熒光PCR探針熔解曲線技術檢測結核分枝桿菌對五種抗結核藥物耐藥性的研究

焦娜

【摘 要】 目的：對熒光PCR探針熔解曲線技術檢測結核分枝桿菌對五種抗結核藥物的耐藥性進行研究。方法：本次研究從本院在2019年1月到2019年12月間收治的患者中進行抽樣，選取了60株結核分枝桿菌臨床分離株，采用PCR探針溶解曲線法，對結核分枝桿菌對異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇以及福喹諾酮類藥物的耐藥性進行檢測。結果：在采用比例法藥敏試驗作為金標準之后，在采用熒光PCR探針熔解曲線法進行檢測之后發(fā)現(xiàn)，結核分枝桿菌對利福平耐藥性的敏感度為95.45%，特異度為94.35%，一致率為94.67%，Kappa值為0.87;對乙胺丁醇耐藥性的敏感度為85.74%，特異度為92.53%，一致率為91.45%，Kappa值為0.68;對異煙肼耐藥性的敏感度為90.56%，特異度為96.14%，一致率為94.22%，Kappa值為0.88;對氟喹諾酮類藥物耐藥性的敏感度為93.65%，特異度為96.24%，一致率為956.04%，Kappa值為0.82;對鏈霉素耐藥性的敏感度為89.67%，特異度為92.68%，一致率為92.17%，Kappa值為0.75。結論：在當前的臨床中，通過采用熒光PCR探針溶解曲線法對結核分枝桿菌對五種藥物耐藥性進行檢測，具有良好的效能，能夠為醫(yī)生的用藥提供必要的指導。

【關鍵詞】 結核分枝桿菌;耐藥性;熒光PCR探針熔解曲線技術

結核病作為一種嚴重的傳染病，對人們的生命安全產(chǎn)生了巨大的威脅。而隨著抗結核藥物的廣泛應用，許多結核病患者出現(xiàn)了耐藥性，這就對疾病的預防與治療帶來了不利的影響[1]。耐多藥結核病指的是患者同時對兩種或以上的一線抗結核藥物產(chǎn)生耐藥性，使得患者的治療成本升高，延長治療周期，對治療效果產(chǎn)生了嚴重的影響。這就需要對患者進行治療的過程中，必須要進行準確的診斷與治療，從而為患者的疾病治療提供可靠保障。因此，本研究在選取60位患者作為樣本的基礎上，對熒光PCR探針熔解曲線技術檢測結核分枝桿菌對五種抗結核藥物的耐藥性進行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究從本院在2019年1月到2019年12月間收治的患者中進行抽樣，選取了60株結核分枝桿菌臨床分離株。在此次研究中選取的臨床分離株，在進行硝基苯甲酸生長試驗進行鑒定之后，均為結核分枝桿菌[2]。在研究當中，使用的試劑與儀器為RFP、EMB、INH、Sm、左氧氟沙星以及PNB含藥培養(yǎng)基，同時選用4%的NaOH溶液以及各種耐藥突變檢測試劑盒。選用的儀器為SLAN-96S型實時熒光定量PCR儀以及BY-R18型低溫高速離心機。

1.2 方法

在此次研究當中，需要按照《結核病診斷實驗室的檢驗規(guī)程》，采取簡單法分枝桿菌固體培養(yǎng)，使用移液槍，吸取1-2ml的標本，放入到離心管當中，然后加入1-2倍4%的NaOH溶液，進行震蕩之后，得到痰標本液化，在放到室溫環(huán)境當中放置15min，將其置入到37℃的恒溫培養(yǎng)箱當中，孵育4-8周[3]。采用熒光PCR探針溶解曲線法耐藥突變檢測試劑盒中的相關說明書，開展相應的檢測工作[4]。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用的統(tǒng)計學處理工具為SPSS18.0，使用比例法藥敏試驗作為金標準，對熒光PCR探針溶解曲線法的敏感度、特異度、一致率以及Kappa值進行計算。

2 結果

在采用比例法藥敏試驗作為金標準之后，在采用熒光PCR探針熔解曲線法進行檢測之后發(fā)現(xiàn)，結核分枝桿菌對利福平耐藥性的敏感度為95.45%，特異度為94.35%，一致率為94.67%，Kappa值為0.87;對乙胺丁醇耐藥性的敏感度為85.74%，特異度為92.53%，一致率為91.45%，Kappa值為0.68;對異煙肼耐藥性的敏感度為90.56%，特異度為96.14%，一致率為94.22%，Kappa值為0.88;對氟喹諾酮類藥物耐藥性的敏感度為93.65%，特異度為96.24%，一致率為95.04%，Kappa值為0.82;對鏈霉素耐藥性的敏感度為89.67%，特異度為92.68%，一致率為92.17%，Kappa值為0.75。

3 討論

耐多藥結核病指的是患者同時對兩種或以上的一線抗結核藥物產(chǎn)生耐藥性，使得患者的治療成本升高，延長治療周期，對治療效果產(chǎn)生了嚴重的影響[5]。在采用比例法藥敏試驗作為金標準之后，在采用熒光PCR探針熔解曲線法進行檢測之后發(fā)現(xiàn)，結核分枝桿菌對利福平耐藥性的敏感度為95.45%，特異度為94.35%，一致率為94.67%，Kappa值為0.87;對乙胺丁醇耐藥性的敏感度為85.74%，特異度為92.53%，一致率為91.45%，Kappa值為0.68;對異煙肼耐藥性的敏感度為90.56%，特異度為96.14%，一致率為94.22%，Kappa值為0.88;對氟喹諾酮類藥物耐藥性的敏感度為93.65%，特異度為96.24%，一致率為95.04%，Kappa值為0.82;對鏈霉素耐藥性的敏感度為89.67%，特異度為92.68%，一致率為92.17%，Kappa值為0.75。

綜上所述，在當前的臨床中，通過采用熒光PCR探針溶解曲線法對結核分枝桿菌對五種藥物耐藥性進行檢測，具有良好的效能，能夠為醫(yī)生的用藥提供必要的指導。

參考文獻

[1] 李智穎， 盧楠， 魏家瑋， et al. Sigma E基因?qū)u垢分枝桿菌五種藥物敏感性的影響及機制研究[J]. 中國人獸共患病學報， 2019， 35（2）：131-137.

[2] 劉艷， 古麗比克·木拉提， 瑪力亞木·阿布力提甫， et al. 熒光PCR熔解曲線法檢測結核分枝桿菌耐藥基因的結果分析[J]. 中國防癆雜志， 2018（9）.

[3] 馬進寶， 楊翰， 任斐， et al. 三種分子生物學方法檢測結核分枝桿菌耐藥性的效能分析[J]. 中國防癆雜志， 2019， 41（4）.

[4] 楊敏， 于潞， 吳長新， et al. 高分辨率熔解曲線檢測結核分枝桿菌對利福平耐藥性研究[J]. 中國預防醫(yī)學雜志， 2019（3）：161-164.

[5] 賀楚峰， 馮永， 馮永， et al. 實時熒光PCR熔解曲線法在非綜合征型耳聾基因檢測中的應用研究[J]. 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志， 2019， 54（4）：286.