要有效地避免和控制MRSA 感染，及時、準確的檢測方法至關(guān)重要，全自動微生物分析儀、頭孢西丁紙片擴散法、免疫學檢測等，均為臨床常用的MRSA 檢測方法，本文將以我院2019 年1 月至2020 年1 月提取分離的268 株金黃色葡萄球菌為研究樣本，對紙片擴散法在MRSA 臨床檢測和耐藥性研究方面的應用價值和意義進行探究，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料 研究樣本為2019 年1 月至2020 年1月我院分離的268 株金黃色葡萄球菌，采用頭孢西丁紙片擴散法和Vitek 全自動微生物分析儀分別進行檢測。268 株金黃色葡萄球菌以ATCC25923 為對照組，采用PCR 法進行mecA 實驗室基因檢測，其中陽性菌株194 株，陰性菌株74 株。

1.2 方法 Vitek 全自動微生物分析儀：操作步驟嚴格按照說明書進行，采用Vitek 2 Compact 微生物分析儀及藥敏板進行檢測。頭孢西丁紙片擴散法：采用無菌生理鹽水溶液配成0.5 麥氏單位的細菌懸液，在瓊脂平板（90mm）均勻涂抹放置，待水分充分吸收后，經(jīng)頭孢西丁紙片貼于瓊脂表面，35℃孵育24 小時。抑菌環(huán)直徑≥20mm 為敏感，≤19mm 為耐藥。MH 瓊脂平板、頭孢西丁紙片（30μg）購自英國Qxoid 公司。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0 對收集的數(shù)據(jù)加以分析，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 MRSA 檢出率對比 Vitek 全自動微生物分析儀檢出陽性菌株194 株，陰性菌株74 株，檢出率為72.39%（194/268）。頭孢西丁紙片擴散法檢出陽性菌株194株；陰性菌株74 株，檢出率為72.39%（194/268）。

2.2 MRSA 抗菌藥物耐藥率 MRSA 對替考拉寧、萬古霉素的耐藥性均為0；對慶大霉素、青霉素、左旋氧氟沙星等均存在較高的耐藥性。見表1。

3 討論

金黃色葡萄球菌是導致人和動物感染的重要病原菌，在自然界中廣泛存在，且致病力較強。1961 年，首株 MRSA 被學者發(fā)現(xiàn)，20 世紀70 年代MRSA 感染率急劇上升，給人們生命安全造成了嚴重威脅［2］。在介入治療、免疫抑制劑、抗菌藥物廣泛應用的背景下，MRSA菌株數(shù)量不斷增多，容易引發(fā)膿毒血癥、血流感染等相關(guān)社區(qū)或醫(yī)院感染。不僅如此，有報道指出MRSA 對克林霉素、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類等非β 內(nèi)酰胺類抗生素呈多重耐藥，且在胸腹水、腦脊液、咽拭子、分泌物和血液中均有檢出，一定程度上增加感染患者死亡風險，提高臨床治療難度。現(xiàn)階段MRSA 感染仍然是重要的公共衛(wèi)生問題之一［3-4］。本次研究結(jié)果顯示，頭孢西丁紙片擴散法檢出率與Vitek 全自動微生物分析儀檢測、PCR 法mecA 實驗室基因檢測相同，MRSA 對替考拉寧、萬古霉素的耐藥性均為0；對慶大霉素、青霉素、左旋氧氟沙星等均存在較高的耐藥性。紙片擴散法具有成本低廉、操作簡便的特點，最早采用甲氧西林作為藥敏紙片，但經(jīng)過長期臨床實踐可知，甲氧西林藥物容易降解，因此容易存在誤差，影響檢測的準確性。頭孢西丁屬于頭霉素抗菌藥物，不受β-內(nèi)酰胺酶的影響，可誘導mecA 基因的表達，在MRS 檢測中具有很高的準確性。全自動微生物儀是一種常規(guī)的MRSA檢測方法，特異性和敏感性較高，但價格普遍較為昂貴。本次研究發(fā)現(xiàn)，Vitek 全自動微生物分析儀和頭孢西丁紙片擴散法MRSA 檢出率無差異，可采用便捷、成本較為低廉的頭孢西丁紙片擴散法代替微生物分析儀在基層社區(qū)或醫(yī)院進行MRSA 檢測。

表1 194 株MRSA 抗菌藥物耐藥率

MRSA 耐藥性具有多重性和不均一性，對多數(shù)種類抗菌藥物都有著耐藥性。有學者研究指出，萬古霉素是MRSA 感染治療的首選藥物，MRSA 對左氧氟沙星、慶大霉素、磺胺甲惡唑、克林霉素、頭孢唑啉、氨芐西林等耐藥率均在60%以上，呋喃妥因、利福平的耐藥率也較為顯著［5］。在重癥MRSA 感染患者治療中，可聯(lián)合呋喃妥因和利福平進行治療，其中呋喃妥因適用于尿路感染和腸道感染患者，可提高臨床治療效果，防止細菌耐藥問題發(fā)生；復方磺胺甲惡唑適用于輕、中度感染患者，但由于該藥只能口服、起效慢，因此不適用于全身治療。在甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌中，含有PBPs，即與β-內(nèi)酰胺類抗生素親和力高的青霉素結(jié)合蛋白，在細菌保持正常形態(tài)、生長繁殖方面起重要作用，參與細胞壁粘肽層的合成，具有轉(zhuǎn)肽酶或羥肽酶作用，是細菌繁殖、生長所必需的。MRSA 通過獲得mecA基因?qū)Ζ?內(nèi)酰胺類抗菌藥物產(chǎn)生耐藥機制，但多重耐藥機制較為復雜，目前尚未明確，可知獲得外界耐藥基因是MRSA 產(chǎn)生多重耐藥的重要途徑。由于MRSA所具有耐藥性，因此在臨床治療中應選用聯(lián)合用藥方案，切記亂用、濫用抗生素，最大限度保護萬古霉素等對MRSA 的抗菌活性，防止其敏感度下降。

頭孢西丁紙片擴散法在MRSA 檢測中具有較高的準確性，且具有操作便捷、有效等應用優(yōu)勢，是MRSA可行、可靠的檢測方法，與Vitek 微生物分析儀檢測法的檢出率無差異，值得推廣。同時，MRSA 對大多數(shù)抗菌藥物耐藥，在臨床治療過程中，應根據(jù)檢測結(jié)果選用恰當、有效的抗菌藥物。