• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HPLC一測多評法同時(shí)測定慢肝養(yǎng)陰片中7種成分含量

    2020-10-22 09:29:54趙志國姚建華王婧寧翟瑩瑩
    食品與藥品 2020年5期
    關(guān)鍵詞:梓醇乙素益母草

    趙志國,姚建華,王婧寧,翟瑩瑩

    (1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑管理部,遼寧 沈陽 110032;2.沈陽飛龍藥業(yè)有限公司,遼寧 本溪 117004)

    慢肝養(yǎng)陰片由地黃、黨參、五味子、枸杞子等10味中藥加工而成,主要用于慢性肝炎、肝炎后綜合癥的治療[1]?,F(xiàn)代研究表明,慢肝養(yǎng)陰制劑治療慢性乙型肝炎[2]、病毒性肝炎[3]臨床效果顯著,可有效降低抗結(jié)核藥物所致肝損害的發(fā)生率,促進(jìn)患者規(guī)律、有效地完成抗結(jié)核化療過程[4-5];其聯(lián)合替比夫定強(qiáng)化治療慢性乙型肝炎效果確切[6]。慢肝養(yǎng)陰片現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1](國家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ04592009-2016)和文獻(xiàn)報(bào)道[7-9]中僅對方中五味子醇甲進(jìn)行定量研究,未對方中所含其他成分進(jìn)行研究。中藥及其制劑,尤其是中成藥復(fù)方制劑組方藥物較多,所含成分多樣,通過各成分的整體協(xié)同作用達(dá)到臨床的治療效果,單一成分的質(zhì)量控制模式難以全面反映中成藥復(fù)方制劑的內(nèi)在質(zhì)量。高效液相色譜(HPLC)一測多評法利用中藥各成分間存在的一定內(nèi)在函數(shù)關(guān)系,通過建立內(nèi)參物與各成分間的相對校正因子,實(shí)現(xiàn)同時(shí)測定多種成分,已在中藥及其制劑的質(zhì)量控制中得以逐步應(yīng)用。本文參考質(zhì)量標(biāo)志物確認(rèn)原則,采用HPLC一測多評法對慢肝養(yǎng)陰片方中君藥地黃所含代表性成分梓醇、地黃苷D和益母草苷,黨參所含主要活性成分黨參炔苷和丁香苷,五味子所含代表性成分五味子醇甲和五味子乙素為檢測指標(biāo),選取五味子醇甲為內(nèi)參物,對慢肝養(yǎng)陰片中7種成分進(jìn)行同時(shí)測定,為提高和完善慢肝養(yǎng)陰片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供有力的數(shù)據(jù)支持。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器

    Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);Waters 1525型高效液相色譜儀(美國Waters公司);MSA125P 電子分析天平(德國Sartorius公司);Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),Eclipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),Alltima C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。

    1.2 試藥

    丁香苷對照品(批號(hào):111574-201605,CAS號(hào):118-34-3,含量:95.2 %),五味子醇甲對照品(批號(hào):110857-201815,CAS號(hào):7432-28-2,含量:99.7 %),五味子乙素對照品(批號(hào):110765-201813,CAS號(hào):61281-37-6,含量:99.1 %)均來源于中國食品藥品檢定研究院;益母草苷對照品(批號(hào):16052422,CAS號(hào):52949-83-4,含量:94.6 %,上海同田生物技術(shù)股份有限公司);梓醇對照品(批號(hào):PRF8052221,CAS號(hào):2415-24-9,含量:99.9 %),地黃苷D對照品(批號(hào):14061708,CAS號(hào):81720-08-3,含量:98.8%),黨參炔苷對照品(批號(hào):PRF8092221,CAS號(hào):136085-37-5,含量:99.0 %)均來源于成都普思生物科技股份有限公司;乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純。慢肝養(yǎng)陰片(規(guī)格:每片重0.4 g,批號(hào):2021809,2021811,2021903)均來源于浙江新明珠藥業(yè)有限公司。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 溶液的制備

    2.1.1 單成分對照品儲(chǔ)備液 精密稱取梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素對照品各適量,加甲醇溶解并制成質(zhì)量濃度分別為1.182,0.458,0.604,0.982,0.126,1.158,0.692 mg/ml的單成分對照品儲(chǔ)備液。

    2.1.2 混合對照品溶液 精密吸取2.1.1項(xiàng)下7種單成分對照品儲(chǔ)備液2.5 ml,用甲醇稀釋至50 ml,制成梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素質(zhì)量濃度分別為59.1,22.9,30.2,49.1,6.3,57.9,34.6 μg/ml的混合對照品溶液。

    2.1.3 供試品溶液 取慢肝養(yǎng)陰片數(shù)片,除去薄膜衣后,研成細(xì)粉,取1.0 g,精密稱定,置入25 ml量瓶,精密加入甲醇25 ml,稱重,超聲提取30 min,放冷后稱重,用甲醇補(bǔ)重后過濾,制成慢肝養(yǎng)陰片供試品溶液。

    2.1.4 陰性樣品溶液 按國家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ04592009-2016中慢肝養(yǎng)陰片的工藝處方分別制備缺地黃、缺黨參、缺五味子的陰性樣品,再按上述方法制成陰性樣品溶液。

    2.2 色譜條件

    色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)-0.2 %磷酸溶液(B),梯度洗脫(0~11.0 min,12.0 %A;11.0~25.0 min,12.0 %A→18.0 %A;25.0~39.0 min,18.0 %A→41.0 %A;39.0~52.0 min,41.0 %A→78.0 %A;52.0~60.0 min,78.0 %A→12.0 %A);體積流量:1.0 ml/min;檢測波長分別為210 nm(0~25.0 min檢測梓醇、地黃苷D和益母草苷)[10-12]、266 nm(25.0~39.0 min檢測黨參炔苷和丁香苷)[13-14]和250 nm(39.0~60.0 min檢測五味子醇甲和五味子乙素)[12];柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10μl。

    2.3 專屬性試驗(yàn)

    分別取2.1.2~2.1.4項(xiàng)下制備的各溶液和空白溶劑,按2.2項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣檢測,結(jié)果梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素峰形對稱,與相鄰色譜峰分離度均>1.5,理論塔板數(shù)按各成分計(jì)均≥3500,陰性樣品對慢肝養(yǎng)陰片中梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素的測定無干擾。見圖1。

    圖1 專屬性試驗(yàn)HPLC圖譜

    2.4 方法學(xué)考察

    2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取2.1.1項(xiàng)下單成分對照品儲(chǔ)備液各0.1,0.2,0.5,1.0,1.5,2.5 ml,置入6個(gè)20 ml量瓶,分別用甲醇稀釋至刻度,制成6個(gè)系列濃度混合對照品溶液,按2.2項(xiàng)色譜條件測定,記錄梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素色譜峰峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo)(A),質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(ρ),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

    表1 7種成分的線性方程及線性范圍

    2.4.2 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性考察 精密吸取2.1.2項(xiàng)下混合對照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,測得梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素峰面積的RSD分別為0.63 %,1.09 %,0.96 %,0.77 %,1.14 %,0.52 %和0.85 %。

    取同一批號(hào)慢肝養(yǎng)陰片樣品,按2.1.3項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液,依法進(jìn)樣檢測梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素的峰面積,計(jì)算得7種成分含量的RSD分別為1.01 %,1.36 %,1.15 %,1.09 %,1.85 %,0.98 %和1.27 %。

    取慢肝養(yǎng)陰片供試品溶液,于配制后0,2,4,8,12,18 h,按2.2項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣檢測梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素色譜峰的峰面積,結(jié)果慢肝養(yǎng)陰片供試品溶液18 h內(nèi)穩(wěn)定,7種成分峰面積的RSD分別為1.29 %,1.01 %,1.08 %,1.15 %,0.62 %,0.98 %和1.33 %。

    2.4.3 加樣回收率試驗(yàn) 取7種成分含量已知的慢肝養(yǎng)陰片樣品數(shù)片,除去薄膜衣,研成細(xì)粉,取9份,每份0.5 g,精密稱定,隨機(jī)分成3組,每組3份,分別精密加入混合對照品溶液(梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素質(zhì)量濃度分別為0.376,0.148,0.211,0.338,0.049,0.433,0.247 mg/ml)1.0,2.0和3.0 ml,使對照品加入量約為樣品含有量的50 %,100 %和150 %,再按2.1.3項(xiàng)供試品溶液制備方法制成加樣供試品溶液,依法進(jìn)樣檢測,7種成分的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見表2。

    表2 7種成分的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

    0.4805 0.2873 0.4440 0.7234 98.22 0.5122 0.3123 0.4440 0.7453 98.87 0.5084 0.3040 0.4440 0.7405 98.31益母草苷 0.5028 0.4279 0.2110 0.6354 98.34 98.48 1.05 0.4931 0.4196 0.2110 0.6261 97.87 0.4863 0.4138 0.2110 0.6219 98.63 0.5109 0.4348 0.4220 0.8513 98.70 0.5136 0.4422 0.4220 0.8505 97.96 0.4978 0.4066 0.4220 0.8302 96.35 0.4805 0.4089 0.6330 1.0411 99.87 0.5122 0.4444 0.6330 1.0639 99.21 0.5084 0.4326 0.6330 1.0617 99.38黨參炔苷 0.5028 0.6808 0.3380 1.0209 100.62 100.00 0.69 0.4931 0.6677 0.3380 1.0085 100.83 0.4863 0.6585 0.3380 0.9983 100.53 0.5109 0.6918 0.6760 1.3647 99.54 0.5136 0.7035 0.6760 1.3714 100.00 0.4978 0.6469 0.6760 1.3413 98.71 0.4805 0.6506 1.0140 1.6652 100.06 0.5122 0.7071 1.0140 1.7008 99.34 0.5084 0.6884 1.0140 1.7062 100.37丁香苷 0.5028 0.0965 0.0490 0.1436 96.12 96.98 1.30 0.4931 0.0947 0.0490 0.1419 96.33 0.4863 0.0934 0.0490 0.1407 96.53 0.5109 0.0981 0.0980 0.1944 98.27 0.5136 0.0998 0.0980 0.1938 97.14 0.4978 0.0917 0.0980 0.1899 96.22 0.4805 0.0923 0.1470 0.2390 99.80 0.5122 0.1003 0.1470 0.2395 96.05 0.5084 0.0976 0.1470 0.2393 96.39五味子醇甲 0.5028 0.8678 0.4330 1.3004 99.91 99.30 0.83 0.4931 0.8511 0.4330 1.2801 99.08 0.4863 0.8394 0.4330 1.2712 99.72 0.5109 0.8818 0.8660 1.7408 99.19 0.5136 0.8968 0.8660 1.7555 100.35 0.4978 0.8247 0.8660 1.7046 97.62 0.4805 0.8293 1.2990 2.1102 98.61 0.5122 0.9013 1.2990 2.1729 99.21 0.5084 0.8775 1.2990 2.1763 99.98五味子乙素 0.5028 0.4932 0.2470 0.7404 100.08 97.80 1.42 0.4931 0.4837 0.2470 0.7231 96.92 0.4863 0.4771 0.2470 0.7195 98.14 0.5109 0.5012 0.4940 0.9933 99.62 0.5136 0.5097 0.4940 0.9825 96.90 0.4978 0.4687 0.4940 0.9682 97.15 0.4805 0.4714 0.7410 1.1889 96.83 0.5122 0.5123 0.7410 1.2328 98.56 0.5084 0.4987 0.7410 1.2101 96.01

    2.5 一測多評法的建立

    2.5.1 相對校正因子的計(jì)算 精密吸取2.4.1項(xiàng)下制備的6個(gè)線性考察混合對照品溶液,依法進(jìn)樣測定梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素色譜峰的峰面積,以五味子醇甲為內(nèi)參物,按相對校正因子計(jì)算公式?k/s=?k/?s=(ρk×As)/(ρs×Ak)(式中ρk為內(nèi)參物五味子醇甲質(zhì)量濃度,As為其他待測成分的峰面積,ρs為其他待測成分的質(zhì)量濃度,Ak為內(nèi)參物五味子醇甲的峰面積)分別計(jì)算梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷和五味子乙素的相對校正因子。結(jié)果見表3。

    2.5.2 不同儀器、色譜柱對相對校正因子的影響 精密吸取2.1.2項(xiàng)下混合對照品溶液,依法進(jìn)樣測定梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素色譜峰的峰面積,以五味子醇甲為內(nèi)參物,分別考察2種品牌高效液相色譜儀(Agilent 1100型、Waters 1525型)和3種品牌色譜柱(Diamonsil C18色譜柱、Eclipse XDB-C18色譜柱、Alltima C18色譜柱)對梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷和五味子乙素相對校正因子的影響,結(jié)果見表4。

    2.5.3 不同流速對相對校正因子的影響 精密吸取2.1.2項(xiàng)下混合對照品溶液,依法進(jìn)樣測定梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素色譜峰的峰面積,以五味子醇甲為內(nèi)參物,分別考察不同流速(0.8,0.9,1.0,1.1,1.2 ml/min)對梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷和五味子乙素相對校正因子的影響,結(jié)果見表5。

    2.5.4 不同實(shí)驗(yàn)人員對相對校正因子的影響 精密吸取2.1.2項(xiàng)下混合對照品溶液,依法進(jìn)樣測定梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素色譜峰的峰面積,以五味子醇甲為內(nèi)參物,分別考察3名實(shí)驗(yàn)人員對梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷和五味子乙素相對校正因子的影響,結(jié)果見表6。

    表3 慢肝養(yǎng)陰片中各成分的相對校正因子

    表4 不同儀器、色譜柱對相對校正因子的影響

    表5 不同流速對相對校正因子的影響

    表6 不同實(shí)驗(yàn)人員對相對校正因子的影響

    2.5.5 待測組分色譜峰的定位 精密吸取2.1.2項(xiàng)下混合對照品溶液,依法進(jìn)樣測定,記錄梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素色譜峰的保留時(shí)間,以內(nèi)參物五味子醇甲色譜峰為基準(zhǔn)峰,采用相對保留時(shí)間值法對色譜峰定位,分別考察2種品牌高效液相色譜儀(Agilent 1100型、Waters 1525型)和3種品牌色譜柱(Diamonsil C18色譜柱、Eclipse XDB-C18色譜柱、Alltima C18色譜柱)對梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷和五味子乙素相對保留時(shí)間值的影響,結(jié)果見表7。

    2.6 慢肝養(yǎng)陰片含量測定中一測多評法(QAMS)與外標(biāo)法(ESM)的結(jié)果比較

    取3個(gè)批號(hào)的慢肝養(yǎng)陰片樣品適量,按2.1.3項(xiàng)下方法,每個(gè)批號(hào)平行制備慢肝養(yǎng)陰片供試品液3份,按2.2項(xiàng)色譜條件下依法進(jìn)樣測定梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素的峰面積,分別采用外標(biāo)法和一測多評法計(jì)算各成分的含量,計(jì)算相對平均偏差(RAD)。結(jié)果見表8。

    3 討論

    3.1 定量檢測指標(biāo)成分及內(nèi)參物的選擇

    慢肝養(yǎng)陰片由地黃、黨參、五味子、枸杞子等10味中藥組方而來,方中地黃清熱養(yǎng)陰,枸杞子滋補(bǔ)肝腎,合為君藥;五味子生津補(bǔ)腎,麥冬、北沙參養(yǎng)陰生津,川楝子疏肝柔肝,合為臣藥;黨參、人參健脾補(bǔ)氣、提高免疫力,桂枝溫經(jīng)通陽、防滋膩太過,合為佐藥;當(dāng)歸引藥入肝經(jīng),為使藥。諸藥共奏,以達(dá)養(yǎng)陰清熱、滋補(bǔ)肝腎的臨床功效。中藥質(zhì)量是中藥臨床療效的保障,中藥質(zhì)量標(biāo)志物已成為中藥質(zhì)量評價(jià)與質(zhì)量控制的核心概念。本文參考中藥質(zhì)量標(biāo)志物以君藥為首選,同時(shí)兼顧臣佐使藥的確認(rèn)原則,選取慢肝養(yǎng)陰片方中君藥地黃所含代表性成分梓醇、地黃苷D和益母草苷,黨參所含主要活性成分黨參炔苷和丁香苷,五味子所含代表性成分五味子醇甲和五味子乙素為定量檢測指標(biāo)成分,為全面評價(jià)慢肝養(yǎng)陰片內(nèi)在產(chǎn)品質(zhì)量提供數(shù)據(jù)支持;所選7種定量檢測指標(biāo)成分中五味子醇甲性質(zhì)較為穩(wěn)定,對照品價(jià)廉易得,同時(shí)慢肝養(yǎng)陰片中五味子醇甲成分含量較高,故選取五味子醇甲作為內(nèi)參物,采用HPLC一測多評法同時(shí)測定慢肝養(yǎng)陰片中7種成分。

    表7 不同儀器、色譜柱條件下各成分的相對保留時(shí)間值

    表8 一測多評法與外標(biāo)法測得的慢肝養(yǎng)陰片中各成分的含量(n=3)/mg·g-1

    3.2 供試品溶液制備方法的選擇

    本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn),以指標(biāo)成分梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素的綜合提取率為首選指標(biāo),同時(shí)兼顧雜質(zhì)峰干擾情況,依次對比考察了不同提取溶劑:甲醇[11-17]、95 %乙醇溶液、60 %甲醇溶液[10]和不同提取方式:超聲提取法、加熱回流提取法。結(jié)果表明,以甲醇為提取溶劑時(shí),待測成分綜合提取率最佳,雜質(zhì)成分干擾相對較小;超聲提取和加熱回流提取所測成分綜合提取率無顯著差異,但加熱回流提取雜質(zhì)干擾較大。同時(shí)通過試驗(yàn)摸索,最終確定以甲醇超聲提取30 min制備慢肝養(yǎng)陰片供試品溶液。

    3.3 流動(dòng)相的選擇

    本實(shí)驗(yàn)以指標(biāo)成分梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素的峰形及分離效果為首先指標(biāo),同時(shí)兼顧色譜峰基線的平穩(wěn)情況,首先考察基礎(chǔ)流動(dòng)相甲醇-水和乙腈-水[13-17],結(jié)果表明,以甲醇-水為流動(dòng)相時(shí),色譜圖基線漂移嚴(yán)重,干擾各成分檢測;乙腈-水流動(dòng)相體系檢測時(shí)基線平穩(wěn),但丁香苷和五味子醇甲色譜峰拖尾嚴(yán)重,與相鄰峰分離度不符合要求??紤]到磷酸溶液可改善峰形,遂采用乙腈-0.2 %磷酸溶液[11-12]為流動(dòng)相,同時(shí)不斷優(yōu)化流動(dòng)相中乙腈和0.2 %磷酸溶液比例,最終確定以乙腈-0.2 %磷酸溶液為流動(dòng)相,同時(shí)測定慢肝養(yǎng)陰片中7種指標(biāo)性成分。

    本實(shí)驗(yàn)首次采用HPLC一測多評法同時(shí)測定慢肝養(yǎng)陰片中梓醇、地黃苷D、益母草苷、黨參炔苷、丁香苷、五味子醇甲和五味子乙素的含量,建立的方法操作便捷、結(jié)果準(zhǔn)確。建立了慢肝養(yǎng)陰片多指標(biāo)成分質(zhì)量控制模式,為提升慢肝養(yǎng)陰片質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和全面評價(jià)其內(nèi)在產(chǎn)品質(zhì)量提供了數(shù)據(jù)支持。

    猜你喜歡
    梓醇乙素益母草
    梓醇對IL-1β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制研究
    梓醇防治骨質(zhì)疏松癥的研究進(jìn)展
    燈盞乙素在抑制冠脈搭橋術(shù)后靜脈橋再狹窄中的應(yīng)用
    燈盞乙素對OX-LDL損傷的RAW264.7細(xì)胞中PKC和TNF-α表達(dá)的影響
    婦科良藥益母草
    地黃單體梓醇促成骨細(xì)胞分化的活性研究*
    HPLC法同時(shí)測定益母草中4種成分
    中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:06
    梓醇對糖尿病大鼠胰島細(xì)胞Insulin表達(dá)的影響
    5種干燥方法對益母草質(zhì)量的影響
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    米非司酮聯(lián)合加味八珍益母草膏治療宮內(nèi)妊娠物殘留24例
    国产乱人偷精品视频| 2018国产大陆天天弄谢| 久久影院123| 一本一本综合久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美成人一区二区免费高清观看| 嘟嘟电影网在线观看| 国产色婷婷99| 黄色日韩在线| 久久99精品国语久久久| 久久综合国产亚洲精品| 成人二区视频| 91狼人影院| freevideosex欧美| av一本久久久久| 亚洲国产色片| 欧美高清性xxxxhd video| 在线精品无人区一区二区三 | 日本午夜av视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品一区在线观看国产| 免费黄色在线免费观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 中国三级夫妇交换| 热99国产精品久久久久久7| 国产在线一区二区三区精| 免费看光身美女| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品免费大片| 乱系列少妇在线播放| 夜夜爽夜夜爽视频| 中文字幕av成人在线电影| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品三级大全| 一级毛片我不卡| 亚洲国产精品国产精品| 老司机影院毛片| 哪个播放器可以免费观看大片| 男女免费视频国产| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美性感艳星| 国产精品久久久久久av不卡| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 精品视频人人做人人爽| 国产黄片美女视频| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲欧洲日产国产| av女优亚洲男人天堂| 国产视频内射| 免费人成在线观看视频色| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久久视频综合| 国产淫片久久久久久久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产免费福利视频在线观看| 国产男女内射视频| 国产视频内射| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 亚洲伊人久久精品综合| 精品久久久精品久久久| 99热这里只有是精品50| 亚洲在久久综合| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 搡老乐熟女国产| 午夜激情福利司机影院| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美区成人在线视频| 国产爱豆传媒在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 一区二区三区免费毛片| 特大巨黑吊av在线直播| 一个人看的www免费观看视频| 久久99精品国语久久久| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲一区二区三区欧美精品| 波野结衣二区三区在线| 亚洲电影在线观看av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 永久免费av网站大全| 黄色日韩在线| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲中文av在线| 日韩国内少妇激情av| 黄色日韩在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在| www.av在线官网国产| 99视频精品全部免费 在线| 日本av免费视频播放| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 成人国产av品久久久| 日本wwww免费看| 大片免费播放器 马上看| 老女人水多毛片| 欧美xxⅹ黑人| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产精品欧美亚洲77777| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人综合一区亚洲| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 干丝袜人妻中文字幕| 在线精品无人区一区二区三 | 最近最新中文字幕大全电影3| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产乱人视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久久久久久精品精品| 亚洲精品第二区| 久久av网站| 亚洲成人中文字幕在线播放| 大片免费播放器 马上看| 一个人免费看片子| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久6这里有精品| 欧美 日韩 精品 国产| 伦理电影大哥的女人| 一区二区av电影网| 最近的中文字幕免费完整| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产 一区精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 中文字幕亚洲精品专区| 人体艺术视频欧美日本| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久国内精品自在自线图片| 久久久精品免费免费高清| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲经典国产精华液单| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 干丝袜人妻中文字幕| 99国产精品免费福利视频| 草草在线视频免费看| 嫩草影院入口| 国产 一区 欧美 日韩| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久精品94久久精品| 久久精品国产a三级三级三级| av福利片在线观看| 国产成人精品婷婷| 国产91av在线免费观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 少妇人妻久久综合中文| 一级黄片播放器| 日韩成人伦理影院| 久久久久精品久久久久真实原创| 夜夜骑夜夜射夜夜干| h视频一区二区三区| 国产精品福利在线免费观看| 91精品伊人久久大香线蕉| av在线老鸭窝| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美zozozo另类| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲av日韩在线播放| 国产视频首页在线观看| 国产乱人偷精品视频| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久99热6这里只有精品| 欧美高清成人免费视频www| 日韩av在线免费看完整版不卡| 我要看日韩黄色一级片| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品无大码| 国产成人免费无遮挡视频| 国产久久久一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 99热国产这里只有精品6| 亚洲va在线va天堂va国产| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲av不卡在线观看| 看十八女毛片水多多多| 一本色道久久久久久精品综合| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费少妇av软件| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 天美传媒精品一区二区| 超碰97精品在线观看| 看免费成人av毛片| 激情五月婷婷亚洲| videos熟女内射| 日日啪夜夜撸| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产亚洲最大av| 永久免费av网站大全| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产精品成人在线| 国产亚洲欧美精品永久| 精品久久久久久久末码| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 嘟嘟电影网在线观看| 国产av一区二区精品久久 | 三级经典国产精品| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 成人国产麻豆网| 国国产精品蜜臀av免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 免费在线观看成人毛片| 亚洲,欧美,日韩| 美女主播在线视频| 国模一区二区三区四区视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 少妇的逼水好多| 夫妻午夜视频| 国产亚洲欧美精品永久| 插阴视频在线观看视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品久久久噜噜| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 交换朋友夫妻互换小说| 中国三级夫妇交换| 久久国产亚洲av麻豆专区| 成人二区视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久久国产一区二区| 午夜激情福利司机影院| 国产伦在线观看视频一区| 日本色播在线视频| 热99国产精品久久久久久7| 熟女av电影| 亚洲国产精品专区欧美| 婷婷色综合www| 91狼人影院| 大码成人一级视频| 国产亚洲一区二区精品| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品一及| 久久久色成人| 又爽又黄a免费视频| av网站免费在线观看视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 色网站视频免费| 国产亚洲最大av| 老熟女久久久| 在线观看av片永久免费下载| 欧美另类一区| 免费看av在线观看网站| 久久人妻熟女aⅴ| 高清不卡的av网站| 99热这里只有是精品50| 中文字幕av成人在线电影| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 中文资源天堂在线| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品,欧美精品| 免费观看性生交大片5| 精品亚洲成a人片在线观看 | 高清欧美精品videossex| 熟女av电影| 色吧在线观看| 水蜜桃什么品种好| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av中文av极速乱| 丰满少妇做爰视频| 97超碰精品成人国产| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲国产最新在线播放| 成人午夜精彩视频在线观看| 在线观看一区二区三区| 在线免费十八禁| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日韩大片免费观看网站| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品久久久久久久电影| 综合色丁香网| 国产欧美日韩精品一区二区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 美女国产视频在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 色5月婷婷丁香| 日韩三级伦理在线观看| 成人二区视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 性色avwww在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 视频区图区小说| 在线免费十八禁| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久影院123| 成人综合一区亚洲| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久久色成人| 国产一区二区三区综合在线观看 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产精品福利在线免费观看| 日韩亚洲欧美综合| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 夫妻午夜视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 寂寞人妻少妇视频99o| av卡一久久| 国产成人午夜福利电影在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产精品久久久久久久电影| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 99九九线精品视频在线观看视频| 91精品国产九色| 日韩人妻高清精品专区| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久久国产一区二区| 国产深夜福利视频在线观看| 中文欧美无线码| 久久精品夜色国产| 身体一侧抽搐| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 永久免费av网站大全| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲成色77777| 亚洲内射少妇av| 久久6这里有精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久久久久久久免费av| www.色视频.com| 国产成人免费无遮挡视频| av在线app专区| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲国产欧美在线一区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久热久热在线精品观看| 国产伦理片在线播放av一区| 男女下面进入的视频免费午夜| 免费大片18禁| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美高清成人免费视频www| 国产一区二区在线观看日韩| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 在线观看一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 高清黄色对白视频在线免费看 | 直男gayav资源| 看非洲黑人一级黄片| 如何舔出高潮| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 简卡轻食公司| 欧美xxⅹ黑人| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久久久国产网址| 中国国产av一级| 在线播放无遮挡| 日韩三级伦理在线观看| av在线app专区| 久久99热这里只有精品18| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品视频女| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲电影在线观看av| 亚洲综合精品二区| av福利片在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人午夜福利电影在线观看| 少妇丰满av| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产高清三级在线| 久久99蜜桃精品久久| 99热全是精品| 久久久午夜欧美精品| 99热6这里只有精品| 亚洲国产精品999| 天堂8中文在线网| 亚洲精品一二三| 亚洲国产精品一区三区| 在线观看一区二区三区激情| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 一个人免费看片子| 在线观看三级黄色| 伊人久久国产一区二区| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 中文字幕av成人在线电影| 国产精品熟女久久久久浪| 1000部很黄的大片| 五月天丁香电影| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 2022亚洲国产成人精品| 青春草国产在线视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产高潮美女av| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产有黄有色有爽视频| 五月天丁香电影| 中文天堂在线官网| 免费黄色在线免费观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 在线免费十八禁| 午夜日本视频在线| 麻豆乱淫一区二区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 人体艺术视频欧美日本| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产免费视频播放在线视频| 国产在线免费精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品国产av在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 人人妻人人看人人澡| 大片电影免费在线观看免费| 免费少妇av软件| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产av一区二区精品久久 | 国产69精品久久久久777片| 在线看a的网站| 一本久久精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一区二区三区免费毛片| 国产在线免费精品| 毛片一级片免费看久久久久| 性高湖久久久久久久久免费观看| 成人漫画全彩无遮挡| 高清视频免费观看一区二区| 色视频在线一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 激情 狠狠 欧美| 97超碰精品成人国产| 成人漫画全彩无遮挡| 日本黄色日本黄色录像| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲中文av在线| 婷婷色综合www| 欧美精品一区二区大全| 国产69精品久久久久777片| 午夜日本视频在线| 一级av片app| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美高清性xxxxhd video| 中国三级夫妇交换| 精品视频人人做人人爽| 国产高清三级在线| 2022亚洲国产成人精品| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 在线观看av片永久免费下载| 午夜免费鲁丝| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲人成网站在线观看播放| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 少妇 在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品伦人一区二区| 99re6热这里在线精品视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产伦在线观看视频一区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 日本免费在线观看一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 秋霞伦理黄片| 日韩三级伦理在线观看| 又爽又黄a免费视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美日韩综合久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 欧美+日韩+精品| 一级a做视频免费观看| 欧美高清成人免费视频www| 青青草视频在线视频观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久99精品国语久久久| 老熟女久久久| 黑人猛操日本美女一级片| 日本黄色日本黄色录像| 日本欧美国产在线视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 免费黄网站久久成人精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲国产欧美人成| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产精品福利在线免费观看| 99久久人妻综合| 一级a做视频免费观看| 国产欧美亚洲国产| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美xxⅹ黑人| 美女高潮的动态| 男的添女的下面高潮视频| 欧美3d第一页| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 极品少妇高潮喷水抽搐| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 精品少妇黑人巨大在线播放| 插阴视频在线观看视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 直男gayav资源| 欧美国产精品一级二级三级 | 精品国产露脸久久av麻豆| 我要看日韩黄色一级片| 少妇的逼水好多| 亚洲怡红院男人天堂| 97精品久久久久久久久久精品| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产精品一区二区在线不卡| 欧美97在线视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 成人综合一区亚洲| 国产精品人妻久久久影院| 一个人免费看片子| 777米奇影视久久| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 97在线人人人人妻| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国内精品宾馆在线| 在线看a的网站| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 黄片wwwwww| 国产91av在线免费观看| www.色视频.com| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产一区有黄有色的免费视频| 国产亚洲一区二区精品| 91久久精品电影网| 日韩亚洲欧美综合| 天堂中文最新版在线下载| 久久99热6这里只有精品| 日日撸夜夜添| 尾随美女入室| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 少妇人妻一区二区三区视频| 妹子高潮喷水视频| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产在线视频一区二区| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品无大码| 联通29元200g的流量卡| 久久 成人 亚洲| 两个人的视频大全免费| 国产美女午夜福利| 少妇丰满av| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲高清免费不卡视频| 国产永久视频网站| 久久久久久久久久久丰满| 97在线视频观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲精品aⅴ在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲电影在线观看av| 亚洲av综合色区一区| 日韩av免费高清视频| 国产黄片美女视频| 国产精品久久久久成人av| 街头女战士在线观看网站| 亚洲第一av免费看| 免费观看无遮挡的男女| freevideosex欧美| 久久久a久久爽久久v久久| av在线播放精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产久久久一区二区三区| 日韩中字成人| 久久久精品免费免费高清| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产黄片美女视频| 国产精品久久久久成人av| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美另类一区| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲av不卡在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 黄色欧美视频在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久久久久久国产电影| 伦理电影免费视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 高清日韩中文字幕在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国内揄拍国产精品人妻在线|