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    超聲處理對大豆蛋白熱聚集體結(jié)構(gòu)的影響

    2020-10-27 05:44:58王冬梅范志軍安然王中江
    科學(xué)與財富 2020年23期
    關(guān)鍵詞:影響

    王冬梅 范志軍 安然 王中江

    摘? 要:結(jié)合實際,重點探討了超聲處理對大豆蛋白熱聚集體結(jié)構(gòu)的影響。

    關(guān)鍵詞:超聲處理;大豆蛋白熱聚集體結(jié)構(gòu);影響

    超聲處理能夠使大豆分離蛋白變性結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,內(nèi)部活性集團(tuán)暴露從而產(chǎn)生可溶性聚集物,提高蛋白質(zhì)熱誘導(dǎo)凝膠特性。本研究擬通過研究超聲處理對大豆蛋白熱聚集體結(jié)構(gòu)影響,指導(dǎo)未來大豆蛋白的生產(chǎn)應(yīng)用。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    大豆分離蛋白采購自山東萬得福實業(yè)有限公司,經(jīng)測定其蛋白質(zhì)含量約為92.11%。

    1.2 實驗設(shè)備

    1.3 試驗方法

    1.3.1 大豆分離蛋白可溶性熱聚集體的制備

    溶解大豆分離蛋白在10mM的pH7.0磷酸緩沖液中,得到質(zhì)量濃度5%的樣品充分?jǐn)嚢琛?℃下9000r/s轉(zhuǎn)速離心30min,取上清液裝在帶塞三角瓶中,樣品放入60℃、80℃、100℃水浴鍋處理30min。以9000r/s轉(zhuǎn)速離心30分鐘并干燥后在4℃儲存。

    1.3.2 超聲處理大豆分離蛋白可溶性熱聚集體的樣品制備

    首先溶解大豆分離蛋白在pH7.0、10mM的磷酸緩沖液中得到5%(w/v)濃度樣品攪拌2h。4℃下9000r/s轉(zhuǎn)速離心30min,取上清液裝在帶塞三角瓶中,樣品放入60℃、80℃、100℃水浴鍋處理30min。超聲波處理器浸入樣品液面中間2cm下,采用200W、600W功率處理冰塊降溫。過0.45?m濾膜。干燥后4℃儲存。

    1.3.3 傅里葉紅外掃描光譜

    凍干樣品置于干燥器內(nèi)用P2O5干燥劑干燥,1mg樣品與100mg溴化鉀研磨混勻壓片測定FTIR。數(shù)據(jù)采集期間持續(xù)用干燥的N2淋洗測量室。25℃測定波長范圍4000-400cm-1的吸收光譜,分辨率4cm-1,波長精度0.01 cm-1,掃描次數(shù)32次。用Peak Fit 4.12軟件對酰胺I帶1700-1600cm-1波段圖譜進(jìn)行分析。

    1.3.4 內(nèi)源熒光光譜

    蛋白用pH7.0,10mM的磷酸緩沖液稀釋蛋白濃度至0.1mg/mL。熒光發(fā)散光譜分析以蛋白質(zhì)內(nèi)部熒光基團(tuán)為探針,熒光光譜在290nm激發(fā),掃描發(fā)散光譜為300-400nm,激發(fā)和發(fā)射狹縫寬5nm。電壓為700mV。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 二級結(jié)構(gòu)分析

    表2,超聲處理的SPI的β-折疊含量降低,無規(guī)則結(jié)構(gòu)含量增加,可能是超聲處理加速SPI分子運動,增加分子碰撞幾率使蛋白質(zhì)無規(guī)則聚集[1],導(dǎo)致β-折疊含量降低,無規(guī)則結(jié)構(gòu)含量增加。

    2.2 內(nèi)源性熒光光譜分析

    如圖2,超聲處理使60℃、80℃加熱處理可溶性SPI的λmax紅移,是超聲處理使發(fā)色基團(tuán)暴露;200W超聲處理100℃下的λmax未改變是由于暴露的發(fā)色基團(tuán)被重新包埋。100℃加熱下的可溶性SPI進(jìn)行600W高功率超聲處理,λmax藍(lán)移,高功率超聲處理100℃加熱下的可溶性SPI生成更多可溶性SPI[2]是大量色氨酸殘基被包埋。

    超聲調(diào)控大豆蛋白聚集體的無序結(jié)構(gòu)含量顯著增加,表明大豆蛋白發(fā)生無規(guī)則聚集。超聲調(diào)控60℃和80℃熱誘導(dǎo)蛋白聚集體結(jié)構(gòu)趨向“暴露態(tài)”,而高功率超聲調(diào)控100℃熱誘導(dǎo)聚集體結(jié)構(gòu)趨于“包埋態(tài)”。

    參考文獻(xiàn)

    [1]STATHOPULOS P B,SCHOLZ G A,HWANG Y M,et al. Sonication of proteins causes formation of aggregates that resemble amyloid[J]. Protein Science,2004,13(11):3017-3027.

    [2]Zhang Q T,Tu Z C,Xiao H,et al. Influence of ultrasonic treatment on the structure and emulsifying properties of peanut protein isolate[J]. Food and Bioproducts Processing,2014,92(1):30-37.

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