熒光PCR探針熔解曲線技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌對五種抗結(jié)核藥物耐藥性的研究

焦娜

【摘 要】 目的：對熒光PCR探針熔解曲線技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌對五種抗結(jié)核藥物的耐藥性進(jìn)行研究。方法：本次研究從本院在2019年1月到2019年12月間收治的患者中進(jìn)行抽樣，選取了60株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株，采用PCR探針溶解曲線法，對結(jié)核分枝桿菌對異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇以及福喹諾酮類藥物的耐藥性進(jìn)行檢測。結(jié)果：在采用比例法藥敏試驗作為金標(biāo)準(zhǔn)之后，在采用熒光PCR探針熔解曲線法進(jìn)行檢測之后發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥性的敏感度為95.45%，特異度為94.35%，一致率為94.67%，Kappa值為0.87;對乙胺丁醇耐藥性的敏感度為85.74%，特異度為92.53%，一致率為91.45%，Kappa值為0.68;對異煙肼耐藥性的敏感度為90.56%，特異度為96.14%，一致率為94.22%，Kappa值為0.88;對氟喹諾酮類藥物耐藥性的敏感度為93.65%，特異度為96.24%，一致率為956.04%，Kappa值為0.82;對鏈霉素耐藥性的敏感度為89.67%，特異度為92.68%，一致率為92.17%，Kappa值為0.75。結(jié)論：在當(dāng)前的臨床中，通過采用熒光PCR探針溶解曲線法對結(jié)核分枝桿菌對五種藥物耐藥性進(jìn)行檢測，具有良好的效能，能夠為醫(yī)生的用藥提供必要的指導(dǎo)。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核分枝桿菌;耐藥性;熒光PCR探針熔解曲線技術(shù)

結(jié)核病作為一種嚴(yán)重的傳染病，對人們的生命安全產(chǎn)生了巨大的威脅。而隨著抗結(jié)核藥物的廣泛應(yīng)用，許多結(jié)核病患者出現(xiàn)了耐藥性，這就對疾病的預(yù)防與治療帶來了不利的影響[1]。耐多藥結(jié)核病指的是患者同時對兩種或以上的一線抗結(jié)核藥物產(chǎn)生耐藥性，使得患者的治療成本升高，延長治療周期，對治療效果產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響。這就需要對患者進(jìn)行治療的過程中，必須要進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷與治療，從而為患者的疾病治療提供可靠保障。因此，本研究在選取60位患者作為樣本的基礎(chǔ)上，對熒光PCR探針熔解曲線技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌對五種抗結(jié)核藥物的耐藥性進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究從本院在2019年1月到2019年12月間收治的患者中進(jìn)行抽樣，選取了60株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株。在此次研究中選取的臨床分離株，在進(jìn)行硝基苯甲酸生長試驗進(jìn)行鑒定之后，均為結(jié)核分枝桿菌[2]。在研究當(dāng)中，使用的試劑與儀器為RFP、EMB、INH、Sm、左氧氟沙星以及PNB含藥培養(yǎng)基，同時選用4%的NaOH溶液以及各種耐藥突變檢測試劑盒。選用的儀器為SLAN-96S型實時熒光定量PCR儀以及BY-R18型低溫高速離心機(jī)。

1.2 方法

在此次研究當(dāng)中，需要按照《結(jié)核病診斷實驗室的檢驗規(guī)程》，采取簡單法分枝桿菌固體培養(yǎng)，使用移液槍，吸取1-2ml的標(biāo)本，放入到離心管當(dāng)中，然后加入1-2倍4%的NaOH溶液，進(jìn)行震蕩之后，得到痰標(biāo)本液化，在放到室溫環(huán)境當(dāng)中放置15min，將其置入到37℃的恒溫培養(yǎng)箱當(dāng)中，孵育4-8周[3]。采用熒光PCR探針溶解曲線法耐藥突變檢測試劑盒中的相關(guān)說明書，開展相應(yīng)的檢測工作[4]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用的統(tǒng)計學(xué)處理工具為SPSS18.0，使用比例法藥敏試驗作為金標(biāo)準(zhǔn)，對熒光PCR探針溶解曲線法的敏感度、特異度、一致率以及Kappa值進(jìn)行計算。

2 結(jié)果

在采用比例法藥敏試驗作為金標(biāo)準(zhǔn)之后，在采用熒光PCR探針熔解曲線法進(jìn)行檢測之后發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥性的敏感度為95.45%，特異度為94.35%，一致率為94.67%，Kappa值為0.87;對乙胺丁醇耐藥性的敏感度為85.74%，特異度為92.53%，一致率為91.45%，Kappa值為0.68;對異煙肼耐藥性的敏感度為90.56%，特異度為96.14%，一致率為94.22%，Kappa值為0.88;對氟喹諾酮類藥物耐藥性的敏感度為93.65%，特異度為96.24%，一致率為95.04%，Kappa值為0.82;對鏈霉素耐藥性的敏感度為89.67%，特異度為92.68%，一致率為92.17%，Kappa值為0.75。

3 討論

耐多藥結(jié)核病指的是患者同時對兩種或以上的一線抗結(jié)核藥物產(chǎn)生耐藥性，使得患者的治療成本升高，延長治療周期，對治療效果產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響[5]。在采用比例法藥敏試驗作為金標(biāo)準(zhǔn)之后，在采用熒光PCR探針熔解曲線法進(jìn)行檢測之后發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥性的敏感度為95.45%，特異度為94.35%，一致率為94.67%，Kappa值為0.87;對乙胺丁醇耐藥性的敏感度為85.74%，特異度為92.53%，一致率為91.45%，Kappa值為0.68;對異煙肼耐藥性的敏感度為90.56%，特異度為96.14%，一致率為94.22%，Kappa值為0.88;對氟喹諾酮類藥物耐藥性的敏感度為93.65%，特異度為96.24%，一致率為95.04%，Kappa值為0.82;對鏈霉素耐藥性的敏感度為89.67%，特異度為92.68%，一致率為92.17%，Kappa值為0.75。

綜上所述，在當(dāng)前的臨床中，通過采用熒光PCR探針溶解曲線法對結(jié)核分枝桿菌對五種藥物耐藥性進(jìn)行檢測，具有良好的效能，能夠為醫(yī)生的用藥提供必要的指導(dǎo)。

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