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    c(RGDyk)環(huán)肽修飾的脂質(zhì)體包載量子點(diǎn)熒光成像腦膠質(zhì)瘤引導(dǎo)手術(shù)精準(zhǔn)切除效果評(píng)價(jià)

    2020-11-03 10:06:28吳釗航董偉杰薛鵬鵬左佳怡王麗芬袁健東徐荷林
    關(guān)鍵詞:環(huán)肽脂質(zhì)體膠質(zhì)瘤

    吳釗航,董偉杰,薛鵬鵬,左佳怡,王麗芬,袁健東,徐荷林

    (1.溫州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院,浙江 溫州 325035;2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 骨外科,浙江 溫州 325015)

    腦膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)中常見的疾病之一,易于轉(zhuǎn)移并且難以治療,表現(xiàn)出較高的復(fù)發(fā)率和病死率,對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的功能具有很大的危害[1]。腦膠質(zhì)瘤的治療至今沿用傳統(tǒng)的外科手術(shù)+藥物治療+經(jīng)顱放療綜合治療模式。但由于腦膠質(zhì)瘤具有侵襲和轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),手術(shù)時(shí)腫瘤邊界難以精確定位導(dǎo)致手術(shù)切除不徹底,致使微小病灶殘留[2]。術(shù)后微小病灶的殘留是導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)、預(yù)后不良的重要原因。因此準(zhǔn)確識(shí)別原發(fā)性神經(jīng)膠質(zhì)瘤邊界和轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞不僅是完全切除的主要因素,還是預(yù)防神經(jīng)膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素[3]。

    術(shù)中MRI成像、近紅外熒光成像以及多種方式相結(jié)合的多模態(tài)成像可使原發(fā)性腫瘤病灶可視化,精準(zhǔn)定位轉(zhuǎn)移性微小腫瘤結(jié)節(jié),引導(dǎo)腫瘤精準(zhǔn)切 除[4-5]。無論是發(fā)光腫瘤模型還是手術(shù)前造影劑標(biāo)記腫瘤模型,均證明成像引導(dǎo)的手術(shù)切除相比自然光下的標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)在提高腫瘤切除完全率,降低腫瘤復(fù)發(fā)率以及提高患者術(shù)后存活率等方面具有明顯的優(yōu)勢(shì),近年來受到廣泛關(guān)注。DOGLIETTO等[6]結(jié)合熒光物質(zhì)5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)和高清晰度的三維立體鏡,用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤手術(shù)切除。盡管許多研究已經(jīng)使用諸如5-ALA和熒光素鈉之類的熒光物質(zhì)來指導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的切除,但是仍然存在一些問題如熒光穩(wěn)定性差和熒光效率低等[7]。

    量子點(diǎn)(quantum dots,QDs)具有良好的熒光信號(hào)和穩(wěn)定性,較寬的激發(fā)光譜和較窄的發(fā)射光譜,并已應(yīng)用于標(biāo)記特異性細(xì)胞和組織以實(shí)現(xiàn)多色生物成像[8-10]。但QDs由于其理化特性容易受到環(huán)境影響從而導(dǎo)致細(xì)胞毒性,這使得其應(yīng)用受到限制[11]。研究發(fā)現(xiàn)將QDs與脂質(zhì)體相結(jié)合,不僅改善了QDs的穩(wěn)定性,使其能保持熒光,還大大降低了其生物毒性[12],而且還可以對(duì)載體進(jìn)行修飾,使其能夠靶向作用在腫瘤區(qū)域,提高其成像精確度。神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞表達(dá)αvβ3整合素,可以與含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列短肽特異性結(jié)合[13]。相比之 下,RGDyk環(huán)肽對(duì)αvβ3整合素具有更強(qiáng)的親和力和更高的特異性,已被眾多研究用作靶向配基來修飾納米藥物載體[14-15]。本研究擬以靶向腦膠質(zhì)瘤的RGDyk環(huán)肽修飾脂質(zhì)體包載QDs,用于腦膠質(zhì)瘤的精準(zhǔn)成像,實(shí)現(xiàn)術(shù)中熒光成像引導(dǎo)的腫瘤精準(zhǔn)切除。

    1 材料和方法

    1.1 材料與試劑 氫化大豆磷脂(HSPC)、二硬脂?;字R掖及?聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG-NH2)、膽固醇購自上海艾維特公司;c(RGDyk)環(huán)肽購自上海吉爾生化多肽公司;ZnCdSe/ZnS量子點(diǎn)購自武漢伽源量子點(diǎn)公司;N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)購自上海阿拉丁公司;2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽(CCK-8)購自日本株式會(huì)社同仁化學(xué)研究所;PC12和C6細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所;DMEM培養(yǎng)基、RPMI1640培養(yǎng)液、胰酶、胎牛血清購自美國GIBCO公司。

    1.2 方法

    1.2.1 c(RGDyk)環(huán)肽修飾的QDs脂質(zhì)體制備:稱取85 mg HSPC,5 mg DSPE-PEG-NH2和10 mg膽固醇至25 mL圓底燒瓶中,加入10 mL乙醚,600 r/min 攪拌使溶解后,至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃蒸除乙醚,形成均勻的脂質(zhì)膜后,將一定量的QDs添加到適量磷酸鹽緩沖液(PBS pH 7.4)加入上述脂質(zhì)膜中,旋轉(zhuǎn)洗膜,用超聲波發(fā)生器在300 W超聲30 min后,即可得到多室脂質(zhì)體混懸液,分別依次過400 nm和100 nm碳酸酯膜擠出整粒,得到平均粒徑100 nm以下的小單室脂質(zhì)體。c(RGDyk)環(huán)肽溶液在室溫下經(jīng)EDC/NHS活化后,加入至上述單室脂質(zhì)體混懸液中,輕輕攪拌反應(yīng)4 h,超濾除去縮合劑以及未反應(yīng)的c(RGDyk)環(huán)肽,即可得到c(RGDyk)環(huán)肽修飾的量子點(diǎn)脂質(zhì)體[QDs-c(RGDyk)-Lip]。

    1.2.2 粒徑以及形態(tài):動(dòng)態(tài)光散射激光粒度測(cè)定儀(LitesizerTM 500,奧地利安東帕公司)對(duì)游離的QDs以及c(RGDyk)環(huán)肽修飾的量子點(diǎn)脂質(zhì)體進(jìn)行粒徑和Zeta電位的測(cè)定。樣品經(jīng)過適當(dāng)稀釋后,于常溫條件下固定激光波長(zhǎng)為632.8 nm,散射角為90°測(cè)定其粒徑以及Zeta電位。透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)檢測(cè)游離的QDs以及c(RGDyk)環(huán)肽修飾的量子點(diǎn)脂質(zhì)體形態(tài)。取樣品滴于鋪有碳膜的銅網(wǎng)上,以無纖維濾紙從銅網(wǎng)邊緣吸掉多余液體,滴入2%磷鎢酸染色,自然晾干2 d,以200 kV加速電壓,TEM(JEM1200EX,日本JEOL公司)檢視并拍照。

    1.2.3 熒光光譜:熒光分光光度計(jì)(RF-6000,日本Shimadzu公司)對(duì)游離的QDs以及c(RGDyk)環(huán)肽修飾的QDs脂質(zhì)體進(jìn)行熒光發(fā)射光譜分析。激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)置為450 nm,在500~800 nm發(fā)射波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,掃描間隔為1.0 nm,掃描速度為2 000 nm/min。 QDs-c(RGDyk)-Lip與含有10% FBS的pH 7.4 PBS在37 ℃孵育不同時(shí)間后,固定激發(fā)波長(zhǎng)為450 nm,檢測(cè)發(fā)射波長(zhǎng)610 nm處的熒光強(qiáng)度變化,檢測(cè)其在生理相關(guān)介質(zhì)中的熒光穩(wěn)定性。

    1.2.4 細(xì)胞毒性:體外CCK-8法評(píng)估QDs-c(RGDyk)-Lip對(duì)正常PC12神經(jīng)細(xì)胞以及C6腫瘤細(xì)胞的毒性。C6細(xì)胞在含有10%胎牛血清、青霉素(100 U/mL)、 鏈霉素(100 μg/mL)以及谷氨酰胺(2 mmol/L)的RPMI 1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng);PC12細(xì)胞則利用DMEM高葡萄糖培養(yǎng)液培養(yǎng);細(xì)胞放入37 ℃、5% CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。將PC12細(xì)胞或C6細(xì)胞接種到裝有100 μL培養(yǎng)基的96孔板(每孔3×103)中培養(yǎng)過夜。然后,加入含有QDs-c(RGDyk)-Lip的培養(yǎng)基,進(jìn)一步培養(yǎng)24 h或48 h,PBS洗滌2次,加入10 μL CCK-8,置培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育2 h,酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度。按照如下公式計(jì)算細(xì)胞的存活率(%)。細(xì)胞存活率(%)=[(A加藥-A空白)÷(A0加藥- A空白)]×100%。A加藥:具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度;A空白:具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度;A0加藥:具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度。

    1.2.5 腫瘤細(xì)胞靶向性:C6細(xì)胞以每孔1×106個(gè)細(xì)胞的密度接種在6孔板的蓋玻片上,培養(yǎng)箱內(nèi)孵育過夜。加入含有游離QDs(30 nmol/L)或 QDs-c(RGDyk)-Lip(相對(duì)應(yīng)QDs濃度為30 nmol/L)的培養(yǎng)基,孵育2 h,冷PBS沖洗,DAPI(1 mg/mL)染色,熒光顯微鏡(尼康,日本)觀察。為了證明QDs-c(RGDyk)-Lip的c(RGDyk)靶向性,貼壁C6細(xì)胞預(yù)先用游離的c(RGDyk)孵育2 h,后加入含有QDsc(RGDyk)-Lip(相對(duì)應(yīng)QDs濃度為30 nmol/L)的培養(yǎng)基孵育2 h,觀察細(xì)胞熒光強(qiáng)度變化。

    1.2.6 體內(nèi)靶向性:按照文獻(xiàn)方法[16]建立C6腦膠質(zhì)瘤大鼠模型。荷瘤大鼠6只分為2組,每組3只,分別尾靜脈注射游離QDs溶液(50 nmol/L)和QDsc(RGDyk)-Lip(相當(dāng)于QDs濃度為50 nmol/L)。2 h 后,將荷瘤大鼠處死,0.9%氯化鈉溶液心臟灌流后,分離出荷瘤大腦,放置在活體成像儀內(nèi)進(jìn)行離體熒光成像。同時(shí),荷瘤大腦進(jìn)行冰凍切片,DAPI染色 后,置熒光顯微鏡下觀察組織熒光分布。

    1.2.7 熒光引導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤精準(zhǔn)切除:荷瘤大鼠6只分為2組,每組3只,分為熒光引導(dǎo)手術(shù)組和白光手術(shù)組。熒光引導(dǎo)手術(shù)組靜脈注射QDs-c(RGDyk)-Lip(相當(dāng)于QDs濃度為50 nmol/L)2 h后,麻醉大鼠,乙醇皮膚消毒,在腫瘤上方行一個(gè)約1.5 cm的切口,在暗室激光照射腦組織造成熒光手術(shù)環(huán)境,在顯微鏡下用顯微鏡的鑷子和剪刀手術(shù)切除。白光手術(shù)組荷瘤大鼠直接在白光下開顱,實(shí)行腫瘤切除。為了評(píng)估手術(shù)邊緣是否存在殘留的神經(jīng)膠質(zhì)瘤病變組織,從手術(shù)邊緣提取厚度為3 mm的活檢樣本,并用4%多聚甲醛固定以進(jìn)行HE染色。

    2 結(jié)果

    2.1 c(RGDyk)環(huán)肽修飾的QDs脂質(zhì)體的制備與表征 ZnCdSe/ZnS的QDs具有較高的毒性,本實(shí)驗(yàn)以氫化大豆磷脂,二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基和膽固醇為材料,采用逆向蒸發(fā)法制備包載QDs的脂質(zhì)體。后經(jīng)EDC/NHS介導(dǎo)的縮合反應(yīng),將RGDyk環(huán)肽與QDs-Lip表面氨基鍵合,制備c(RGDyk)環(huán)肽修飾的量子點(diǎn)脂質(zhì)體(QDs-c(RGDyk)-Lip)。動(dòng)態(tài)光散射(dynamic light scatting,DLS)以及TEM技術(shù)對(duì)QDs-(RGDyk)-Lip進(jìn)行了粒徑與形態(tài)表征,結(jié)果如圖1所示。DLS結(jié)果顯示,游離QDs的粒徑約為35 nm,而QDs-(RGDyk)-Lip粒徑增大為175 nm,且分布較為集中(PDI=0.12)。TEM結(jié)果顯示,游離QDs呈稀疏的點(diǎn)狀分布,其大小同DLS結(jié)果相近;而QDs-(RGDyk)-Lip則呈囊泡狀,且其中心可見數(shù)個(gè)微小QDs聚集,表明QDs有效包裹在脂質(zhì)體內(nèi)。

    圖1 游離量子點(diǎn)(A、C)和QDs-(RGDyk)-Lip(B、D)粒徑分布與TEM形態(tài)

    2.2 c(RGDyk)環(huán)肽修飾的QDs脂質(zhì)體的穩(wěn)定性 RGDyk環(huán)肽修飾的QDs脂質(zhì)體在白光下,呈淺粉紅色渾濁液,而在405 nm紫外光照射下,則發(fā)射出強(qiáng)的紫紅色熒光,見圖2A。對(duì)其發(fā)射熒光進(jìn)行光譜掃描(見圖2B),游離QDs和QDs-(RGDyk)-Lip均顯示出在610 nm處的最大發(fā)射波長(zhǎng),而且由于包裹后聚集誘導(dǎo)熒光發(fā)射效應(yīng),QDs-(RGDyk)-Lip熒光強(qiáng)度較游離QDs略增強(qiáng)。這些特性表明QDs包載在脂質(zhì)體后,其熒光發(fā)射特性不受損害。為了考察QDs-(RGDyk)-Lip在生理相關(guān)介質(zhì)中的穩(wěn)定性,QDs-(RGDyk)-Lip與含有10% FBS的pH 7.4 PBS于37 ℃孵育不同時(shí)間后,檢測(cè)其在610 nm處熒光強(qiáng)度以及粒徑變化(見圖2C-D),游離QDs在孵育過程中,其熒光強(qiáng)度逐漸降低,48 h孵育后降低20%,而QDs-(RGDyk)-Lip則在整個(gè)檢測(cè)時(shí)間內(nèi)熒光強(qiáng)度沒有發(fā)生明顯改變,48 h 孵育后,熒光強(qiáng)度僅僅5%降低,這表明脂質(zhì)體包裹能提高量子點(diǎn)熒光穩(wěn)定性,同時(shí),QDs-(RGDyk)-Lip整個(gè)孵育過程中未見明顯的粒徑及粒徑分布指數(shù)(particle distribution index,PDI)改變,進(jìn)一步說明QDs-(RGDyk)-Lip在生理相關(guān)介質(zhì)中的穩(wěn)定性。

    2.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn) QDs-c(RGDyk)-Lip對(duì)正常PC12細(xì)胞以及C6腫瘤細(xì)胞株均展現(xiàn)出劑量依賴性的微弱細(xì)胞毒性,而且C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞相比PC12細(xì)胞具有更高的敏感性,見圖3。孵育24 h后,QDs-c(RGDyk)-Lip在5~60 μg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)PC12幾乎無細(xì)胞毒性,在濃度80~100 μg/mL展現(xiàn)出略微微弱的毒性。而QDs-c(RGDyk)-Lip對(duì)C6細(xì)胞,在濃度為40 μg/mL 時(shí)能觀察到對(duì)細(xì)胞的損傷,當(dāng)濃度為100 μg/mL時(shí),細(xì)胞的存活率約為82%。孵育48 h后,QDs-c(RGDyk)-Lip對(duì)2種細(xì)胞株展現(xiàn)出相似的趨勢(shì),但與24 h結(jié)果相比,沒有顯著增大。相比PC12細(xì)胞,QDs-c(RGDyk)-Lip對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有更高的細(xì)胞毒性可能是因?yàn)镃6細(xì)胞表面更高的αvβ3整合素受體表達(dá),促進(jìn)更多的QDs攝取進(jìn)入細(xì)胞。

    2.4 c(RGDyk)環(huán)肽修飾的QDs脂質(zhì)體體對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的靶向性成像 C6細(xì)胞與QDs或QDs-(RGDyk)-Lip孵育2 h后,激光共聚焦顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯像,見圖4。游離QDs處理細(xì)胞僅在細(xì)胞外緣顯示出微弱的紅色熒光,而QDs-c(RGDyk)-Lip處理的細(xì)胞周圍顯示出強(qiáng)的紅色熒光,而且能清晰顯示其細(xì)胞質(zhì)骨架,表明QDs-c(RGDyk)-Lip對(duì)C6細(xì)胞特異靶向性。C6細(xì)胞表面整合素受體預(yù)先用游離c(RGDyk)飽和后,評(píng)價(jià)其對(duì)QDs-c(RGDyk)-Lip攝取變化,結(jié)果顯示,與QDs-c(RGDyk)-Lip相比,游離c(RGDyk)+QDs-(RGDyk)-Lip處理組細(xì)胞熒光明顯降低,僅在細(xì)胞外緣表面顯示微弱紅色熒光,表明QDs-(RGDyk)-Lip的靶向性與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞膜表面的整合素有關(guān)。

    圖2 c(RGDyk)環(huán)肽修飾的量子點(diǎn)脂質(zhì)體的穩(wěn)定性

    圖3 QDs-(RGDyk)-Lip對(duì)C6和PC12的細(xì)胞毒性

    2.5 c(RGDyk)環(huán)肽修飾的QDs脂質(zhì)體體內(nèi)腫瘤靶向性 離體熒光成像結(jié)果顯示,游離QDs組大鼠的腦組織觀察到微弱的紅色背景信號(hào),但腫瘤組織區(qū)域(黃色虛線標(biāo)注)熒光信號(hào)并未強(qiáng)于背景熒光,表明游離的QDs無法向膠質(zhì)瘤組織聚集。相比之下,QDsc(RGDyk)-Lip組大鼠腦組織腫瘤區(qū)域則顯示出強(qiáng)的熒光信號(hào),明顯高于周邊正常組織產(chǎn)生的背景熒光,表明QDs-c(RGDyk)-Lip靜脈注射后特異分布在腦膠質(zhì)瘤組織,展現(xiàn)出體內(nèi)特異腫瘤靶向性。離體荷瘤大腦進(jìn)一步進(jìn)行冰凍切片,激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn),游離QDs組腦組織無論在腫瘤區(qū)域(T)還是腦實(shí)質(zhì)區(qū)域(P)均無QDs有關(guān)的紅色熒光信號(hào),與離體成像結(jié)果一致。相比之下,QDs-(RGDyk)-Lip組大腦組織僅僅在腫瘤區(qū)域(T)內(nèi)展示出強(qiáng)的QDs有關(guān)的紅色熒光,在腦實(shí)質(zhì)區(qū)域(P)未見有熒光,表明QDs-(RGDyk)-Lip能精確定位在膠質(zhì)瘤區(qū)域。見圖5。

    2.6 熒光成像引導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤大鼠腫瘤精準(zhǔn)切除 術(shù)中腫瘤區(qū)域顯像如圖6所示,在手術(shù)切除前的明視野圖像中,熒光引導(dǎo)手術(shù)組和白光手術(shù)組均可觀察到明顯的神經(jīng)膠質(zhì)瘤區(qū),但在白光下只能觀察到模糊的腫瘤區(qū)域,而在熒光下可以觀察到腫瘤與腦實(shí)質(zhì)間清晰的邊界。白光手術(shù)組的神經(jīng)膠質(zhì)瘤大鼠腫瘤實(shí)行經(jīng)驗(yàn)式切除,熒光引導(dǎo)手術(shù)組的神經(jīng)膠質(zhì)瘤大鼠進(jìn)行熒光引導(dǎo)腫瘤切除,直到在腫瘤區(qū)未觀察到熒光信號(hào)為止。手術(shù)切除后,取切口邊緣 3 mm厚的組織進(jìn)行切片,HE染色,評(píng)價(jià)手術(shù)切除的效果。結(jié)果顯示,白光手術(shù)組切除的活檢樣本在正常的腦實(shí)質(zhì)(P)邊緣觀察到了殘留的神經(jīng)膠質(zhì)瘤(T),能觀察到明顯的殘留腫瘤組織,而熒光引導(dǎo)手術(shù)組的活檢樣本在切口邊緣(黃色虛線所示)未見有殘留的腫瘤組織,表明QDs-c(RGDyk)-Lip對(duì)腦膠質(zhì)瘤熒光成像能引導(dǎo)術(shù)中腫瘤精準(zhǔn)切除。

    3 結(jié)論

    由于顱內(nèi)腫瘤的過度生長(zhǎng)及其邊界模糊,手術(shù)難以完全切除是導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)的重要原因。準(zhǔn)確定位腫瘤邊界實(shí)行精準(zhǔn)切除是目前腦膠質(zhì)瘤手術(shù)治療成功與否的關(guān)鍵。有許多成像技術(shù)可以幫助最大程度地切除腫瘤。如手術(shù)前經(jīng)顱磁刺激和彌散張量成像檢查,以及手術(shù)中的超聲導(dǎo)航和直接皮層刺激導(dǎo)航等都能定位腫瘤邊界,引導(dǎo)手術(shù)切除[17]。但由于這些技術(shù)的成本高、可操作性差以及檢測(cè)靈敏性低等局限,尚未在臨床上廣泛使用。熒光成像引導(dǎo)的手術(shù)切除在提高腫瘤切除完全率,降低腫瘤復(fù)發(fā)以及提高患者術(shù)后存活率等方面具有明顯的優(yōu)勢(shì),近年來受到臨床外科醫(yī)師廣泛關(guān)注[18]。本研究構(gòu)建了c(RGDyk)環(huán)肽修飾的脂質(zhì)體包載QDs,并對(duì)其粒徑、形態(tài)以及熒光發(fā)射性質(zhì)進(jìn)行了表征,評(píng)價(jià)了其體內(nèi)外對(duì)腦膠質(zhì)瘤的成像可行性以及術(shù)中熒光成像引導(dǎo)腫瘤切除的精準(zhǔn)性。結(jié)果表明,QDsc(RGDyk)-Lip粒徑大小為175 nm,在生理相關(guān)介質(zhì)中具有良好的粒徑與熒光穩(wěn)定性;QDs-(RGDyk)-Lip體外不但對(duì)PC12腦神經(jīng)細(xì)胞具有低毒性,而且可以有效地靶向C6腫瘤使其熒光顯像。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明QDs-c(RGDyk)-Lip靜脈注射后能高效地靶向原位荷瘤大鼠腦膠質(zhì)瘤,使其發(fā)射強(qiáng)熒光引導(dǎo)手術(shù)精準(zhǔn)切除。

    圖6 荷瘤大鼠靜脈注射QDs-(RGDyk)-Lip后實(shí)行熒光成像手術(shù)及術(shù)后切口邊緣HE染色(×200)

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