蒼耳子炒制前后綠原酸的含量測(cè)定

李明達(dá)，聞光磊，杜躍中，馬雙欣，王 悅，武子敬*

（1.通化師范學(xué)院，通化134002；2.吉林人參研究院，通化134001）

蒼耳子為菊科植物蒼耳Xanthiumsibiricum Patr.的干燥成熟帶總苞的果實(shí)秋季果實(shí)成熟時(shí)采收，干燥，除去梗、葉等雜質(zhì)。具有散風(fēng)寒、通鼻竅、祛風(fēng)濕的功能,主要用于風(fēng)寒頭痛、鼻塞流涕、鼻孰、鼻淵、風(fēng)疹痰癢、濕痹拘[1]。中醫(yī)認(rèn)為蒼耳子生品有毒，過量使用或炮制不當(dāng)易導(dǎo)致中毒、甚至死亡[2～3]。蒼耳子經(jīng)炒制后，毒性明顯降低[4]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，蒼耳子具有降血糖、鎮(zhèn)咳、降壓、抗炎、抑菌等作用[5]。蒼耳子化學(xué)成分復(fù)雜，主要有脂肪酸、倍半萜內(nèi)酯、噻嗪雙酮、酚酸類、水溶性苷類、脂肪油、蛋白質(zhì)等成分.研究表明蒼耳子主要活性成分為酚酸類化合物[6]，其中以綠原酸為主的酚酸類成分被認(rèn)為是蒼耳子中的主要痛抗炎活性成分[7]，具有抗炎和鎮(zhèn)痛等作用。因綠原酸是蒼耳子中含量最多的有機(jī)酸之一，建立對(duì)其含量測(cè)定的方法，為藥材及炒制品質(zhì)量評(píng)價(jià)提供重要依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

1.1.1 材料

蒼耳子的干燥成熟果實(shí)。

1.1.2 儀器

回流提取器；電熱套；漏斗；電子天平；粉碎機(jī)；紫外-可見分光光度計(jì)。

1.1.3 試劑

甲醇(色譜純)、純凈水、乙醇(分析純)、綠原酸對(duì)照品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備

首先，提高農(nóng)村文化消費(fèi)市場(chǎng)供給，傳統(tǒng)農(nóng)村文化市場(chǎng)，產(chǎn)品相對(duì)單一，農(nóng)村居民文化消費(fèi)選擇較少。因此，需要適當(dāng)增加農(nóng)村文化消費(fèi)市場(chǎng)供應(yīng)，促使更多的文化產(chǎn)品走入農(nóng)村。

取減壓至恒重的綠原酸對(duì)照品2.5mg，置于25mL容量瓶中用甲醇溶解定容得到0.1 mg/mL綠原酸對(duì)照品溶液。

1.2.2 樣品的制備

1.2.2.1 生品

取原藥材5g，除去雜質(zhì)，用時(shí)粉碎。精密稱取5g蒼耳子去刺粉碎，置于干燥圓底燒瓶中，加入85%乙醇溶液50mL，加熱回流提取1h，濾過，收集濾液。濾渣加入85%乙醇溶液50mL，加熱回流提取1h，過濾，收集濾液，合并濾液，濾液減壓濃縮，用乙醇定容在25mL容量瓶中[8]。

1.2.2.2 炒品

取凈蒼耳子5g置炒制容器內(nèi)，用中火加熱翻炒至黃褐色，刺焦時(shí)即可取出，碾去刺篩凈。精密稱取5g炒制后的蒼耳子去刺粉碎，置于干燥圓底燒瓶中，加入85%乙醇溶液50mL，加熱回流提取1h，濾過，收集濾液。濾渣加入85%乙醇溶液50mL，加熱回流提取1h，過濾，收集濾液，合并濾液，濾液減壓濃縮，用乙醇定容在25mL容量瓶中。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 紫外-可見分光光度計(jì)的使用

打開電腦及紫外-可見分光光度計(jì)，點(diǎn)擊電腦桌面軟件圖標(biāo)，點(diǎn)擊連接，進(jìn)行機(jī)器自檢，自檢結(jié)束后設(shè)置參數(shù)并使用空白試劑測(cè)定基線，基線測(cè)定完成后便可以進(jìn)行樣品的含量測(cè)定。

通過查閱文獻(xiàn)得知綠原酸在波長(zhǎng)328nm處有最大吸收峰，故含量測(cè)定時(shí)波長(zhǎng)為200～400nm。

精密吸取“1.2.1”項(xiàng)下綠原酸對(duì)照品供試品0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL進(jìn)行檢測(cè)，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 紫外-可見分光光度計(jì)含量測(cè)定

1.3.3.1 綠原酸對(duì)照品的測(cè)定

取 “1.2.1”項(xiàng)下的綠原酸對(duì)照品溶液0.2mL置于10mL容量瓶中甲醇定容，定容后將溶液倒入石英比色皿中，要求比色皿當(dāng)中的液體占總體積的66%～80%最佳，進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3.2 生品蒼耳子綠原酸的含量測(cè)定

從25mL容量瓶中精確吸取0.5mL提取液置于100mL容量瓶中甲醇定容，將溶液倒入石英比色皿中，要求比色皿當(dāng)中的液體占總體積的66%～80%最佳，進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3.2 炒制蒼耳子綠原酸的含量測(cè)定

從25mL容量瓶中精確吸取0.5mL提取液置于100mL容量瓶中甲醇定容，將溶液倒入石英比色皿中，要求比色皿當(dāng)中的液體占總體積的66%～80%最佳，進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算得出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=90x+0.411，r=0.998.綠原酸對(duì)照品在0.1～0.5mL之間線性關(guān)系良好。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 綠原酸對(duì)照品的測(cè)定：

測(cè)定結(jié)果見圖1，波長(zhǎng)328nm處有最高峰，吸光度（Abs）為 0.592。

圖1 綠原酸對(duì)照品

綠原酸對(duì)照品溶液濃度的計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程可計(jì)算出100mL容量瓶中綠原酸對(duì)照品溶液的濃度 C:C 標(biāo) =0.002mg·mL-1。

2.2.2 生品蒼耳子綠原酸的含量

測(cè)定結(jié)果見圖2，波長(zhǎng)327nm處有最高峰，吸光度（Abs）為 0.446。

圖2 生品蒼耳子中綠原酸

生品蒼耳子提取液中綠原酸濃度的計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程可計(jì)算出100mL容量瓶中生品蒼耳子提取液中綠原酸濃度 C∶C 生品=0.0004mg·mL-1。

2.2.3 炒制蒼耳子綠原酸的含量：

測(cè)定結(jié)果見圖3，波長(zhǎng)326nm處有最高峰，吸光度（Abs）為 0.558。

圖3 炒制蒼耳子中綠原酸

炒制品蒼耳子提取液中綠原酸的濃度的計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程可計(jì)算出100mL容量瓶中炒制品蒼耳子提取液中綠原酸的濃度C∶C炒制品=0.0016mg·mL-1。

2.2.4 重復(fù)性及穩(wěn)定性測(cè)定[11]

2.2.4.1 重復(fù)性測(cè)定

精密吸取“1.2”項(xiàng)下供試品綠原酸對(duì)照品溶液、蒼耳子生品提取液、蒼耳子炒制品提取液，按“1.3.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份,進(jìn)樣測(cè)定,記錄濃度、吸光度并計(jì)算,結(jié)果綠原酸的RSD分別為0.96%，表示重復(fù)性良好。

2.2.4.1 穩(wěn)定性測(cè)定

精密吸取“1.2”項(xiàng)下供試品綠原酸對(duì)照品溶液、蒼耳子生品提取液、蒼耳子炒制品提取液按“1.3.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液 6 份, 于室溫 0、2、4、6、8、12h 進(jìn)樣測(cè)定，記錄濃度、吸光度并計(jì)算，結(jié)果綠原酸的RSD為1.3%，表示12h內(nèi)樣品穩(wěn)定。

結(jié)果計(jì)算：根據(jù)上述計(jì)算的樣品溶液濃度可以推算出25mL容量瓶中的溶液濃度，結(jié)果見表1。

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)通過回流提取法提取生品蒼耳子和炒制品蒼耳子中的綠原酸，并使用紫外-可見分光光度計(jì)對(duì)其綠原酸的含量進(jìn)行測(cè)定，炒制后100mL容量瓶?jī)?nèi)蒼耳子提取液中綠原酸的含量 0.0016mg·mL-1，炒制前100mL容量瓶?jī)?nèi)蒼耳子提取液的綠原酸的含量0.0004mg/mL。紫外-可見分光光度計(jì)可以最直接、簡(jiǎn)單的檢測(cè)出提取液中是否含有綠原酸。綠原酸在328 nm處有最大吸收，故含量測(cè)定時(shí)采用波長(zhǎng)為200～400nm。對(duì)比測(cè)定結(jié)果，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算得出蒼耳子炒制前后綠原酸的含量，確定了炒制后蒼耳子中綠原酸的含量0.80mg·mL-1相比炒制前蒼耳子中綠原酸的含量0.20mg/mL有所提升，為建立生、炒蒼耳子飲片質(zhì)量的控制方法奠定了可靠基礎(chǔ)。蒼耳子炒制后綠原酸的含量有所提升，這可能與綠原酸在炒制過程中經(jīng)高溫加熱后有部分成分轉(zhuǎn)化有關(guān)。