桑寄生超微粉顆粒提取工藝優(yōu)化及體外溶出度的研究

陳舒曼　黃晶晶　葉美麟

【摘 ?要】目的：優(yōu)化纖維素酶法輔助超聲波提取桑寄生超微粉總黃酮工藝及考察桑寄生超微粉顆粒溶出性。方法：通過(guò)星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法預(yù)測(cè)最佳桑寄生超微粉總黃酮提取工藝，并根據(jù)人體消化部位設(shè)計(jì)四種介質(zhì)，考察桑寄生超微粉顆粒的體外溶出度。結(jié)果：最佳提取工藝條件為：酶用量3.0mg/g、酶解時(shí)間18min、料液比1：32、超聲時(shí)間16min;體外溶出量分別為：水97.85%、pH1.2鹽酸溶液78.45%、pH4.0 醋酸鹽溶液80.94%、pH6.8 磷酸鹽緩沖液96.55%。結(jié)論：星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化工藝與實(shí)際值相似度高，能快速篩選出最佳桑寄生超微粉提取工藝;桑寄生超微粉顆粒溶出性良好，適合用水沖服，在人體消化道各器官均釋放和良好，易于吸收。

【關(guān)鍵詞】桑寄生超微粉顆粒;星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法;提取工藝;溶出性

【中圖分類(lèi)號(hào)】R197??????【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ?????【文章編號(hào)】1672-3783（2020）06-02265-01

桑寄生為桑寄生科植物桑寄生?Taxillus chinensis （DC.）Danse 的干燥帶葉莖枝。桑寄生藥用歷史悠久，補(bǔ)益療效顯著，但甚少作為單一補(bǔ)劑用于臨床?，F(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)桑寄生多種功效的藥用成分為黃酮及生物堿類(lèi)化合物[1]，為更好地發(fā)揮桑寄生的補(bǔ)益藥用功效，體現(xiàn)其臨床用藥價(jià)值，現(xiàn)采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化纖維素酶法輔助超聲波提取桑寄生超微粉總黃酮工藝工藝，并以考察超微粉顆粒在擬人體消化部位介質(zhì)中的溶出度，為優(yōu)化桑寄生藥用成分的提取工藝及溶出性考察研究提供一定的思路。

1?儀器與材料

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（Cary 60）X015，Agilent technology;自動(dòng)取樣溶出儀（708DS）R004?Agilent technology。桑寄生超微粉顆粒，自制顆粒;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：100080-201929）中國(guó)檢定研究院;纖維素酶（批號(hào)：20191012），和氏璧生物科技有限公司。

2?方法與結(jié)果

2.1超微粉顆粒的制備 按比例取超微粉、輔料及濕浸膏適量，充分混勻，1%PVP作粘合劑，制軟材干燥1h，即得。

2.2蘆丁含量測(cè)定

吸收波長(zhǎng)的確定 取對(duì)照品溶液0.018mg/ml，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色法?[2]掃描得于500nm波長(zhǎng)處有較平穩(wěn)的最大吸收且無(wú)雜峰干擾，故以500nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

供試液制備 精密稱(chēng)取超微粉顆粒2g，以70%乙醇20 ml超聲40min，加入鹽酸2ml水浴1h，過(guò)濾并定容于25ml容量瓶?[3]，即得。

標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取對(duì)照品溶液1，2，3，4，5與6 ml，分別置于25 ml比色管中，測(cè)定吸光度 ，得回歸方程為y=1.9086x，相關(guān)系數(shù) r=1，具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn) 精密吸取0.10ml供試品溶液和對(duì)照品溶液分別置于25ml比色管中，連續(xù)測(cè)定吸光度五次，結(jié)果RSD均為0.05%，表明儀器的精密度性良好。

重復(fù)性試驗(yàn) 取供試液6份測(cè)定吸光度，測(cè)得供試液0.32mg/g，RSD結(jié)果為1.21%，該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試液和對(duì)照品，以試劑空白為參比，測(cè)定60min內(nèi)的吸光度變化，于0、15、30、45、60min時(shí)，供試品與對(duì)照品平均值分別為0.6033、0.6175mg/ml?，RSD分別為0.04%、0.05%。

加樣回收率 取供試液6份，精密加入對(duì)照品適量，測(cè)定吸光度，平均回收率為86.77%，RSD為2.25%。

2.3提取工藝優(yōu)化

單因素試驗(yàn) 在單因素試驗(yàn)中纖維素酶用量為3mg;酶解時(shí)間15min，料液比1：30，超聲時(shí)間15min提取率最大值

試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 根據(jù)Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以蘆丁收率（Y）為響應(yīng)值，在酶用量、酶解時(shí)間、料液比、超聲時(shí)間4個(gè)單因素的基礎(chǔ)上采用4因素3水平的響應(yīng)面分析方法進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，酶用量為2、3、4mg;酶解時(shí)間為10、15、20min;料液比為1：20、1：30、1：40;超聲時(shí)間為10、15、20min。

響應(yīng)面分析 根據(jù)桑寄生超微粉總黃酮提取工藝響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果，對(duì)各因素進(jìn)行回歸擬合，得到二次回歸方程：

Y=2.35-0.012A+0.043B-0.076C-0.049D+0.035AB+0.030AC-0.0050AD+0.013BC-0.0025BD+0.000CD-0.19A2-0.27B2-0.27C2-0.22D2。

作用、酶解時(shí)間和料液比（乙醇量）的交互作用對(duì)桑寄生總黃酮收率影響顯著。而其他交互項(xiàng)顯著性較差，表明試驗(yàn)因素對(duì)曲面響應(yīng)值是一種非線性的關(guān)系。

驗(yàn)證試驗(yàn) 考慮到實(shí)際生產(chǎn)合理性和操作可行性，調(diào)整最優(yōu)提取工藝為酶用量3.0mg、酶解時(shí)間18min、料液比1：32、超聲時(shí)間16min，總黃酮理論收率為2.29%，纖維素酶輔助超聲提取桑寄生總黃酮平均提取收率為2.26%。試驗(yàn)結(jié)果與模型預(yù)測(cè)值相對(duì)誤差為0.25%。表明模型預(yù)測(cè)性良好。

2.4 體外溶出試驗(yàn)

取桑寄生超微粉顆粒10.0g，采用溶出度測(cè)定法漿法（第二法），分別以4種溶出介質(zhì)為溶劑（900ml），溫度37℃±5，轉(zhuǎn)速75r·min-1，于5、10、15、20、30、45、60min時(shí)取樣10ml（及時(shí)補(bǔ)液），離心處理，取上清液3ml定容于25ml容量瓶中作為供試品溶液，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果如圖7所示。

桑寄生超微粉顆粒的溶出性在介質(zhì)水和pH6.8 磷酸鹽緩沖液30min內(nèi)累計(jì)溶出達(dá)97.85%及96.55%;pH1.2鹽酸溶液和pH4.0 醋酸鹽溶液的溶出量只有78.45%和80.94%。

3 討論

3. 1 酶法輔助超聲波提取工藝的優(yōu)化 通過(guò)星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法分析優(yōu)化，預(yù)測(cè)纖維素酶輔助超聲提取桑寄生總黃酮的最佳工藝條件，根據(jù)最優(yōu)條件調(diào)整值對(duì)桑寄生中總黃酮進(jìn)行提取，平均提取收率為2.26%。試驗(yàn)結(jié)果與模型預(yù)測(cè)值相對(duì)誤差為0.25%。測(cè)得值與預(yù)測(cè)值偏差較小，重復(fù)性良好，進(jìn)一步證實(shí)了該方法用于優(yōu)化桑寄生超微粉提取工藝的可行性。

3. 2 桑寄生超微粉顆粒在溶出性 根據(jù)人體胃腸道Ph值設(shè)計(jì)四種不同介質(zhì)[4]，對(duì)桑寄生超微粉顆粒的溶出性進(jìn)行考察，其中，介質(zhì)水和pH6.8 磷酸鹽緩沖液溶出性較好，介質(zhì)水溶出介質(zhì)5min溶出量達(dá)91.25%，說(shuō)明桑寄生制備成超微粉顆粒使有效作用成分具有良好的水溶性，雖然在pH1.2鹽酸溶液和pH4.0 醋酸鹽溶液的溶出量只有78.45%和80.94%，但是在pH6.8 磷酸鹽緩沖液，即小腸生理Ph值模擬介質(zhì)中有較好的溶出量。模擬體外溶出試驗(yàn)，可對(duì)超微粉顆粒制劑品質(zhì)評(píng)價(jià)提供有力依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[4] 謝沐風(fēng). 簡(jiǎn)介日本“藥品品質(zhì)再評(píng)價(jià)”工程（溶出度研究系列一）[J]. 中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，06：42-46.

基金項(xiàng)目：

梧州學(xué)院重點(diǎn)科研項(xiàng)目（2017B017）;2018年自治區(qū)級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201811354095）

通訊作者：

葉美麟，女，碩士，中級(jí)藥劑師，研究方向：中藥新產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。