電化學發(fā)光免疫分析在臨床中的應用

王麗麗

【摘 ?要】本文簡要綜述了電化學發(fā)光免疫分析基本原理及其在臨床中的應用，以供臨床參考。

【關鍵詞】電化學發(fā)光免疫分析;臨床應用;

【中圖分類號】R446 ?????【文獻標識碼】A ?????【文章編號】1672-3783（2020）06-0105-01

電化學發(fā)光免疫分析（electro-chemiluminescence immunoassay，ECLIA）是近年來發(fā)展的一項高新技術，是將電化學發(fā)光的高靈敏度和免疫學的高特異性相結合的產物。因其高靈敏、快速、穩(wěn)定、無放射、自動化強、動力學范圍寬、操作簡單等，在臨床中得以廣泛應用?，F就ECLIA原理及近幾年來在臨床檢驗中的應用綜述如下。

一、 電化學發(fā)光免疫分析原理

在ECLIA分析系統(tǒng)中，磁性微粒為固相載體包被抗體（抗原），用三聯(lián)吡啶釕標記抗體（抗原），在反應體系內待測標本與相應的抗體（抗原）發(fā)生免疫反應后，形成磁性微粒包被抗體-待測抗原-三聯(lián)吡啶釕標記抗體復合物，這時將上述復合物吸入流動室，同時引入三丙胺（tripropyl amine，TPA）緩沖液。當磁性微粒流經電極表面時，被安裝在電極下面的電磁鐵吸引住，而未結合的標記抗體和標本被緩沖液沖走。與此同時電極加壓，啟動電化學發(fā)光反應，使三聯(lián)吡啶釕和三丙胺在電極表面進行電子轉移，產生化學發(fā)光。光強度與復合物的量呈線性關系，由光電倍增管檢測光強度，可計算出待測物的含量[1]。

三聯(lián)吡啶釕具有水溶性強、空間位阻及相對分子質量小的特點，用它可標記的物質非常廣泛，可與抗體、半抗原、激素及小分子核酸等結合形成標記物。

二、電化學發(fā)光免疫分析在臨床檢驗中的應用

1.傳染性疾病的檢查

臨床上對傳染性疾病的實驗室檢查，通常用免疫酶聯(lián)（ELISA）或時間分辨免疫熒光（TRFIA）的方法，一般都是分批次檢測，而且檢測時間為二到三小時，因此無法快速給出結果，現已不能滿足臨床急診手術或急需血液透析的需求。應用ECLIA可以對單個標本做到隨送隨檢，可以檢測乙肝相關抗原抗體、HIV抗原抗體、丙肝抗體、梅毒抗體等，快速得出結果，滿足臨床需求。

蔡丹等[2]將ECLIA法檢測低值乙肝表面抗原（HBsAg），分三組水平用ELISA法檢測乙肝五項，其中HBsAg水平最低組C組（0.05-0.2IU/ml）ELISA法陽性符合率僅為30.43%，對患者追蹤六個月后，ELISA法復查HBsAg，符合率上升至45.65%。一般認為感染HBV的早期，或者慢性乙型肝炎患者的病毒S區(qū)或X區(qū)基因突變，影響到HBsAg表達，血清中HBsAg處于低值水平。所以ECLIA法更敏感，這對于流行病學調查、控制母嬰傳播、保障輸血安全具有重要意義。

此外ECLIA還可以對孕前期和孕初期婦女進行TORCH抗體檢測，為指導婦女降低TORCH感染提供有效數據，從而降低胎兒畸形的概率。

2.腫瘤標志物的檢測

腫瘤標志物（tumor marker，TM），是一類反映腫瘤存在和生長的物質，由腫瘤細胞基因表達所產生或者由人體對腫瘤細胞反應而產生。包括蛋白質、激素酶（同工酶）、多胺及癌基因產物等。TM的檢測，在腫瘤的早期篩查、輔助診斷、療效觀察、病情監(jiān)測、預后判斷及分子靶向治療等方面具有重要的實用價值。ECLIA法可以對AFP、CEA、CAl25、CAl99、CAl53、NSE、S100、F-PSA、PSA、HE4等多種腫瘤標志物進行測定。

宋曉龍等[3]用ECLIA法對5種腫瘤標志物聯(lián)合檢測，包括癌胚抗原（CEA）、神經元特異性烯醇化酶（NSE）、細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、胃泌素釋放肽前體（ProGRP）、人附睪蛋白4（HE4），本研究表明聯(lián)合檢測可顯著提高肺癌診斷敏感度，從而有助于早期肺癌的診斷，具有極高的臨床推廣應用價值。

3.心臟疾病特征性標志物的檢測

諸多心臟疾病均會導致心肌損傷，如心肌炎、心肌缺血、心肌肥大、心肌梗死等，心肌損傷后其心肌物質會逸散到外周血液中可被檢測到，心肌損傷常用的標志物有：高敏肌鈣蛋白（hs-cTn）、肌紅蛋白（Myo）和肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）。目前認為心肌肌鈣蛋白是心肌損傷的首選標志物。有研究表明[4]?通過對cTn進行多次測定后得到濃度變化值，并分析該值對心梗診斷的有效性，發(fā)現連續(xù)監(jiān)測 cTn 濃度的變化比單純以參考人群確立的臨界值更有效。因此對懷疑有心?；颊呒霸邕M行連續(xù)檢測cTn特別是hs-cTn，對心梗早診斷、早治療、及評估預后等有及其重要的價值。

4.激素的檢測

激素是人體內含量很少，但卻不可缺少的物質，很多代謝性疾病都是由于激素的代謝紊亂而引起的。對于激素的檢測，目前還有很多臨床實驗室仍用放免法（RIA），其對于工作人員的健康損害及公共環(huán)境的污染是不言而喻的。很多學者用ECLIA法和RIA法兩種方法對同一激素檢測做了對比，得出ECLIA法明顯優(yōu)于RIA法：張瑞等[5]在應用ECLIA法定量血清絨毛膜促性腺激素（HCG）的臨床應用及其優(yōu)越性的研究中顯示：ECLIA法明顯優(yōu)于RIA法;ECLIA法和RIA法具有良好的相關性（P<0.05）;回收率均在95%以上，ECLIA法明顯高于RIA法（P<0.05）;ECLIA法的線性范圍較RIA法要寬。ECLIA法定量檢測HCG的準確性和精確度都明顯優(yōu)于RIA法，較RIA法更能滿足臨床需。閆永杰[6]分別采用ECLI法和RIA法檢測200份住院病人血清甲狀腺激素，兩種方法檢測效果相同，但ECLI法的線性范圍寬于RIA，精密度高，可重復性好，而且操作流程相對簡便，無放射性元素污染，更適合臨床檢測甲狀腺激素應用。

ECLIA檢測系統(tǒng)可對甲狀腺激素、性激素、腎上腺素、胰島素、心房鈉尿肽等多種激素進行測定，可給臨床診斷、治療、預后提供可靠的實驗室數據。

5.炎癥因子

降鈣素原（PCT）為一種無激素活性糖蛋白，健康人體中PCT水平較低，但在細菌、真菌感染、嚴重燒傷、創(chuàng)傷等情況下可致體內PCT分泌水平明顯上升并且在感染性疾病中升高更為明顯。PCT作為細菌感染的標志物，用ECLIA法檢測快速，送檢2小時后即可得到結果，早于血培養(yǎng)。如結果升高，醫(yī)生可結合臨床有助于及時應用抗生素，隨著病情好轉，其數值下降，可指導醫(yī)生及時停用抗生素，從而避免抗生素的濫用。

白介素6（IL-6）為參與機體炎癥的主要細胞因子，作為細胞因子級聯(lián)反應激活的標志物之一，在血流感染后數小時內即有顯著升高，且其水平與機體炎癥反應及病情的嚴重程度呈正相關。

6.藥物濃度

ECLIA法還可對血液中多種藥物進行檢測，如地高辛、洋地黃、卡馬西平、慶大霉素、托普霉素、萬古霉素等。通過對血清藥物濃度的檢測，可以監(jiān)測某些藥物在體內的濃度是否在合理范圍內，避免用量不足達不到療效，或用量過量而增加藥物的毒副作用，便于醫(yī)生及時調整給藥方案，將血藥濃度維持在有效范圍內。

7.其他物質的檢測

ECLIA法還可檢測貧血相關物質，如葉酸、鐵蛋白、維生素B12、促紅細胞生成素等。也可以用此方法檢測腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-2受體（IL-2R）和免疫球蛋白IgE等。

綜上所述，ECLIA法作為目前比較先進的檢測技術，在臨床應用中有以下幾方面優(yōu)勢：（1）敏感性高，線性范圍寬：檢測可達到皮克級，線性范圍可達7個數量級，結果精確可靠。（2）特異性好，檢測試劑穩(wěn)定，因而此法具有很好的重復性。（3）試劑無放射性，避免了對檢測人員的健康損害及對環(huán)境的污染，因此ECLIA法將逐步取代RIA法。（4）自動化程度高，操作簡單，檢測速度快，上機半小時左右即可出結果，能更好的滿足臨床需求。但是此方法也有不足之處：相對于ELISA法和TRFIA法，價格相對較高，所以對普及帶來一定的難度，因此，臨床醫(yī)生可根據實際需求選擇適當方法進行檢測。

參考文獻

[1] 李金名.臨床免疫學檢驗技術.第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2017：118-119

[2] 蔡丹，陳建明，李慧梁，等.電化學發(fā)光免疫分析法檢測低值HBsAg 與乙肝五項檢測結果比較[J].檢驗醫(yī)學與 臨床，2015，12（7）：982-983.

[3] 宋曉龍，周建平，雷艷君.5種腫瘤標志物聯(lián)合檢測在肺癌診斷中的價值[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2019，16（11）：1533-1536

[4] ZELLER T ，OJEDA F ，BRUNNER F J ，et al .High-sensitivity cardiac troponin I in the general population-defining reference populations for the determination of the?99th?percentile in the Gutenberg Health Study [J] .Clin Chem Lab Med ，2015?，53（5）：699-706?.

[5] 張瑞，賈良勇，等.電化學發(fā)光免疫分析法在HCG定量檢測中的應用[J].延安大學學報（醫(yī)學科學版），2008，6（3）：108—109.

[6] 閆永杰. 電化學發(fā)光法與放射免疫法檢測血清甲狀腺素的方法學比較[J]. 中國醫(yī)學裝備，2013，10（5）：88-90