香果樹可培養(yǎng)內(nèi)生真菌的群落結(jié)構(gòu)及功能活性菌株的篩選

張紅芳，李小紅，何剛，陳曄

九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，江西九江 332000

0 前言

香果樹(Emmenopterys henryiOliv.)為茜草科植物，是我國(guó)特有單種屬的珍稀瀕危植物[1-2]。由于香果樹具有較高的藥用、觀賞以及潛在應(yīng)用價(jià)值[3]，人們大量砍伐和毀林開荒，破壞了適宜香果樹生長(zhǎng)的生境，使香果樹的數(shù)量比若干年前已大量減少，加上香果樹種子萌發(fā)率低，天然更新能力差，從而導(dǎo)致香果樹分布范圍逐漸縮減，現(xiàn)只零星分布在一些山坡、山谷溪溝邊，幾乎瀕臨滅絕[4]?？梢?，加強(qiáng)香果樹的保育已成為當(dāng)前迫在眉睫的科學(xué)問題。目前，人們已開展了香果樹資源分布、化學(xué)成分分析、瀕危機(jī)制、繁殖與栽培管理技術(shù)等方面的研究，已取得豐富成果[3，5-8]。然而，對(duì)香果樹內(nèi)生真菌多樣性的研究鮮見報(bào)道。

植物內(nèi)生真菌作為一類特殊的微生物資源[9]，普遍存在于植物組織內(nèi)，與宿主植物形成互惠共生體長(zhǎng)期共生，其在植物體內(nèi)生長(zhǎng)，具有穩(wěn)定的生長(zhǎng)環(huán)境，對(duì)宿主植物產(chǎn)生多種有益生物學(xué)作用，既可以改變植物生理代謝并增強(qiáng)宿主抗逆性，其代謝作用又可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，植物內(nèi)生真菌與宿主在遺傳、生理、代謝等方面相互滲透、同步進(jìn)化使得它極有可能與宿主交換遺傳信息，從而產(chǎn)生相似或相同生理活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是潛在的微生物藥物開發(fā)資源[10-13]。另外，研究表明內(nèi)生真菌具有分布廣、種類多等特點(diǎn)，而且在植物不同組織器官分離得到的內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)菌株對(duì)植物具有不同的功能，這可以作為篩選不同功能性菌株的理論依據(jù)，可見植物內(nèi)生真菌是真菌中急待研究開發(fā)的寶貴資源[14-16]。

為進(jìn)一步保護(hù)和利用香果樹這一瀕危植物，本文以香果樹為材料，探索其在不同居群地內(nèi)生真菌的物種多樣性、群落組成以及生態(tài)分布規(guī)律。研究結(jié)果將有助于進(jìn)一步了解不同居群地香果樹內(nèi)生真菌的類群組成和生態(tài)分布規(guī)律，為探究香果樹內(nèi)生真菌對(duì)宿主植物促生作用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本采集處理

2016年10月上旬和2017年2月下旬在江西省九江廬山采樣，2017年6月下旬和7月上旬分別于九江廬山、銅鼓縣大溈山林場(chǎng)、井岡山市茨坪白銀湖、上饒市玉山縣三清山 4個(gè)居群地進(jìn)行采樣，隨機(jī)采集香果樹(Emmenopterys henryiOliv.)3株健康植株，每株植株分別采集香果樹葉20片，枝條20支，根20個(gè)，拍照、編號(hào)、登記有關(guān)基本資料。均放于采集袋中，其中葉子放于低溫采集箱中。記錄所處地理位置和環(huán)境(表1)。將樣本帶回實(shí)驗(yàn)室，4 ℃冰箱保藏，葉在2 d內(nèi)處理完畢，莖和根在7 d內(nèi)處理完成。

1.1.2 培養(yǎng)基

(1)分離、純化和保種為PDA培養(yǎng)基；(2)無機(jī)磷培養(yǎng)基用于溶磷菌株篩選[17]；(3)解鉀培養(yǎng)基用于解鉀菌株篩選[18]；(4)King 培養(yǎng)基[19]。

1.2 內(nèi)生真菌的分離純化

采用常規(guī)的組織分離法進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離純化[20]，將純化好的菌株保存在本校真菌實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本室(JJTU)。

1.3 功能活性菌株的篩選

(1)溶磷真菌篩選: 按溶磷圈方法進(jìn)行溶磷菌株篩選[21]；(2)解鉀真菌篩選: 根據(jù)菌株趨向性進(jìn)行解鉀菌株篩選[22]；(3)分泌IAA菌株篩選: 用比色法進(jìn)行產(chǎn)生IAA的功能活性菌株篩選[19，22-23]。

表1 采集樣地基本概況Table 1 Basic general situation of sampling sites

1.4 內(nèi)生真菌的鑒定

1.4.1 產(chǎn)孢內(nèi)生真菌的鑒定

根據(jù)菌落的顏色、形態(tài)、菌絲和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)的形態(tài)特征鑒定到屬。真菌屬的鑒定主要依據(jù) Barnett &Hunter、Dictionary of fungi[24]、Keith Seifer的分類系統(tǒng)和《真菌鑒定手冊(cè)》[25]，并參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)期刊發(fā)表的文獻(xiàn)資料[26-27]。

1.4.2 不產(chǎn)孢內(nèi)生真菌菌株分子生物學(xué)鑒定

將不產(chǎn)孢菌株置于4 ℃恒溫冰箱進(jìn)行低溫處理，并檢查其產(chǎn)孢情況，產(chǎn)孢后按上述方法進(jìn)行鑒定。經(jīng)處理后仍不產(chǎn)孢的菌株，根據(jù)菌落的培養(yǎng)特征及微觀特征進(jìn)行形態(tài)型的劃分合并。通過選取具有代表性的形態(tài)型菌株，分別刮取在PDA上培養(yǎng)成熟的菌絲，利用氯化芐法提取DNA[28]。采用真菌通用引物ITS1/ITS4對(duì)菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增[29]，獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物送往南京思普金生物科技有限公司進(jìn)行序列測(cè)定。測(cè)得序列經(jīng)峰圖檢查并在NCBI中進(jìn)行同源性比對(duì)[30]。確保序列準(zhǔn)確性后，將本研究獲得序列和從 GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中下載的相關(guān)序列利用 MEGA 5.0軟件構(gòu)建序列矩陣并使用MUSCLE軟件包進(jìn)行序列比對(duì)[31]，手動(dòng)調(diào)整并借助Gblocks v.0.91b軟件刪除高變區(qū)[32]。利用MrModeltest 2.0軟件對(duì)待建樹序列矩陣進(jìn)行最適模型選擇[33]，采用 RAxML 7.2.8軟件基于最大似然法(Maximum Likelihood，ML)進(jìn)行屬級(jí)水平的分子系統(tǒng)發(fā)育分析[34]，經(jīng)1000次重復(fù)的“non parametric bootsrapping”獲得統(tǒng)計(jì)學(xué)支持(Bootstrap values of the ML tree，BS)[35]。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用分離率(Isolation rate，IR)衡量組織中內(nèi)生真菌的豐富程度[36-37]；采用分離頻率(Isolation frequency，IF)比較判斷內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)菌群[38]。

采用Shannon-Weiner多樣性指數(shù)(He)進(jìn)行內(nèi)生真菌種群的多樣性水平分析。用Pielou均勻度指數(shù)分析菌群分布的均勻程度[38]。

采用Jaccard相似性指數(shù)(Cj)對(duì)內(nèi)生真菌組成的相似程度進(jìn)行比較和分析[36]。

2 結(jié)果與分析

2.1 香果樹內(nèi)生真菌主要類群組成

從 4個(gè)居群地香果樹 1980個(gè)組織塊中分離出757株內(nèi)生真菌，其中產(chǎn)孢菌株 240株，占總數(shù)31.70%，不產(chǎn)孢菌株517株，占總數(shù)68.30%。

為明確不產(chǎn)孢真菌的分類地位，本研究通過對(duì)不產(chǎn)孢的32組菌株進(jìn)行rDNA-ITS序列測(cè)定，所測(cè)得序列在 GenBank中經(jīng) Blast搜索核酸數(shù)據(jù)庫(kù)(blastn)，比對(duì)分析序列同源性，進(jìn)行分子鑒定。為了更直觀表明不產(chǎn)孢真菌的分類地位及其親緣關(guān)系，將32組菌種真菌的rDNA-ITS序列與來自Genbank的同源序列和外群序列進(jìn)行聚類分析，采用最大似然法以最適模型 GTR+G 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，分支上為Bootstrap(重復(fù)1000次)≥50%的靴帶值。由圖1—13分析可知，32組菌株分別隸屬于13個(gè)屬。

根據(jù)形態(tài)學(xué)特征并結(jié)合分子鑒定結(jié)果，初步將757株內(nèi)生真菌劃分為Arthopyrenia、Colletotrichum、Phomopsis、Penicillium等40個(gè)分類單元，在屬的水平以Arthopyrenia、Colletotrichum、Diaporthe為優(yōu)勢(shì)菌群，其分離頻率分別為 19.42%、15.32%、9.64%(表 2)。

表2 香果樹內(nèi)生真菌的菌群組成Table 2 Composition of endophytic fungi from Emmenopterys henryi

2.2 香果樹內(nèi)生真菌時(shí)空分布

2.2.1 不同居群地香果樹內(nèi)生真菌菌群的分布

在同一季節(jié)，4個(gè)居群地香果樹中內(nèi)生真菌的菌群組成存在著明顯差異，在分離頻率上表現(xiàn)為三清山＞井岡山＞銅鼓＞廬山的規(guī)律，三清山居群地香果樹內(nèi)生真菌出現(xiàn)頻率略高于井岡山，分離頻率分別為31.18%和30.32%，而銅鼓和廬山的分離頻率分別為24.52%、13.98%(表2)。

在各個(gè)居群地的優(yōu)勢(shì)類群分布存在一定的差異，由表 2可見，廬山以Colletotrichum(15.38%)、Fusarium(13.85%)和Phomopsis(12.31%)為優(yōu)勢(shì)菌群，銅鼓以Colletotrichum(21.05%)、Arthopyrenia(20.18%)和Pestalotiopsis(18.42%)為優(yōu)勢(shì)菌群，井岡山以Arthopyrenia(29.79%)、Botryosphaeria(8.51%)和Phomopsis(8.51%)為優(yōu)勢(shì)菌群，三清山以Colletotrichum(29.66%)、Arthopyrenia(22.76%)和Phomopsis(8.97%)為優(yōu)勢(shì)菌群。不難看出，Colletotrichum為廬山、銅鼓，三清山居群地的共同優(yōu)勢(shì)菌群；Arthopyrenia為銅鼓、井岡山、三清山居群地的共同優(yōu)勢(shì)菌群；Phomopsis為廬山、井岡山、三清山居群地的共同優(yōu)勢(shì)菌群。

有些內(nèi)生真菌類群在不同居群地表現(xiàn)出一定專一性，如Chloridium、Sporotrichum等僅分布在廬山，Rhizoctonia僅在銅鼓分離得到，而Gliocephalis、Scytalidium等僅分布在井岡山，Coremiella、Kramasamuha則僅在三清山分離得到。

2.2.2 香果樹不同組織中內(nèi)生真菌菌群的分布

從分離頻率來看，香果樹葉、莖和根等不同組織部位內(nèi)生真菌在數(shù)量、種群分布以及優(yōu)勢(shì)種群等方面存在較大差異，葉(50.99%)＞根(25.63%)＞莖(23.38%)(表 2)，葉中的內(nèi)生真菌數(shù)量上較為豐富，莖最少；葉的分離頻率為最高，莖的分離頻率最低，同時(shí)，在各個(gè)組織部位的優(yōu)勢(shì)類群分布也存在一定的差異。除2—3個(gè)明顯較重要的屬外(IF＞10)，分離頻率較低(IF＜5)的屬構(gòu)成了香果樹內(nèi)生真菌的主要組成。有些內(nèi)生真菌類群表現(xiàn)出一定組織專一性，如Baudoinia、Coremiella、Dissoconium等僅分布在葉 中 ；Alysidium、Gliocephalis、Scopulariops、Pseudochaetosphaeronema僅在莖中分離得到；Mucrosporium、Humicola、Fraseriella等僅分布在根中。

2.2.3 不同季節(jié)對(duì)香果樹內(nèi)生真菌菌群分布的影響

以廬山居群地為對(duì)象，分析不同季節(jié)對(duì)香果樹內(nèi)生真菌菌群分布的影響。從分離頻率來看，不同季節(jié)香果樹內(nèi)生真菌菌群組成存在較大差異，冬季(41.74%)＞秋季(40.06%)＞夏季(18.21%)(表 2)，在各個(gè)季節(jié)的優(yōu)勢(shì)類群分布也存在一定的差異。冬季以Diaporthe(16.78%)、Mucrosporium(14.77%)為優(yōu)勢(shì)菌群，秋季以Colletotrichum(15.38%)、Saccharomyces(12.59%)為優(yōu)勢(shì)菌群，夏季以Colletotrichum(15.38%)、Fusarium(13.85%)為優(yōu)勢(shì)菌群。

2.3 內(nèi)生真菌相似性及多樣性分析

2.3.1 香果樹內(nèi)生真菌菌群組成的相似性

相似性系數(shù)是反映兩個(gè)不同生境中真菌菌群組成相似程度的重要參數(shù)[39]。從相似性性系數(shù)可以看出，4個(gè)居群地香果樹內(nèi)生真菌相似性較低(表3)，其相似性系數(shù)(Cj)在0.29—0.52之間。其中廬山與井岡山(Cj=0.5185)、銅鼓和井岡山(Cj=0.5000)為中等程度相似，而其他居群地兩兩之間均為中等不相似，Cj在0.25—0.5之間。表明不同居群地香果樹內(nèi)生真菌菌群組成存在一定的差異，這可能與不同居群地的海拔、氣候因素及土壤因素有關(guān)(表1)。

從表 4可以看出，不同季節(jié)香果樹內(nèi)生真菌相似性系數(shù)(Cj)在0.46—0.60之間。其中，冬季和秋季(Cj=0.5769)、夏季和秋季(Cj=0.5385)為中等程度相似，冬季和夏季為中等不相似(Cj=0.5000)。

2.3.2 香果樹內(nèi)生真菌菌群組成的多樣性

從 Pielou均勻度指數(shù)(E)來看，4個(gè)居群地香果樹組織的內(nèi)生真菌菌群的均勻度指數(shù)在 0.7009—0.8760之間(表5)，說明香果樹內(nèi)生真菌菌群組成在4個(gè)居群地分布較均勻。其中，廬山居群地均勻度指數(shù)為 0.8760，稍高于井岡山(0.8371)，三清山居群地均勻度指數(shù)為 0.7009，略低于銅鼓(0.7861)。從Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(He)來看，香果樹內(nèi)生真菌在4個(gè)居群地的多樣性指數(shù)差異不明顯。廬山最高，He為 2.6243，三清山的最低，He為 2.0997，從而體現(xiàn)出4個(gè)居群地的香果樹內(nèi)生真菌菌群組成相對(duì)較穩(wěn)定。從 Berger-Parker優(yōu)勢(shì)度指數(shù)來看，廬山最高，為 0.9075，三清山的最低，為 0.8304。從Margalef豐富度指數(shù)(R)來看，銅鼓和井岡山最高，為 3.0169，三清山最低，為 2.1118?？梢钥闯?，不同居群地的各項(xiàng)指數(shù)都存在一定的差異。例如，銅鼓的多樣性指數(shù)和均勻度指數(shù)都偏低，但其豐富度指數(shù)最高；廬山的優(yōu)勢(shì)度指數(shù)、多樣性指數(shù)和均勻度指數(shù)都是最高，但豐富度指數(shù)卻低于銅鼓和井岡山。然而三清山的各項(xiàng)指數(shù)都是最低的，這可能與其植被長(zhǎng)期經(jīng)風(fēng)化侵蝕和重力的崩解作用而不利于內(nèi)生真菌的寄生有關(guān)(表1)。

表3 不同地點(diǎn)香果樹內(nèi)生真菌相似性系數(shù)Table 3 Similarity coefficients of endophytic fungi from Emmenopterys henryi in different sampling locations

表4 不同季節(jié)香果樹內(nèi)生真菌相似性系數(shù)Table 4 Similarity coefficients of endophytic fungi from Emmenopterys henryi in different seasons

由表 5可知，香果樹內(nèi)生真菌菌群的 Shannon-Wiener 多樣性指數(shù)(He)、Margalef 豐富度指數(shù)(R)、Berger-Parker優(yōu)勢(shì)度指數(shù)(D)和Pielou-evenness均勻度指數(shù)(E)在香果樹不同組織部位之間的變化趨勢(shì)基本一致，即: 根＞莖＞葉，由此可推斷，盡管從香果樹根中分離的內(nèi)生真菌菌株數(shù)量較少，分離頻率低，但其多樣性卻較其他兩個(gè)部位的內(nèi)生真菌菌群更高；相反，盡管從香果樹葉中分離的內(nèi)生真菌菌株數(shù)量較多，分離頻率高，但其多樣性卻較其他兩個(gè)部位的內(nèi)生真菌菌群更低。

2.4 功能活性菌株的篩選結(jié)果

對(duì)分離獲得的757株香果樹內(nèi)生真菌菌株進(jìn)行溶磷、解鉀活性、分泌IAA的功能活性篩選(圖14)，獲得82株具有溶磷效果，36株具有解鉀活性，13株具有分泌IAA活性菌株，9株既有溶磷又有解鉀活性，為進(jìn)一步探索香果樹植物內(nèi)生真菌對(duì)宿主植物促生效應(yīng)提供依據(jù)。

表5 不同居群地香果樹內(nèi)生真菌多樣性指數(shù)Table 5 Diversity indices of endophytic fungi from Emmenopterys henryi in different sampling locations

圖1 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG4的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 1 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG4 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖2 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG28的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 2 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG28 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖3 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG16的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 3 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG16 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖4 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG10和LXD16的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 4 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG4 and LXD16 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖5 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG1和XG3的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 5 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG1 and XG3 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖6 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG18的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 6 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG18 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖7 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG15的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 7 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG15 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖8 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG5的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 8 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG5 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖9 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG2等的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 9 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG2 etal. isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖10 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG17和XG20的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 10 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG17 and XG20 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖11 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG12等的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 11 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG12 etal. isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖12 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG7和XG11的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 12 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG7 and XG11 isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖13 基于ITS基因序列構(gòu)建的香果樹不產(chǎn)孢菌株XG9等的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 13 Molecular phylogenetic tree of sterile strains XG9 etal. isolated from Emmenopterys henryi inferred from ITS gene sequences

圖14 部分菌株溶磷、解鉀、產(chǎn)IAA活性的篩選圖Figure 14 Screening pictures of some strains for phosphorus-soluble, potassium-soluble and IAA-secreting activities

3 討論

本研究于2016年10月上旬和2017年2月下旬在江西省九江廬山采樣，2017年6月下旬和7月上旬分別從江西省九江廬山、銅鼓縣大溈山林場(chǎng)、井岡山市茨坪白銀湖、上饒市玉山縣三清山等4個(gè)居群地采集的香果樹的1980個(gè)組織塊中分離出757株內(nèi)生真菌，其中產(chǎn)孢的菌株240株，占總數(shù)31.70%，不產(chǎn)孢菌株 517株，占總數(shù) 68.30%，這與之前對(duì)其他植物內(nèi)生真菌的許多同類研究的結(jié)果相似[39-43]，其原因可能是內(nèi)生真菌與宿主在長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化中形成的適應(yīng)關(guān)系使得內(nèi)生真菌不僅在宿主體內(nèi)不產(chǎn)子實(shí)體及孢子[42]，而且在體外培養(yǎng)時(shí)也已不易產(chǎn)生子實(shí)體[38]。

不同居群地的優(yōu)勢(shì)類群分布存在的差異，可能與其所處地理位置的氣候因素、土壤因素和香果樹組織生理狀況以及化學(xué)組成的明顯變化等因素相關(guān)(見表1)。從氣候因素來看，4個(gè)居群地的海拔、年平均氣溫、降雨量和光照等均存在差異。溫度、濕度、光照等氣候條件的差異，一方面影響內(nèi)生真菌對(duì)宿主植物的感染、定殖和生長(zhǎng)[44]，從而使得同一植物內(nèi)生真菌的分布在不同居群地發(fā)生明顯變化[45]；另一方面導(dǎo)致植物組織的生理狀況以及化學(xué)組成的明顯變化，從而影響香果樹內(nèi)生真菌的類群和分布。從分離頻率來看，三清山和井岡山明顯高于廬山和銅鼓，原因除了氣候因素之外，可能還與人類活動(dòng)有關(guān)，三清山和井岡山采樣點(diǎn)都處于人跡罕至的森林里，受人類活動(dòng)的影響較少，同時(shí)林下植被未受到破壞，為真菌生長(zhǎng)提供有利條件，有利真菌的浸染，而廬山采樣地三寶樹是廬山主要景點(diǎn)之一，人流量大，人類干擾多，林下主要一些草本類植物，經(jīng)常被清理，不利真菌生長(zhǎng)，人類活動(dòng)對(duì)真菌浸染宿主植物具體機(jī)制有待探究。

廬山居群地不同季節(jié)的分離頻率呈現(xiàn)秋冬季節(jié)明顯高于夏季的趨勢(shì)，這種差異可能與季節(jié)的氣候因素(如溫度、濕度、光照等)、土壤因素和香果樹組織生理狀況以及化學(xué)組成的明顯變化等因素有關(guān)。主要?dú)w因于氣候因素和人類活動(dòng)。廬山屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，夏短冬長(zhǎng)，7月份采樣正是游客多、人流量大的時(shí)候，并且夏季溫度高、空氣干燥，不利于內(nèi)生真菌的寄生；而秋季采樣在10月初，經(jīng)過9中上旬的雨季，雨量充沛、溫度適宜，正好是真菌爆發(fā)性生長(zhǎng)的高峰期，有利于真菌的浸染宿主。冬季采樣是 2月底，經(jīng)過秋季真菌的孢子或菌絲對(duì)宿主的浸染，真菌孢子和菌絲在宿主體內(nèi)的生長(zhǎng)，與宿主之間形成協(xié)同作用。

不同組織部位內(nèi)生真菌在數(shù)量、種群分布以及優(yōu)勢(shì)種群等方面存在較大差異，以葉的分離頻率為最高，莖的分離頻率最低。這可能與內(nèi)生真菌的來源及其萌發(fā)、生長(zhǎng)和擴(kuò)展有關(guān)[46]。植物莖中的韌皮纖維質(zhì)地堅(jiān)韌，為韌皮部中擔(dān)負(fù)機(jī)械支持功能的成分，可能不利于內(nèi)生真菌的寄生；而葉片具有氣孔，能夠很好的與空氣接觸，可以接受空氣中大量真菌孢子，利于內(nèi)生真菌的寄生[20]。也可能與地區(qū)土壤環(huán)境有關(guān)，若土壤貧瘠，有些真菌難以在這種環(huán)境中生存，故侵入香果樹根、莖內(nèi)生真菌數(shù)量較少。具體影響內(nèi)生真菌在香果樹不同組織部位分布差異的因素需要進(jìn)一步探究。