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    CTC檢測在預(yù)測肺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后中的意義

    2020-10-30 07:17:50娜,姚
    關(guān)鍵詞:肺癌

    李 娜,姚 麗

    (連云港市第二人民醫(yī)院東院檢驗(yàn)科,江蘇 連云港 222000)

    肺癌是臨床上常見的惡性腫瘤,且男性發(fā)病率略高于女性,成為威脅人群健康、生命的主要疾病之一[1]。肺癌病因復(fù)雜,普遍認(rèn)為與長期大量吸煙、職業(yè)、電離輻射及遺傳因素有關(guān)[2]。患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性,隨著病情的發(fā)展可表現(xiàn)為局部癥狀、全身癥狀、浸潤和轉(zhuǎn)移癥狀等[3]。目前,臨床上對于肺癌以手術(shù)、化療治療為主,雖然能延緩病情發(fā)展,延長患者壽命,但是部分患者治療后由于缺乏有效的預(yù)測指標(biāo),導(dǎo)致患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率較高,難以達(dá)到預(yù)期的治療效果[4]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)是指從原發(fā)病灶進(jìn)入外周血液中的腫瘤細(xì)胞,但是臨床上,關(guān)于CTC水平與預(yù)測肺癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后相關(guān)性研究較少[5]。因此,本文探討CTC在預(yù)測肺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后中的應(yīng)用價(jià)值,報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選擇2014年4月至2015年4月治療的肺癌患者71例作為對象,設(shè)為觀察組,男41例,女30例,年齡35~88歲,平均(61.20±6.71)歲;病理類型:鱗癌25例,腺癌27例,腺鱗癌19例;腫瘤分期:Ⅰ~Ⅱ期34例,Ⅲ~Ⅳ期37例;分化程度:低分化23例,中分化36例,高分化12例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)均符合肺癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],均經(jīng)病理組織檢查確診;(2)所有患者均為初次診斷,能在醫(yī)生指導(dǎo)下完成有關(guān)檢查與治療。選擇同期在本院體檢健康者55例,設(shè)為對照組,男30例,女25例,年齡34~87歲,平均(60.28±6.69)歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其它肺部疾病或其它惡性腫瘤者;(2)合并精神異常、認(rèn)知功能障礙、自身免疫系統(tǒng)疾病或凝血功能異常者;(3)近期使用其它方法治療或影響預(yù)后評估者。兩組臨床資料均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Abbott i2000全自動免疫分析儀(雅培公司)、常溫臺式離心機(jī)(型號:TDL-40C)(上海安亭儀器公司)、Promax搖床(德國海盜爾夫Heidolph公司)、GL-802B型微型臺式真空泵(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)、熒光顯微鏡(上海順宇科技有限公司)、原位雜交儀(美國Westwood公司)、DAPI熒光保存液(賽特生物醫(yī)藥科技有限公司)、Triton X-100(上海波光生物科技有限公司)。

    1.3 循環(huán)腫瘤細(xì)胞富集方法

    1.3.1 標(biāo)本采集 觀察組患者均為初次診斷后入院治療,分別于治療前和治療完成后,采集患者早晨空腹靜脈血10 mL,對照組健康體檢當(dāng)天空腹?fàn)顟B(tài)下取靜脈血10 mL,并放置在含EDTA的抗凝管中備用。

    1.3.2 磁珠富集 取淋巴細(xì)胞分離液與血液標(biāo)本,混合后進(jìn)行加熱,控制加熱溫度為18~25 ℃,充分混合抗凝血7.5 mL及等量PBS液,經(jīng)貼壁后緩慢導(dǎo)入淋巴細(xì)胞分離層,常溫下進(jìn)行20 min離心,離心力1463 g,獲得環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層,采用PBS清洗2次,15 min離心,離心力1463 g。將細(xì)胞沉淀懸浮在磁珠緩沖液80 μL中,向緩沖液中加入CD45抗體20 μL,充分混合后進(jìn)行15 min孵育,溫度為4 ℃,加入磁珠緩沖液2 mL,10 min離心,離心力1463 g。去除上層清液,向獲得的細(xì)胞沉淀中加入緩沖液500 μL完成細(xì)胞重懸,經(jīng)磁珠MS分流柱后加入磁珠緩沖液500 μL,采用MS分流柱進(jìn)行2次清洗。取分流柱分流出的液體,10 min離心,離心力1463 g后去除上清,將細(xì)胞沉淀放置在防脫載玻片中風(fēng)干,在濃度為4%多聚甲醛中固定,見圖1[7]。

    圖1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞富集過程部分示意圖

    1.4 熒光染色

    利用PBS對制備的載玻片進(jìn)行3次清洗,每次清洗5 min,清洗完畢后采用BAS進(jìn)行0.5 h封閉,然后,再用PBS清洗3次,每次5 min。向獲得的溶液中加入小鼠抗人廣譜細(xì)胞角蛋白,4 ℃下過夜,PBS清洗3次,每次5 min,然后向溶液中加入小鼠IgG(采用FITC標(biāo)記),常溫下孵育120 min,PBS清洗3次,每次5 min。在細(xì)胞區(qū)域加入DAPI感染的細(xì)胞核7 μL,加入蓋玻片封固,在免疫熒光顯微鏡下觀察、拍照[8-9]。

    1.5 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后評估

    統(tǒng)計(jì)觀察組患者的性別、年齡、腫瘤病理類型、腫瘤分期、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、預(yù)后等資料,分析CTC陽性率與患者臨床病理特征和預(yù)后、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

    患者預(yù)后情況采用recist標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)[10]:①完全緩解(CR):病灶全部消失;②部分緩解(PR):病灶范圍較前縮小30%以上;③疾病穩(wěn)定(SD):病灶范圍縮小不超過30%,增大小于20%;④疾病進(jìn)展(PD):病灶范圍增大超過20%或出現(xiàn)新發(fā)的轉(zhuǎn)移灶或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶。將CR、PR歸為預(yù)后良好,將SD、PD歸為預(yù)后一般。CT和MRI等影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)原發(fā)病灶和局部有新的病灶出現(xiàn)定義為肺癌復(fù)發(fā),當(dāng)發(fā)現(xiàn)大腦或肝臟、脾臟、骨骼等其它部位轉(zhuǎn)移病灶時(shí)定義為肺癌轉(zhuǎn)移。

    1.6 統(tǒng)計(jì)分析

    2 結(jié) 果

    2.1 兩組CTC陽性率比較

    觀察組有39例發(fā)現(xiàn)CTC陽性,CTC陽性率為54.93%,對照組有2例CTC陽性,CTC陽性為3.64%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明肺癌患者外周血CTC陽性率高于健康人群。

    2.2 CTC陽性率與患者臨床病理特征和預(yù)后、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系

    肺癌患者CTC陽性率與腫瘤分期、分化程度、預(yù)后、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移有關(guān),Ⅲ~Ⅳ期腫瘤、低分化程度、預(yù)后一般、存在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者,其CTC陽性率明顯大于Ⅰ~Ⅱ期腫瘤、中高分化程度、預(yù)后良好、不存在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺癌患者CTC陽性率與性別、年齡、病理類型無關(guān),不同性別、年齡和病理類型的患者,其CTC陽性率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

    2.3 肺癌患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后與CTC陽性率相關(guān)性

    Pearson相關(guān)性分析結(jié)果表明:肺癌患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移與CTC陽性率呈正相關(guān)性(P<0.05);肺癌患者預(yù)后與CTC陽性率呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05),見表2。

    3 討 論

    目前,臨床上對于肺癌以手術(shù)治療、放化療為主,手術(shù)能有效的切除病灶組織,延長患者壽命[11];放化療則能殺死腫瘤組織,控制病情持續(xù)發(fā)生。但是,無論何種治療方法均存在明顯的局限性,再加上患者治療后由于缺乏有效的預(yù)后評估指標(biāo),導(dǎo)致患者死亡率、復(fù)發(fā)率較高,影響患者預(yù)后[12]。

    表1 39例CTC陽性患者臨床病理特征和預(yù)后、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系

    表2 肺癌患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后與CTC陽性率相關(guān)性

    目前臨床上對于肺癌的診斷、預(yù)后和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的判斷主要依靠CT、MRI等影像學(xué)檢測以及病理活檢手段,然而這些手段對于微小病灶的檢出能力有限,很難做出準(zhǔn)確的判斷,而且在肺癌的治療過程中很難實(shí)現(xiàn)動態(tài)監(jiān)測。CTC不同于影像檢查和病理診斷,只需要通過采集外周血即可獲取,所以能夠?qū)崿F(xiàn)動態(tài)監(jiān)測,在肺癌的治療過程中,可通過CTC的動態(tài)變化來評估治療效果,從而及時(shí)調(diào)整肺癌的治療方案。此外CTC在肺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)評估中也有重要作用,影像學(xué)檢測是無法判斷患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn),當(dāng)能夠檢測到病灶存在時(shí)實(shí)際上已經(jīng)發(fā)生了復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。而CTC則不同,腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移主要就是通過血液系統(tǒng)傳播的,可以通過檢測血液中的CTC,提前評估復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。

    本研究中,觀察組肺癌患者中CTC陽性率顯著高于對照組,說明CTC在肺癌患者中陽性率較高,能參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。CTC最早在19世紀(jì)首次提出,后經(jīng)不斷研究探索發(fā)現(xiàn)其存在于惡性腫瘤患者外周血循環(huán)中,且在良性疾病或健康人群中水平較低。對于肺癌患者而言,腫瘤細(xì)胞可自發(fā),亦可由于治療過程中擠壓、器械觸碰等進(jìn)入血液中[13]。部分CTC進(jìn)入外周循環(huán)中可以通過機(jī)體免疫識別及自然殺傷細(xì)胞作用而凋亡,僅有極少數(shù)CTC能逃避免疫監(jiān)視存活,并且通過遷移、相互聚集、黏附等方式形成微小癌栓,在特定的作用下演變?yōu)檗D(zhuǎn)移灶,從而影響患者預(yù)后。本研究中,觀察組肺癌組織中CTC陽性率與腫瘤分期、分化程度、預(yù)后、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明CTC在肺癌患者中水平受到的影響因素較多,加強(qiáng)CTC細(xì)胞測定能反應(yīng)患者的疾病嚴(yán)重程度。臨床研究表明[14]:對于肺癌患者而言,CTC檢測對預(yù)測患者預(yù)后具有更高的敏感性,它能對患者疾病嚴(yán)重程度和治療效果進(jìn)行準(zhǔn)確評估[15]。本研究中,Pearson相關(guān)性分析結(jié)果表明:肺癌患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移與CTC陽性率呈正相關(guān)性(P<0.05);肺癌患者預(yù)后與CTC陽性率呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05),說明CTC細(xì)胞陽性率與患者的預(yù)后、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)存在緊密的聯(lián)系。

    綜上所述,CTC在肺癌患者中陽性率較高,能預(yù)測患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,有助于評估患者預(yù)后,能為臨床治療方案的調(diào)整提供依據(jù)和參考。

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