東莞地區(qū)腦梗死患者CYP2C19 相關(guān)基因多態(tài)性分布及治療指導(dǎo)價(jià)值探討

王婭 劉璐璐 張中興

（1 東莞臺(tái)心醫(yī)院藥劑科 廣東 東莞 523800）

（2 東莞臺(tái)心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 廣東 東莞 523800）

腦梗死是臨床上較為常見的卒中類型，占我國腦卒中的69.6%～70.8%。數(shù)據(jù)調(diào)查結(jié)果表明[1]：我國缺血性腦卒中年復(fù)發(fā)率為17.7%，影響患者健康、生活。目前，臨床上對(duì)于腦梗死治療多以改善腦血循環(huán)（包括：靜脈溶栓、抗血小板、擴(kuò)容及降纖等）、他汀及神經(jīng)保護(hù)為主。阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷抗血小板治療腦梗死具有良好的預(yù)防效果[2]。臨床研究表明[3]：對(duì)于具有高危復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)/伴有顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄的腦梗死患者，與阿司匹林單藥治療相比，聯(lián)合氯吡格雷能降低1 年內(nèi)卒中復(fù)發(fā)率，亦可減少微栓子數(shù)量、出血風(fēng)險(xiǎn)。細(xì)胞色素P450（CYP450）是存在于肝臟中的由一系列結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)的酶組成的超家族，是藥物在體內(nèi)代謝的主要酶系[4]。CYP2C19 是CYP450 家族中較為重要的藥物代謝酶，是影響氯吡格雷、奧美拉唑、普萘洛爾等藥物代謝的重要原因；而基因多態(tài)性則是引起同一藥物不同個(gè)體藥效不同的重要原因之一。因此，本研究以腦梗死患者為對(duì)象，探討東莞地區(qū)腦梗死患者CYP2C19 相關(guān)基因多態(tài)性分布及治療指導(dǎo)價(jià)值，報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019 年6 月—2020 年3 月腦梗死患者100 例作為對(duì)象，所有患者均為東莞籍貫，男63 例，女37 例，年齡（43 ～79）歲，平均（54.59±5.73）歲；NIHSS 評(píng)分（8 ～13）分，平均（11.21±2.18）分；疾病史：高血壓48 例，高血脂26 例，糖尿病15 例，心房顫動(dòng)11 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且患者均為急性起??；②均為局灶神經(jīng)功能缺損（一側(cè)面部或肢體無力或麻木，語言障礙等），少數(shù)為全面神經(jīng)功能缺損；③影像學(xué)出現(xiàn)責(zé)任病灶或癥狀/體征持續(xù)24h 以上；排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并精神異常、血液系統(tǒng)疾病或TIA 者；②白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于0.3×109/L、自身免疫系統(tǒng)疾病或器質(zhì)性疾病者；③非血管性病因或伴有腦出血者。

1.2 方法

（1）儀器與設(shè)備。多通道熒光定量分析儀-Fascan 48S、雙通道熒光檢測(cè)儀內(nèi)置分析軟件（西安天隆科技有限公司）；高速/低速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）：HC-1016、旋渦混合儀（上海生工微型）；100 ～1000μL、10～100μL、1 ～2.5μL 規(guī)格移液槍；特異位點(diǎn)地高辛染色液（濟(jì)南廣音醫(yī)療科技有限公司）；CQ-WBC 型萃取液；BC-WBC 保存液。（2）檢測(cè)方法。所有患者入院后采集外周靜脈血2mL，放入EDTA 抗凝管中，并進(jìn)行編號(hào)（與離心管編號(hào)保持一致，并發(fā)生混淆）；采用100 ～1000uL 移液器取CQ-WBC 型萃取液1000uL，放入離心管中；采用一次性醫(yī)用巴氏吸管取血樣300～500uL，并加入另一支新的離心管中（做好標(biāo)記）；采用10～100uL 移液器吸取血樣標(biāo)本100uL，并放入離心管中，充分混合均勻后10min 靜置，40s 以上離心，速度5000rpm，取出紅色上液（留白色富集團(tuán)）；向獲得的沉淀物中加入100uL BC-WBC 保存液，放混勻儀中充分振蕩使得白細(xì)胞富集團(tuán)完全分解。取室溫下取試劑1 ～3min 復(fù)溶，15s 以上離心，并標(biāo)本，加入1.5uL 標(biāo)本完成15 ～20s 離心，經(jīng)變性、退火復(fù)性過程，特異性雙Z 型探針和DNA 單鏈完成原位雜交，目標(biāo)探針雜交目的基因位點(diǎn)，定位探針雜交鄰近基因位點(diǎn)。雙Z 探針雜交后，立體型熒光放大系統(tǒng)才會(huì)發(fā)光并被捕捉，經(jīng)曲線分析后解讀基因型，并完成CYP2C19*3、CYP2C19*2、CYP2C19*17 三個(gè)位點(diǎn)等位基因分布，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果指導(dǎo)氯吡格雷治療[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析處理，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，行t檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

東莞地區(qū)腦梗死患者CYP2C19 相關(guān)基因多態(tài)性分布較廣，CYP2C19*3 基因型中以GG 為主，占93.00%；CYP2C19*2 基因型中以GG 和GA 為主，分別占：53.50%和43.50%；CYP2C19*17 基因型中以CC 為主，占97.00%，見表1。

表1 東莞地區(qū)腦梗死患者CYP2C19 相關(guān)基因多態(tài)性分布

3.討論

氯吡格雷是腦梗死患者中常用的治療藥物，而CYP2C19酶是氯吡格雷體內(nèi)代謝過程中較為重要的生物酶，患者用藥后藥物經(jīng)C Y450 酶代謝轉(zhuǎn)化為活性代謝產(chǎn)物，并通過二硫健不可逆連接到血小板表面的二磷酸腺苷（A D P）受體P2Y12 上，從而抑制APD 受體依賴性血小板GPIIb/IIIa 復(fù)合物的形成，抑制血小板聚集。臨床研究表明[7]：CYP2C19相關(guān)基因多態(tài)性的存在與該酶活性存在緊密的聯(lián)系。國外學(xué)者研究表明：CYP2C19、ABCBI、PONI 等基因多態(tài)性中，C Y P2C19 基因多態(tài)性最為明顯，是影響氯吡格雷抵抗的重要遺傳因素。影響氯吡格雷代謝的C Y P2C19 相關(guān)基因多態(tài)性的位點(diǎn)主要有*2、*3、*17。臨床上，根據(jù)攜帶CYP2C19各位點(diǎn)基因型的不同，將氯吡格雷的代謝分為快代謝型、正常代謝型、慢代謝型及中代謝型四種不同的類型。2010年美國F D A 對(duì)氯吡格雷說明書進(jìn)行修改，建議腦梗死患者治療前檢測(cè)C Y P2C19 基因多態(tài)性，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果調(diào)整治療方案；對(duì)于C Y P2C19 基因多態(tài)性呈慢代謝型患者，則應(yīng)考慮調(diào)整治療方案，降低心腦血管疾病發(fā)生率，促進(jìn)患者早期恢復(fù)[8]。本研究中，東莞地區(qū)腦梗死患者C Y P2C19 相關(guān)基因多態(tài)性分布較廣，C Y P2C19*3 基因型中以G G 為主，占93.00%；CYP2C19*2 基因型中以GG 和GA 為主，分別占：54.00% 和43.00%；C Y P2C19*17 基因型中以C C 為主，占97.00%，說明東莞地區(qū)腦梗死患者C Y P2C19 相關(guān)基因多態(tài)性較為普遍，能影響患者血小板聚集治療效果。

綜上所述，加強(qiáng)東莞地區(qū)腦梗死患者C Y P2C19 相關(guān)基因多態(tài)性分布測(cè)定能確定其遺傳特性，亦可評(píng)估氯吡格雷治療抵抗風(fēng)險(xiǎn)，能為患者個(gè)體化方案治療提供參考。