蜂蜜中酚酸類(lèi)化合物大孔樹(shù)脂提取研究

杜曉靜 梁浩(銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，貴州 銅仁 554300)

0 引言

蜂蜜是一種天然的甜物質(zhì)，由蜜蜂采集植物的花蜜、蜜露或分泌物，并與自身分泌物相混合，經(jīng)充分釀造而成[1-2]，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富深受消費(fèi)者的青睞。酚類(lèi)化合物(主要是酚酸、黃酮及其衍生物等)是蜂蜜中重要的生物活性成分。研究發(fā)現(xiàn)，酚酸類(lèi)化合物可以作為蜂蜜的花源和地理來(lái)源的鑒別指標(biāo)[3-6]，為蜂蜜質(zhì)量控制提供可靠的依據(jù)。

樹(shù)脂提取法是目前蜂蜜中酚類(lèi)化合物提取最常用的一種方法，其主要原理是被測(cè)樣品中的分析物被大孔樹(shù)脂吸附而干擾組分流出，然后將目標(biāo)物質(zhì)用洗脫液洗出來(lái)[7-8]。XAD 型樹(shù)脂是提取蜂蜜中酚類(lèi)物質(zhì)最常用的柱材。本文以蜂蜜中的酚酸類(lèi)物質(zhì)為檢測(cè)指標(biāo)，通過(guò)研究幾種不同大孔樹(shù)脂對(duì)蜂蜜中酚酸類(lèi)化合物的提取，從而得到一種對(duì)蜂蜜中酚酸類(lèi)化合物吸附能力較好的吸附劑。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

濃鹽酸(分析純；成都金山化學(xué)試劑有限公司)。甲醇(色譜純；美國(guó)天地有限公司)。

對(duì)羥基苯甲酸(純度：99.5%；阿拉丁)。

XAD-2 樹(shù)脂(北京北實(shí)縱橫科技發(fā)展有限公司)。

LS-46D、LS-308、DM-130、AB-8 樹(shù)脂(西安藍(lán)曉科技有限公司)。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠(chǎng))。

電子分析天平(CPA225D；北京賽多利斯天平有限公司)。

Agilent 1100 高效液相色譜儀 美國(guó)Agilent 公司。

棗花蜜樣品 購(gòu)于銅仁市思南縣。

1.2 樣品溶液的制備

稱(chēng)取5 份蜂蜜樣品各5 g，用蒸餾水溶解，固液比為1:5(W/V)，采用濃鹽酸將pH 值調(diào)節(jié)至2.0；分別將蜂蜜水樣品轉(zhuǎn)入填裝不同吸附樹(shù)脂的玻璃層析柱中，依次用酸性水溶液(I00mL)、蒸餾水(150mL)洗脫，待蜂蜜樣品中的極性化合物被除去后，再用甲醇(150mL)洗脫溶液至無(wú)色。洗脫液在45℃下旋轉(zhuǎn)蒸干，殘留物轉(zhuǎn)至2mL 容量瓶，用甲醇溶解并定容。采用0.45μm 微孔濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.3 色譜條件

色譜柱：Zorbax SB-C18(5μm, 250mm×4.6mm)；甲醇濃度為：0～10min，5%～15%；10～20min，15%；20～25min，15%～17%；25～30min，17%～30%；30～50min，30%～40%；50～60min，40%～55%；60～70min，55%～70%。流動(dòng)相：1.0% 乙酸和甲醇水溶液；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)電壓：0.9V；柱溫：30℃。進(jìn)樣量：10μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同吸附樹(shù)脂對(duì)蜂蜜中酚酸類(lèi)化合物的吸附

選用XAD-2、DM-130、LS-46D、AB-8 和LS-308 這5 種大孔樹(shù)脂作為吸附劑，研究不同大孔樹(shù)脂對(duì)蜂蜜中酚酸類(lèi)物質(zhì)的吸附。由圖1 可知，5 種不同樹(shù)脂譜圖的出峰信息量差異很小，其中DM-130 大孔樹(shù)脂的峰面積較小，因此，DM-130 大孔樹(shù)脂可以?xún)?yōu)先排除。

2.2 蜂蜜樣品中酚酸的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

將一定濃度的酚酸對(duì)照品溶液加入pH 為2.0 的蜂蜜樣品水溶液中，所得溶液通過(guò)已裝好的剩余四種樹(shù)脂的玻璃層析柱中。其它處理步驟同“1.2”。通過(guò)計(jì)算酚酸的加標(biāo)回收率(見(jiàn)表1)可知，樹(shù)脂XAD-2 得到的酚酸的回收率相對(duì)較高。因此，最終選擇大孔樹(shù)脂XAD-2 作為最優(yōu)的吸附劑。

圖1 不同樹(shù)脂對(duì)蜂蜜中酚酸類(lèi)化合物吸附后獲得的色譜圖

表1 利用XAD-2和AB-8獲得的樣品中酚酸的加標(biāo)回收率

3 結(jié)語(yǔ)

本論文通過(guò)研究5 種不同吸附樹(shù)脂對(duì)蜂蜜中酚酸類(lèi)化合物的吸附性能，發(fā)現(xiàn)大孔樹(shù)脂XAD-2 對(duì)蜂蜜中的酚酸類(lèi)化合物的吸附能性較好，加標(biāo)回收率試驗(yàn)顯示該樹(shù)脂的回收率也相對(duì)較高，因此，大孔樹(shù)脂XAD-2 是一種對(duì)蜂蜜中酚酸類(lèi)化合物吸附性能優(yōu)良的吸附劑，。