免疫抑制治療對(duì)再生障礙性貧血患者血清細(xì)胞因子的影響

費(fèi)炳義

AA 是一種骨髓產(chǎn)生的細(xì)胞不足,導(dǎo)致血液中細(xì)胞下降的血液系統(tǒng)疾病。據(jù)報(bào)道,AA 與骨髓造血干細(xì)胞損傷相關(guān),當(dāng)某些刺激物激活其自身免疫反應(yīng)時(shí)機(jī)體會(huì)釋放VEGF、TNF-α、IFN-γ 等負(fù)性調(diào)控因子,導(dǎo)致造血干細(xì)胞分裂受阻而凋亡［1］。鑒于此,本研究對(duì)接受免疫抑制治療及常規(guī)治療的AA 患者的血清VEGF、TNF-α、IFN-γ 濃度進(jìn)行檢測(cè),以探討免疫抑制治療對(duì)AA 患者血清VEGF、TNF-α、IFN-γ 表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016 年7 月～2018 年6 月在本院就診治療的AA 患者56 例,納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合AA診斷［2］,并經(jīng)臨床癥狀及外周血象、骨髓涂片及活檢確診；②年齡11～65 歲；③患者及家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)本研究所用藥物過(guò)敏者；②自身免疫性疾??；③治療依從性差者；④有其他嚴(yán)重并發(fā)癥。將患者根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對(duì)照組,每組28 例。觀察組男15 例,女13 例；年齡14～62 歲,平均年齡(28.5±8.6)歲。對(duì)照組男14 例,女14 例；年齡13～65 歲,平均年齡(28.9±9.1)歲。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。本研究通過(guò)了醫(yī)院倫理委員會(huì)審核。

1.2 方法 所有患者均行基礎(chǔ)治療,患者入院后,囑其保持絕對(duì)臥床休息,并給予補(bǔ)充血小板治療,貧血嚴(yán)重者可用同型紅細(xì)胞；如合并感染則給予抗感染治療；肝功能不全者則給予保肝治療。在此基礎(chǔ)上,對(duì)照組給予雄激素治療,即給予十一酸睪酮膠丸(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠,國(guó)藥準(zhǔn)字H10970240,規(guī)格：40 mg/粒)40 mg 口服,2 次/d,連續(xù)治療6 個(gè)月。觀察組給予免疫抑制治療,即口服環(huán)孢素軟膠囊(杭州中美華東制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H10960122,規(guī)格：50 mg/粒)3～5 mg/(kg·d),2 次/d,連續(xù)治療6 個(gè)月。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細(xì)胞水平及TNF-α 和IFN-γ 表達(dá)百分率,相同部位骨髓涂片標(biāo)本中VEGF 表達(dá)差異。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細(xì)胞水平采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。TNF-α、IFN-γ 檢測(cè)采用流式細(xì)胞儀獲得2×105個(gè)細(xì)胞,并計(jì)算CD4 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),測(cè)定其胞漿中TNF-α 和IFN-γ 陽(yáng)性表達(dá),以此計(jì)算表達(dá)百分率。VEGF 表達(dá)水平采用原位雜交法檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s) 表示,采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細(xì)胞水平變化情況比較 治療前,兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細(xì)胞水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后,觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細(xì)胞水平均明顯低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 兩組治療前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達(dá)情況 治療前,兩組VEGF、CD4+/TNF-α和CD4+/IFN-γ 表達(dá)水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后,觀察組VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達(dá)水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表1 兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細(xì)胞水平變化情況比較(±s)

表1 兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細(xì)胞水平變化情況比較(±s)

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05

表2 兩組治療前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達(dá)情況(±s)

表2 兩組治療前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達(dá)情況(±s)

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05

3 討論

AA 是各種原因引起骨髓造血干細(xì)胞減少、造血功能衰竭所致的一種以全血細(xì)胞減少、進(jìn)行性貧血等為典型特征的臨床綜合征［3］,目前普遍認(rèn)為是骨髓造血微環(huán)境損傷造成的［4］。研究表明,很多AA 患者存在細(xì)胞因子調(diào)節(jié)異常,這可能造成造血干細(xì)胞增殖和分化紊亂［5］。由T 淋巴細(xì)胞分泌的骨髓抑制性細(xì)胞因子是重要的造血負(fù)調(diào)控因子,如TNF-α、IFN-γ 等［6］。研究發(fā)現(xiàn),TNF-α、IFN-γ 可抑制紅細(xì)胞聚集,同時(shí)發(fā)現(xiàn)AA 患者的TNF-α、IFN-γ 檢出率明顯高于正常人［7］。本研究采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血中淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)的TNF-α、IFN-γ 表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者均明顯高于對(duì)照組,提示AA 引起了造血調(diào)控因子失衡,進(jìn)而導(dǎo)致造血負(fù)調(diào)控因子異常升高。目前,AA 的治療主要采用免疫抑制治療,特別那些對(duì)骨髓移植有禁忌的患者,有效率可達(dá)75%［8］。本研究結(jié)果顯示,治療后,觀察組VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。由此說(shuō)明免疫抑制治療抑制了AA 患者體內(nèi)T 細(xì)胞功能,下調(diào)造血調(diào)控因子,故利于骨髓造血功能恢復(fù)。

通過(guò)檢測(cè)T 細(xì)胞胞漿內(nèi)TNF-α 和IFN-γ 的表達(dá)改變,可為免疫抑制治療療效的評(píng)估提供依據(jù)。與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)血清中TNF-α 和IFN-γ 的表達(dá)相比,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞漿內(nèi)的TNF-α和IFN-γ 的表達(dá)更接近細(xì)胞特異性,可較準(zhǔn)確反映T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子變化,故更準(zhǔn)確反映免疫抑制治療后T 淋巴細(xì)胞功能改變。VEGF 可在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生,是高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂原,且是血小板源性生長(zhǎng)因子之一。VEGF 具有維持正常血管密度的作用,且與生理性造血有明顯的關(guān)系。

通常腫瘤患者免疫力低下,其CD4+T 細(xì)胞減少、CD8+T 細(xì)胞增加、CD4+/CD8+比值下降；NK 細(xì)胞為機(jī)體重要的非特異免疫細(xì)胞［9,10］。本研究結(jié)果顯示,觀察組VEGF 表達(dá)量顯著下調(diào),但治療后上升明顯,說(shuō)明VEGF 表達(dá)下調(diào)與AA 密切相關(guān)。造血微環(huán)境受損引起血管密度變小,骨髓血管生成減少,使骨髓脂肪化,造血組織萎縮,最終影響造血功能。VEGF 表達(dá)減少直接影響造血干細(xì)胞的生存、分化和發(fā)育,可見(jiàn)AA 患者的VEGF 表達(dá)下降,從各途徑影響骨髓血管生成和造血干細(xì)胞的生存,但其具體機(jī)制還需從分子學(xué)、基因?qū)W方面入手加以研究。

總之,免疫抑制治療能有效降低AA 患者T 細(xì)胞胞漿內(nèi)的TNF-α 和IFN-γ 表達(dá),且能上調(diào)VEGF 的表達(dá),利于骨髓血管密度的恢復(fù)。