郁金4種基源飲片的止痛作用及其水提物中莪術(shù)烯醇含量的比較研究

石典花 蘇本正 張軍 戴衍朋

摘 要 目的：研究郁金藥材4種基源飲片[溫郁金、廣西莪術(shù)（桂郁金）、蓬莪術(shù)（綠絲郁金）、姜黃（黃絲郁金）]的止痛作用，比較其水提物中莪術(shù)烯醇含量。方法：以阿司匹林為陽性對照藥物，使用醋酸扭體法考察郁金4種基源飲片水提液對小鼠扭體潛伏期和扭體次數(shù)的影響。按照2015年版《中國藥典》（四部）中的“烘干法”測定郁金4種基源飲片（每種基源10批，下同）的水分得率。使用熱浸法考察郁金4種基源飲片水提物得率，采用高效液相色譜法測定其水提物中莪術(shù)烯醇含量;并進行比較。結(jié)果：與模型組比較，阿司匹林和郁金4種基源飲片水提液均能顯著延長模型小鼠的扭體潛伏期，溫郁金水提液和綠絲郁金水提液還能顯著減少模型小鼠的扭體次數(shù)（P<0.05或P<0.01）。溫郁金、桂郁金、綠絲郁金、黃絲郁金的水分含量分別為7.39%～8.80%、7.88%～9.88%、7.66%～9.86%、7.68%～10.20%，水提物平均得率分別為46.30%、60.40%、38.65%、42.99%，水提物中莪術(shù)烯醇平均含量分別為0.271、0.066、0.310、0.058 mg/g。除個別批次外，郁金同種基源飲片的水提物得率越高，莪術(shù)烯醇含量也越高。結(jié)論：郁金4種基源飲片均有止痛作用，溫郁金與綠絲郁金中莪術(shù)烯醇含量相近，桂郁金和黃絲郁金中莪術(shù)烯醇含量約為綠絲郁金、溫郁金的1/5。

關(guān)鍵詞 郁金飲片;不同基源;止痛作用;莪術(shù)烯醇;含量比較

中圖分類號 R285;R284.1 文獻標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2020）18-2209-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.18.06

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the analgesic effects of 4 sources of Curcumae Radix decoction pieces （Curcuma wenyujin， C. kwangsiensis， C. phaeocaulis and C. longa）， and compare the contents of curcumenol in their water extracts. METHODS： Using aspirin as positive control， acetic acid writhing method was used to investigate the effects of 4 sources of Curcumae Radix decoction pieces water extract on writhing latency and times of writhing in mice. The moisture contents of 4 sources of Curcumae Radix decoction pieces（10 batches of each source， the same below） were determined according to the drying method in 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia （part Ⅳ）. The yield of water extract in 4 sources of Curcumae Radix decoction pieces were investigated by hot dipping method， the contents of curcumenol in water extract of 4 sources of Curcumae Radix decoction pieces were determined by HPLC， and comparison was conducted. RESULTS： Compared with? model group， aspirin and water extracts of 4 sources of Curcumae Radix decoction pieces could significantly prolong the writhing latency of model mice， and the water extracts of C. wenyujin and C. phaeocaulis could significantly reduce the writhing times of model mice （P<0.05 or P<0.01）. For C. wenyujin， C. kwangsiensis， C. phaeocaulis and C. longa， the contents of moisture were 7.39%-8.80%， 7.88%-9.88%， 7.66%- 9.86% and 7.68%-10.20%; the average yield of water extract were 46.30%， 60.40%， 38.65%， 42.99%; the average contents of curcumenol in water extract were 0.271， 0.066， 0.310， 0.058 mg/g. Except for a few batches， the higher the yield of water extract， the higher the content of curcuminol in the same source of Curcumae Radix decoction pieces. CONCLUSIONS： Four sources of Curcumae Radix decoction pieces have analgesic effect. The contents of curcumenol in C. wenyujin and C. phaeocaulis were similar， and the contents of curcumenol in C. kwangsiensis and C. longa about 1/5 of that in C. phaeocaulis and C. wenyujin.

KEYWORDS? ?Curcumae Radix decoction pieces; Different sources;Analgesic effect; Curcumenol; Content comparison

郁金為姜科植物溫郁金（Curcuma wenyujin Y. H.Chen et C. Ling）、姜黃（C. longa L.）、廣西莪術(shù)（C. kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang）或蓬莪術(shù)（C. phaeocaulis Val.）的干燥塊根。前兩種郁金常被稱作“溫郁金”和“黃絲郁金”，后兩種則被勻稱為“桂郁金”和“綠絲郁金”[1]。郁金具有活血止痛、行氣解郁、清心涼血、利膽退黃之功效，常用于治療胸脅刺痛、胸痹心痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、乳房脹痛、熱病神昏、癲癇發(fā)狂、血熱吐衄、黃疸尿赤等癥[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)表明，郁金有抗炎、抗血小板聚集、抗凝血、抗氧化和抗抑郁的作用，在抗腫瘤、降血脂、保肝利膽方面也有突出效果[2-7]。郁金主要含有揮發(fā)油、姜黃素等成分[8]。由于生長地區(qū)、習(xí)性的不同，不同來源郁金的成分及含量也各不相同[9-10]。雖然郁金4種基源溫郁金、桂郁金、綠絲郁金、黃絲郁金在外觀性狀和化學(xué)成分方面差異較大，但目前臨床應(yīng)用時并未對其進行明確區(qū)分[1]。由此可認(rèn)為，4種基源的郁金應(yīng)含有相同的藥效成分[11]?；诖耍狙芯繉τ艚?種基源飲片的止痛作用以及共有藥效成分的含量進行比較，旨在為郁金質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立與完善以及該藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)和參考。

1 材料

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀，含Waters 2996 型二極管陣列（DAD）檢測器[沃特世科技（上海）有限公司];XS205 DU型十萬分之一電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];TDL-40B型離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）;KQ-300VDE型三頻數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）;MB-27水分測定儀[奧豪斯儀器（常州）有限公司];RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 藥品與試劑

郁金4種基源飲片，共40批，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院中藥資源室林慧彬研究員鑒定分別為溫郁金（C. wenyujin Y. H. Chen et C. Ling）、廣西莪術(shù)（C. kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang）、蓬莪術(shù)（C. phaeocaulis Val.）、姜黃（C. longa L.）的干燥塊根經(jīng)切制而成的飲片，其來源信息見表1。莪術(shù)烯醇對照品（由成都曼斯特生物科技有限公司和中國科學(xué)院成都生物研究所共同研制，批號：MUST-16080411，純度：99.67%）;阿司匹林片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號：160305501，規(guī)格：100 mg）;冰醋酸（淄博化學(xué)試劑廠，批號：XK130011405002）;羧甲基纖維素鈉（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：F20110708）;乙腈、磷酸為色譜純，甲醇等其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 動物

昆明種小鼠60只，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量為18～22 g，購自山東朋悅實驗動物繁育有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（魯）2014-0007。所有小鼠均飼養(yǎng)在山東省中醫(yī)藥研究院動物實驗中心，溫度20 ℃、濕度30%～50%。

2 方法與結(jié)果

2.1 止痛作用研究

2.1.1 水提液的制備 取郁金飲片250 g，加入10倍量（mL/g）水，浸泡1 h，加熱回流2次（每次1 h），濾過，合并濾液，濃縮至100 mL，備用。

2.1.2 藥液的制備 分別取溫郁金（S1）、桂郁金（S11）、綠絲郁金（S21）、黃絲郁金（S31）各250 g，按“2.1.1”項下方法制成水提液。分別取上述4種郁金水提液各20 mL，臨用前加1%羧甲基纖維素鈉溶液稀釋至0.5 g/mL（以生藥量計，根據(jù)前期預(yù)實驗結(jié)果設(shè)計），備用。

2.1.3 分組與給藥 取健康小鼠60只，隨機分為模型組（等體積生理鹽水）、陽性對照組（阿司匹林0.25 g/kg[12]）、溫郁金水提液組（10 g/kg，相當(dāng)于人用量的7.7倍，以生藥量計，下同）、桂郁金水提液組（10 g/kg）、綠絲郁金水提液組（10 g/kg）、黃絲郁金水提液組（10 g/kg），每組10只，雌雄各半。每日灌胃相應(yīng)藥物1次，給藥體積為20 mL/kg，連續(xù)7 d。

2.1.4 檢測指標(biāo) 于第7天給藥后30 min，各組小鼠腹腔注射1%醋酸溶液（20 mL/kg），觀察記錄第1次扭體反應(yīng)時間（扭體潛伏期）和15 min內(nèi)扭體次數(shù)。采用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析;計量資料均以x±s表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果，與模型組比較，陽性對照組和郁金4種基源水提液組小鼠的扭體潛伏期均顯著延長，溫郁金水提液組和綠絲郁金水提液組小鼠的扭體次數(shù)均顯著減少（P<0.05或P<0.01），說明郁金4種基源均具有一定的止痛作用，但作用強度有所差異，詳見表2。

2.3 水提物得率測定

精密稱取郁金飲片粉末2 g，置于圓底燒瓶中，加水50 mL，浸泡1 h，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，冷卻后，再次稱定質(zhì)量，加水補足減失的質(zhì)量，濾過，用移液管量取續(xù)濾液25 mL，置于已經(jīng)恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，將蒸發(fā)皿放于水浴鍋上蒸干，再置于烘箱中烘3 h，放冷，稱定質(zhì)量，計算水提物得率，水提物得率=[（蒸發(fā)皿質(zhì)量+浸出物質(zhì)量）-蒸發(fā)皿質(zhì)量]×2/[郁金質(zhì)量×（1-水分含量）]×100%，結(jié)果見表4。

2.4 水提物中莪術(shù)烯醇的含量測定

2.4.1 色譜條件 色譜柱：Thermo Scientific Syncronis C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：0.1%磷酸水溶液-乙腈（52 ∶ 48，V/V），流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，檢測波長：210 nm，進樣量：10 μL。

2.4.2 對照品溶液的制備 精密稱取莪術(shù)烯醇對照品5.95 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解，定容，搖勻，作為對照品貯備液;精密吸取上述對照品貯備液1 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀釋，定容，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0.023 8 mg/mL的對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 取郁金4種基源飲片，粉碎，取粉末各約1.0 g，精密稱定，分別置于100 mL圓底燒瓶中，加水25 mL，稱定質(zhì)量后密塞，浸泡1 h，加熱回流1 h，冷卻后，再次稱定質(zhì)量，加水補足減失的質(zhì)量，濾過，將藥液轉(zhuǎn)移到離心管中，12 000 r/min離心10 min，取上清液，過0.45 ?m微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 系統(tǒng)適用性考察 精密吸取“2.4.2”“2.4.3”項下對照品溶液和郁金4種基源飲片的供試品溶液，并以水作為空白對照溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。結(jié)果表明，對照品溶液與供試品溶液在相同的保留時間有相應(yīng)的色譜峰，峰形對稱，無拖尾現(xiàn)象，空白對照溶液不干擾其測定。

2.4.5 線性關(guān)系考察 精密稱取莪術(shù)烯醇對照品適量，用甲醇溶解稀釋制成質(zhì)量濃度分別為0.000 476、0.004 76、0.009 52、0.019 04、0.028 56、0.038 08、0.047 6 mg/mL，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x，mg/mL）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進行線性回歸，得莪術(shù)烯醇線性回歸方程為y=37.004x-0.068 7（R 2=0.999 8），表明莪術(shù)烯醇檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.000 476～0.047 6 mg/mL。

2.4.6 精密度試驗 精密吸取莪術(shù)烯醇對照品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，連續(xù)6次，記錄峰面積。結(jié)果，莪術(shù)烯醇峰面積的RSD為0.24%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批次的溫郁金飲片（S8）適量，按“2.4.3”項下方法制成供試品溶液，分別在室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、16 h時按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，莪術(shù)烯醇峰面積的RSD為0.68%（n=8），表明供試品溶液在室溫下放置16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.8 重復(fù)性試驗 取同一批次的溫郁金飲片（S8）6份，每份約1 g，精密稱定，按“2.4.3”項下方法制成供試品溶液，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計算莪術(shù)烯醇含量。結(jié)果，莪術(shù)烯醇的平均含量為0.160 mg/g，RSD為0.82%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.9 加樣回收率試驗 取已知莪術(shù)烯醇含量的溫郁金飲片（編號：S8，含量：0.160 mg/g）6份，各0.5 g，精密稱定，分別置于具塞圓底燒瓶中，各加入“2.4.2”項下對照品溶液3 mL、水22 mL，稱定質(zhì)量，浸泡1 h，加熱回流1次，取出放冷，再次稱定質(zhì)量，加水補足減失的質(zhì)量，以12 000 r/min離心10 min，取上清液，過0.45 μm微孔濾膜，取濾液按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算平均回收率。結(jié)果，平均回收率為116.80%，RSD為2.43%（n=6），表明本方法準(zhǔn)確性良好。

2.4.10 含量測定 精密吸取莪術(shù)烯醇對照品溶液和40批4種基源郁金飲片供試品溶液，每樣品平行2份按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計算莪術(shù)烯醇含量，結(jié)果見表5。

2.5 郁金飲片的水提物得率與其中莪術(shù)烯醇含量比較

分別繪制郁金4種基源40批飲片水提物得率與其中莪術(shù)烯醇含量的折線圖（以測得值/均值計），詳見圖2。由圖2可見，除個別批次外，郁金同種基源的水提物得率越高，其中莪術(shù)烯醇含量也越高。

3 討論

郁金藥用歷史悠久，臨床多用于止痛。雖然溫郁金、桂郁金、黃絲郁金、綠絲郁金在外觀性狀和化學(xué)成分方面差異較大，但古今臨床應(yīng)用均未對這4種基源郁金進行區(qū)分，普遍將不同基源的郁金作為通用藥材。筆者前期查閱文獻發(fā)現(xiàn)，在臨床應(yīng)用中，僅有部分文獻[14-15]明確指出在治療慢性胃炎等癥時選用溫郁金，而桂郁金、綠絲郁金、黃絲郁金的報道較少。本研究依據(jù)郁金的功能主治，以其傳統(tǒng)入藥方式水提液為干預(yù)物，采用醋酸所致小鼠扭體實驗觀察郁金4種基源飲片的止痛作用。結(jié)果顯示，郁金4種基源飲片水提液均具有明顯的止痛作用，其中溫郁金和綠絲郁金止痛作用強于桂郁金和黃絲郁金。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，郁金4種基源飲片中的共有止痛成分為莪術(shù)烯醇[16]。為了進一步研究郁金4種基源飲片中莪術(shù)烯醇的含量差異，本研究測定了郁金4種基源40批飲片的水分含量、水提物得率及其中莪術(shù)烯醇的含量。結(jié)果顯示，溫郁金、桂郁金、綠絲郁金、黃絲郁金的水分含量分別為7.39%～8.80%、7.88%～9.88%、7.66%～9.86%、7.68%～10.20%，均符合《中國藥典》（一部）“郁金”項下所規(guī)定的水分不超過15.0%的要求[1]。桂郁金水提物得率最高，平均得率為60.40%;綠絲郁金水提物得率最低，平均得率為38.65%;溫郁金水提物得率為30.72%～58.57%，黃絲郁金水提物得率為38.66%～47.50%;溫郁金、桂郁金、綠絲郁金、黃絲郁金水提物中莪術(shù)烯醇平均含量分別為0.271、0.066、0.310、0.058 mg/g。

綜上所述，郁金4種基源飲片均具有止痛效果，但其中共有止痛成分莪術(shù)烯醇含量有所差異，溫郁金和綠絲郁金水提物中莪術(shù)烯醇含量相近，桂郁金和黃絲郁金水提物中莪術(shù)烯醇含量約為綠絲郁金和溫郁金的1/5。本研究結(jié)果表明，郁金4種基源飲片在臨床不宜等量通用，但該研究結(jié)論為藥效研究初始階段，尚須將郁金應(yīng)用到臨床中，通過大量臨床數(shù)據(jù)作進一步驗證。

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（收稿日期：2020-04-02 修回日期：2020-08-17）

（編輯：鄒麗娟）