保育豬和育肥豬的回腸炎——一種被低估的疾病

王晶晶 譯自，Vol.33(2019)，№8：17，19

潘雪男 審 何 閃 制圖表

腸道疾病會影響保育豬和育肥豬的福利，增加抗生素的使用量，并給世界各地的集約化養(yǎng)豬生產(chǎn)系統(tǒng)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)估測，在最常見的豬傳染病中，回腸炎(或豬增生性腸炎)可給每頭感染豬造成0.50～1.00歐元的經(jīng)濟(jì)損失。

患病豬無特異性臨床癥狀，常見腹瀉、生長速度放慢和飼料利用率下降，一旦發(fā)生亞臨床回腸炎甚至不會出現(xiàn)臨床癥狀。發(fā)現(xiàn)疾病以及快速且準(zhǔn)確的診斷是確診亞臨床或臨床回腸炎的前提，以便采取有效的治療和預(yù)防措施，從而最大程度地減少損失。

1 診斷

除了非特異性臨床癥狀外，患病豬還可能會出現(xiàn)宏觀和/或微觀的典型組織學(xué)病變。若發(fā)生急性回腸炎，患病豬的回腸黏膜和腸壁可見卡他性炎癥或出血(圖1)。

慢性腸炎的癥狀特征是患病豬腸道絨毛和隱窩上皮細(xì)胞被未成熟的增生性上皮細(xì)胞替代，導(dǎo)致回腸和空腸壁明顯增厚(圖2)。

圖1 回腸發(fā)炎，黏膜褶皺增大

胞內(nèi)勞森菌是一種需要復(fù)雜營養(yǎng)才能培養(yǎng)的細(xì)菌——只能在細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)和存活，豬感染后會引發(fā)回腸炎。因此，檢測時通常不進(jìn)行胞內(nèi)勞森菌分離，而是直接對組織樣本進(jìn)行非特異性染色，或用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)檢測感染組織、食糜和糞便樣本。與其他診斷方法相比，PCR通過擴(kuò)增特定核苷酸序列能夠產(chǎn)生更特異和更靈敏的結(jié)果。實時定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qPCR)檢測發(fā)現(xiàn)，患病豬回腸組織病變的嚴(yán)重程度與同一頭豬糞便中胞內(nèi)勞森菌基因組當(dāng)量濃度之間存在正相關(guān)性(圖3)。

圖2 回腸壁增厚

此外，研究表明，利用未免疫豬或免疫豬的平均日增重測得的臨床影響情況與用PCR檢測到的糞便中胞內(nèi)勞森菌的濃度相關(guān)，這使其成為診斷豬回腸炎的首選方法。在豬群水平上，通過酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)檢測血清中的特異性抗體有助于確定感染時間，但該方法不適用于該病的確診。

2 控制與預(yù)防

如果發(fā)生急性回腸炎，豬場需要給患病豬服用抗生素(如大環(huán)內(nèi)酯類和四環(huán)素類)進(jìn)行治療。但是，考慮到要謹(jǐn)慎使用抗生素和細(xì)菌會對抗生素產(chǎn)生耐藥性的威脅，控制和預(yù)防豬回腸炎的長期策略應(yīng)基于豬場特有的免疫接種計劃、生物安全和降低風(fēng)險因素措施。

3 田間試驗

目前尚不清楚胞內(nèi)勞森菌在歐洲豬場中的流行率及其影響，尚無數(shù)據(jù)說明由胞內(nèi)勞森菌感染引起的腸道疾病發(fā)病率，這表明有必要對歐盟各成員國進(jìn)行調(diào)查研究以確定該病原體在豬場中的流行情況。

相關(guān)研究人員正在檢測丹麥、法國、德國、西班牙、荷蘭和英國的豬群以確定胞內(nèi)勞森菌的流行情況 (圖4)。

選擇這些國家是因為它們的生豬存欄量占?xì)W洲生豬總存欄量的三分之二以上(67%)(丹麥、法國、德國、西班牙、荷蘭和英國的生豬存欄量分別為1 280萬頭、1 310萬頭、2 760萬頭、3 000萬頭、1 230萬頭和470萬頭，合計存欄1.005億頭，歐洲的生豬總存欄量為1.5億頭)。

圖4 參與研究的國家以綠色標(biāo)記

在研究結(jié)束時，對來自6個歐洲國家的144個豬群(出生到育成豬群或僅有一個來源的育肥豬群)進(jìn)行檢測，以確定是否存在胞內(nèi)勞森菌感染。從每個被檢豬群中選擇15頭保育豬(體重10 kg～25 kg)、15頭生長豬(體重25 kg～40 kg)和15頭育肥豬(體重40 kg～100 kg)采集糞便樣本。

利用診斷性測試法qPCR計算得出的樣本量足以在約300頭相同日齡的豬中以95%的置信度檢測出胞內(nèi)勞森菌，估計患病率為20%。

考慮到豬腸道疾病的發(fā)病史，從每個參試國家選擇24個豬群用于試驗。鑒于季節(jié)對豬回腸炎發(fā)病率的影響，從2017年10月開始采集糞便樣本，前后橫跨一年的時間。試驗豬隨機選擇，采樣時豬是否腹瀉并不影響其能否被選為試驗動物。從豬的直腸壺腹部人工采集糞便樣本，每頭豬采樣時均使用新的一次性手套，以避免交叉污染。

用qPCR檢測所有糞便樣本中的胞內(nèi)勞森菌特異基因組片段的濃度。

由于數(shù)據(jù)收集一直持續(xù)到2018年10月，本文將討論從丹麥的12個豬群、德國的11個豬群、西班牙的11個豬群、荷蘭的11個豬群、法國的8個豬群和英國的5個豬群上獲得的首批可用數(shù)據(jù)。本文所用的數(shù)據(jù)為自2017年10月2日至2018年3月30日所收集樣本的檢測結(jié)果。

來自參試豬群的糞便樣本100%進(jìn)行了胞內(nèi)勞森菌的檢測。各豬群和各國家的糞便樣本的陽性率存在顯著的差異。在來自丹麥豬群的糞便樣本中，經(jīng)檢測約48%的樣本呈胞內(nèi)勞森菌基因組片段陽性；在采集自西班牙的豬群和法國的豬群的糞便樣本中，陽性率較低，分別為20%和18%?？傮w而言，所有被檢糞便樣本的陽性率為34%(表1)。英國和荷蘭各豬群的糞便樣本陽性率差異特別大 (圖 5)。

研究發(fā)現(xiàn)，在同一個國家的不同豬群之間以及不同國家的豬群之間，不同年齡段的豬群在糞便樣本陽性率上存在很大的差異(圖6)。平均而言，在30%的保育豬、42%的生長豬和33%的育肥豬的糞便中檢測到了胞內(nèi)勞森菌的基因組片段。

在各年齡段豬群糞便樣本陽性率上，丹麥的保育豬糞便陽性率最高(83%)，英國、德國和西班牙的生長豬糞便陽性率最高(分別為60%、57%和33%)，荷蘭和法國育肥豬的陽性率最高(分別為54%和29%)。

在獲得更多數(shù)據(jù)后，這些中間結(jié)果將會得到完善。

4 結(jié)論

由于在所有采樣的豬群中都檢測到了胞內(nèi)勞森菌的基因組片段，因此可以認(rèn)為胞內(nèi)勞森菌是一種普遍存在的病原體，至少在發(fā)生腹瀉的豬群中是這樣。

因此，要確診胞內(nèi)勞森菌感染，檢測血清中的抗體至關(guān)重要，不過只有在數(shù)據(jù)收集完成后才能對該病原體的流行情況做出最終的結(jié)論。

胞內(nèi)勞森菌的感染需要利用qPCR檢測腹瀉豬糞便中的胞內(nèi)勞森菌或死后剖解的病理學(xué)病變才能確診。

最初的結(jié)果表明，不同國家、不同豬群和不同年齡段的豬在胞內(nèi)勞森菌的流行率上存在差異?？赡艿脑蚝陀绊懸蛩赜涗浽谡{(diào)查表中，一旦完成數(shù)據(jù)收集，便將進(jìn)行分析和發(fā)布。