基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)的乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)代謝標(biāo)志物的篩選

霍紅旗，呂佰瑞，王海東，劉愛民

【摘要】目的：研究液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)在乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)代謝標(biāo)志物篩選方面的應(yīng)用效果。方法：從本院2018年2月-2020年2月收治乳腺癌患者中選擇80例納入觀察組（40例發(fā)生轉(zhuǎn)移與40例未發(fā)生轉(zhuǎn)移），同時(shí)選擇40名乳腺健康體檢者納入對(duì)照組，均實(shí)施液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)的乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)代謝標(biāo)志物的篩選，分析篩查結(jié)果。結(jié)果：通過構(gòu)建模型與分析，從健康人員到乳腺癌未轉(zhuǎn)移、乳腺癌轉(zhuǎn)移者，有8項(xiàng)相關(guān)代謝標(biāo)志物出現(xiàn)明顯升高。結(jié)論：基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)可構(gòu)建模型，并通過乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)代謝標(biāo)志物的篩選為乳腺癌轉(zhuǎn)移提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】乳腺癌;病灶轉(zhuǎn)移;液相色譜-質(zhì)譜技術(shù);模型;代謝標(biāo)志物

【中圖分類號(hào)】R587.2;R741.044 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6525（2020）08-0-01

乳腺癌在女性惡性腫瘤中有較高的發(fā)病率，也是嚴(yán)重威脅患者生存質(zhì)量的重大疾病。盡管關(guān)于乳腺癌的研究較多，但是乳腺癌發(fā)病率、死亡率仍然較高[1]。本研究通過基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)的乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)代謝標(biāo)志物的篩選模型建立與分析，旨在為乳腺癌轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)與干預(yù)提供依據(jù)，現(xiàn)就相關(guān)資料分析如下。

1資料與方法

1.1一般資料

從本院2018年2月-2020年2月收治乳腺癌患者中選擇80例納入觀察組（40例發(fā)生轉(zhuǎn)移與40例未發(fā)生轉(zhuǎn)移），同時(shí)選擇40名乳腺健康體檢者納入對(duì)照組，均為女性。觀察組轉(zhuǎn)移者：年齡32-74歲、平均年齡（45.59±4.25）歲，其中：12例肺轉(zhuǎn)移、18例肝轉(zhuǎn)移、6例骨轉(zhuǎn)移，4例出現(xiàn)兩個(gè)以及兩個(gè)部位以上轉(zhuǎn)移。觀察組未轉(zhuǎn)移者：年齡30-75歲、平均年齡（45.45±4.28）歲。對(duì)照組：年齡31-76歲、平均年齡（45.55±4.23）歲。乳腺癌患者預(yù)測(cè)生存期≥3個(gè)月，三組人員年齡資料差異較小，滿足可比性（P>0.05）。

1.2方法

檢查儀器與試劑有：質(zhì)譜儀、高效液相色譜儀、甲酸、乙腈、蒸餾水、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品等。

將100μL血清標(biāo)本解凍，然后與400μL甲醇混合，離心處理后，將上層清液真空離心蒸干，獲取干粉。等樣本體積水和乙腈混合（V/V=95/5），然后溶解干粉，離心處理，通過0.22μm濾膜對(duì)上清液過濾，樣本檢測(cè)。將不同標(biāo)本上樣液等體積混合后的溶液作為質(zhì)控品。

樣品分析：色譜柱為選擇Thermo Hypersil GOLD柱（50mm×2.1mm×1.9μm），0.1%甲酸的水溶液為流動(dòng)相A，含0.1%甲酸的乙腈溶液為流動(dòng)相B，設(shè)置流速200μL/min，之后按程序完成梯度洗脫，進(jìn)樣量10μL，4℃，質(zhì)控溶液中10個(gè)進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)，其余則隨機(jī)插入樣品中進(jìn)行分析。分析過的樣品則使用空白代替。獲取數(shù)據(jù)后可進(jìn)行模型建立，利用MZmine 2.7.2 軟件，SIMCA14.1軟件，建立模型后實(shí)施潛在標(biāo)志物的鑒定與分析。

1.3觀察指標(biāo)

不同樣本組合對(duì)應(yīng)的OPLS-DA模型以標(biāo)志物鑒定。

2結(jié)果

不同組合對(duì)應(yīng)OPLS-DA模型構(gòu)建情況見表1，通過對(duì)代謝標(biāo)志物進(jìn)行篩查，篩查后按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行代謝標(biāo)志物的鑒定。對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖搜索，乳腺癌未轉(zhuǎn)移者與健康對(duì)照組有31項(xiàng)指標(biāo)有差異，而乳腺癌轉(zhuǎn)移組與乳腺癌未轉(zhuǎn)移組則有23個(gè)代謝標(biāo)志物存在差異，經(jīng)鑒定，共有8個(gè)代謝物可作為病情發(fā)展的參考指標(biāo)，包括溶血磷脂酸（18∶1）、溶血磷脂酰膽堿（18∶0）、膽堿、溶血磷脂酰膽堿（20∶3）、磷酸二羥丙酮、番石榴酸、芥酸、L-氫化乳清酸。

3討論

引起乳腺癌患者死亡率較高的一個(gè)重要原因便是乳腺癌轉(zhuǎn)移，通過對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移的早期預(yù)測(cè)與干預(yù)對(duì)延長乳腺癌患者生存時(shí)間至關(guān)重要[2]。

隨著對(duì)乳腺癌研究的深入，代謝異常同乳腺癌患者病情發(fā)生、進(jìn)展等存在密切相關(guān)性。常規(guī)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移的特異性與靈敏度較低[3]。代謝組織學(xué)研究進(jìn)展為乳腺癌轉(zhuǎn)移提供了更多依據(jù)[3]。通過代謝學(xué)指標(biāo)對(duì)健康人員、乳腺癌未轉(zhuǎn)移者、乳腺癌轉(zhuǎn)移者指標(biāo)進(jìn)行分析，進(jìn)一步鑒定發(fā)現(xiàn)血磷脂酸（18∶1）、溶血磷脂酰膽堿（18∶0）、膽堿、溶血磷脂酰膽堿（20∶3）、磷酸二羥丙酮、番石榴酸、芥酸、L-氫化乳清酸等表達(dá)同乳腺癌轉(zhuǎn)移以及病情發(fā)展密切相關(guān)，其水平升高者出現(xiàn)乳腺癌轉(zhuǎn)移。與吳靜等[4]研究結(jié)論一致。關(guān)于不同代謝標(biāo)志物的具體作用機(jī)制以及實(shí)際應(yīng)用價(jià)值還需進(jìn)一步加大研究。

綜上所述，基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)可構(gòu)建模型，并通過乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)代謝標(biāo)志物的篩選為乳腺癌轉(zhuǎn)移提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]成祥君，楊璐，張偉，等.不同分子分型乳腺癌血清腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)差異與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響因素[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2019，37（12）：893-896.

[2]廖東亮.曲妥珠單抗、吉西他濱聯(lián)合紫杉醇治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌對(duì)患者血清腫瘤標(biāo)志物的影響[J].名醫(yī)，2019（10）：259.

[3]韓麗喬，張喬軒，黃憲章.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2020，43（10）：945-950.

[4]吳靜，楊睿，張磊，等.基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)的乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)代謝標(biāo)志物的篩選[J].天津醫(yī)藥，2018，46（10）：1033-1038.

基金項(xiàng)目：河北省衛(wèi)健委醫(yī)學(xué)研究課題（編號(hào)：20191861）

通訊作者簡(jiǎn)介：呂佰瑞（1984-），男，河北邯鄲人，主管檢驗(yàn)師，碩士，主要從事腫瘤的基礎(chǔ)研究。