丹參提取物中有效成分的質(zhì)量

程相前

摘? 要：中藥在我國(guó)有著數(shù)千年傳承歷史，是我國(guó)最為重要的文化之一，隨著時(shí)代不斷改變，中藥如今已經(jīng)得到廣大醫(yī)務(wù)人員的認(rèn)可，并在臨床方面得到了廣泛的應(yīng)用。但由于中藥成為較為復(fù)雜，為能夠更好的發(fā)揮其作用，會(huì)對(duì)其成分進(jìn)行檢測(cè)。本文以丹參為例，采用薄層層分析法對(duì)丹參提取物中的有效成分質(zhì)量進(jìn)行鑒定，以便能夠更好的了解其成分和在臨床方面的應(yīng)用，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果采取相應(yīng)措施控制其質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：丹參;提取物;有效成分質(zhì)量

丹參主要是由鼠尾草屬植物丹參的根制成，在臨床質(zhì)量方面具有祛瘀止痛，活血通絡(luò)，清心除煩的療效，屬于較為常見的中藥之一。丹參中含有的化學(xué)成分可以分為兩類，其一是脂溶性，其二是水溶性。二萜類化合物是脂溶性中主要成分，其中大部分都是丹參酮型的二萜類化合物。本文主要對(duì)丹參提取物中含有的脂溶性成分隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA采取相應(yīng)的方式進(jìn)行鑒定，將這三種成分最終檢測(cè)結(jié)果作為丹參提取物有效成分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而為新藥研發(fā)工作提供科學(xué)性參考資料。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 Series液相色譜儀，電子天平（十萬分之一）隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA對(duì)照品自制;丹參提取物20050901批、20051102批、20051201批（3批中試產(chǎn)品）;硅膠G板（自制）;甲醇（分析純、色譜純）;水為重蒸餾水;醋酸乙酯為分析純。

2 薄層鑒別

2.1 供試品溶液制備

在丹參提取物中稱量適當(dāng)?shù)乃幤贩勰?，將粉末放置于專用器皿?dāng)中，結(jié)合實(shí)際情況選取5ml醋酸乙酯放入于器皿當(dāng)中，使藥末得到充分溶解，利用醋酸乙酯定容到指定刻度，通過上述操作即可得到適用于本次研究過程的試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液制備

在選取的樣品當(dāng)中結(jié)合實(shí)際情況稱量適當(dāng)?shù)碾[丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA等藥品成分，將它們分別放置于專用檢測(cè)器皿當(dāng)中，分別向每個(gè)器皿當(dāng)中加入酷酸乙醋，使其與藥品成分混合，從而完全溶解于酷酸乙醋當(dāng)中，通過上述操作即可得到適用于本次研究過程的對(duì)照品溶液。

2.3 測(cè)定方法

參照我國(guó)有關(guān)醫(yī)療單位編寫的《中國(guó)藥典》中記錄的薄層色譜法開展試驗(yàn)，從試品溶液當(dāng)中與對(duì)照品溶液當(dāng)中分別抽取5μL液體，并從中抽取一滴液體放置同一硅膠薄層板之上，以石油醚（60～90℃）一醋酸乙酯（7：3）作為此次研究過程的展開劑，準(zhǔn)備工作完成之后將先前抽取的液體平鋪在薄層板之中，取出，放在通風(fēng)之處將其晾干。之后將薄層板放在陽光下觀察液體變化情況，發(fā)現(xiàn)在丹參提取物供試品色譜當(dāng)中有許多斑點(diǎn)出現(xiàn)，在對(duì)照品色譜中同樣有許多斑點(diǎn)出現(xiàn)，且兩方斑點(diǎn)位置，顏色均相同。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

迪馬DiamonsiTM（鉆石）C18（250mm×4.6mm，5μm）柱;甲醇-水（85：15）為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。柱溫：25℃;流速：1mL/min;進(jìn)樣量10 uL。在上述色譜條件下隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IA與其他組分能得到很好的分離。

3.2 供試品溶液的制備

在事先準(zhǔn)備的丹參提取物中稱量大約20mg藥品粉末，使其符合實(shí)驗(yàn)要求，將這些粉末放置在容量瓶當(dāng)中，向其中加入適量的甲醇，放在超聲環(huán)境當(dāng)中，直至溶液溫度與室內(nèi)溫度保持一致，向容量瓶中加入甲醇直至指定刻度，搖晃容器使內(nèi)部藥品混合在一起，當(dāng)藥品粉末充分溶解之后將液體倒入過濾器具當(dāng)中，在過濾之后的藥品溶液當(dāng)中稱量5ml液體，將其注入在25ml容量器皿當(dāng)中，再次向其中加入甲醇直至指定刻度，搖晃過濾之后的藥品溶液即可得到供試品溶液。

3.3 線性范圍考察

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥36h的隱丹參酮9.70mg、丹參酮I11.02mg和丹參酮IIA9.99mg分別于50mL量瓶中，加甲醇溶解，搖勻并用甲醇定容至刻度。分別精密吸取對(duì)照品貯備液各2ml至10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得混合對(duì)照品溶液。分別精密吸取混合對(duì)照品溶液適量，用甲醇配制成系列濃度的對(duì)照品溶液。精密吸取上述溶液各10μL進(jìn)樣，以進(jìn)樣溶液的濃度（μg/mL，x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.4 實(shí)驗(yàn)

3.4.1 精密度實(shí)驗(yàn)

依照本次實(shí)驗(yàn)流程，在相同供試品溶液之內(nèi)根據(jù)試驗(yàn)需求稱量合適溶液10μL，將此操作重復(fù)執(zhí)行六次，記錄色譜峰峰面積，并根據(jù)操作流程計(jì)算其平均峰面積。根據(jù)計(jì)算結(jié)果得出隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IIA的RSD分別為1.12%、1.00%和0.99%。從而表明本次實(shí)驗(yàn)過程中使用的儀器在精密度方面沒有任何問題。

3.4.2 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

依照供試品溶液制作過程再次制作六份相同的藥品溶液，制成之后從各個(gè)樣品當(dāng)中抽取適量的溶液，其重量大約為10μL，并對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)此次檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣品中隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IIA的RSD分別為0.76%、1.33%和0.95%，此項(xiàng)數(shù)據(jù)表明該檢測(cè)方法具有良好的重現(xiàn)性。

3.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

在同一品供試品溶液中抽取適量的藥液，其重量大約為10μL，將這份溶液分別放置在4個(gè)實(shí)驗(yàn)器皿當(dāng)中放置12小時(shí)，并觀察此期間藥品溶液變化情況，重復(fù)精密度實(shí)驗(yàn)操作流程，得到色譜峰峰面積，記錄其面積并計(jì)算得到丹參提取物中含有的隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA的RSD分別為2.67%、2.44%和2.38%，此次結(jié)果表明12小時(shí)之內(nèi)供試品溶液不會(huì)發(fā)生任何變化。

3.4.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的樣品適量（批號(hào)20050901），精密稱定，分別精密加入80%、100%、120%的對(duì)照品，按照"供試品溶液的制備"項(xiàng)下方法制備，進(jìn)樣測(cè)定，以加入法計(jì)算回收率。結(jié)果樣品中隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA的平均回收率分別為95.44%（RSD=1.75%）、97.59%（RSD=1.03%）、97.07%（RSD=1.60%）。

3.5 樣品的測(cè)定

精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA的含量。

4 討論

4.1 薄層色譜展開劑的選擇

本次實(shí)驗(yàn)采用了不同比例的石油醚一丙酮、氯仿一丙酮及石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)來作為對(duì)照品及樣品的薄層展開劑，最終以石油醚-醋酸乙酯（7：3）展開為最佳。

4.2 提取溶劑的選擇

本次實(shí)驗(yàn)考察了不同的溶劑及不同的提取方法處理樣品，分別采用了乙醇回流法、滲漉法、傳統(tǒng)水煎煮法、乙醇和甲醇的超聲提取法，最后確定用甲醇超聲（30min）提取的方法為最佳。藥品溶液制作方法雖然簡(jiǎn)單便捷，但只能夠適用于此次實(shí)驗(yàn)，這就意味上述溶液只能用于檢測(cè)丹參提取物中有效成分質(zhì)量，無法用于其他中藥檢測(cè)過程。

4.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

經(jīng)在200～400nm范圍內(nèi)光譜掃描確認(rèn)隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA均在200～290nm波段有吸收，隱丹參酮最大吸收波長(zhǎng)為262nm，丹參酮I最大吸收波長(zhǎng)為245nm，丹參酮IIA最大吸收波長(zhǎng)為270nm。為保證各成分都具合適的靈敏度和精密度，選用了3種成分均有較好吸收且吸收曲線平坦處的270nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

5 結(jié)束語

綜上所述可以看出，中藥當(dāng)中含有許多化學(xué)成分，正因如此，重要才能夠在臨床治療過程中發(fā)揮出顯著的療效，本文通過實(shí)驗(yàn)對(duì)丹參中提取物中有效成分進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)表明單種成分含量情況并不能夠真實(shí)表明中藥本身具體療效，實(shí)驗(yàn)根據(jù)丹參本身藥理確定丹參酮IIA、丹參酮I、隱丹參酮和二氫丹參酮為有效成分質(zhì)量測(cè)定指標(biāo)，通過多種體系來評(píng)價(jià)藥材本身質(zhì)量情況，將我國(guó)中醫(yī)藥整體情況以及作用體現(xiàn)出來。該方法操作簡(jiǎn)單便捷無需復(fù)雜流程，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可以反映出丹參提取物中有效成分的質(zhì)量。

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