復(fù)方薄荷涂劑中樟腦的含量測(cè)定

徐靜娟，栗金權(quán)

(南通大學(xué)附屬常州兒童醫(yī)院，江蘇 常州 213003)

復(fù)方薄荷涂劑，為我院的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑(醫(yī)院制劑)，是耳鼻喉科常用的鼻用涂劑，主要由薄荷腦、樟腦、桉葉油等成分組成，用于治療萎縮性鼻炎、鼻黏膜干燥等癥。該制劑安全性高、療效確切，在兒童中應(yīng)用廣泛，并被收載于《江蘇省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)程》第一冊(cè)。

樟腦有消炎、抗菌(白色念珠菌、金黃色葡萄球菌等)作用，對(duì)薄荷腦有促滲透的作用[1]，是復(fù)方薄荷涂劑中的重要組分。為保障兒童用藥安全，進(jìn)一步加強(qiáng)制劑的質(zhì)量控制，本文建立方法對(duì)制劑中樟腦的含量進(jìn)行測(cè)定，并做了系統(tǒng)的方法學(xué)研究。本文采用的高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定樟腦含量，專屬性高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為復(fù)方薄荷涂劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供重要依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

沃特世高效液相色譜儀(型號(hào)E2695)，沃特世PDA檢測(cè)器(型號(hào)2998)，梅特勒萬(wàn)分之一電子天平(型號(hào)AG245)。

1.2 藥品與試劑

樟腦對(duì)照品(110747-201409)，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；復(fù)方薄荷涂劑(常州市兒童醫(yī)院自制)；缺樟腦的復(fù)方薄荷涂劑(常州市兒童醫(yī)院自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Waters Symmetry C18(4.6mm×250mm，5μm)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(75∶25)為流動(dòng)相；進(jìn)樣量：25μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：288nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備

精密稱取樟腦對(duì)照品10.14mg，置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度作為貯備液。精密量取貯備液2ml置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2供試品溶液的制備

精密量取復(fù)方薄荷涂劑2ml，置100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備

按復(fù)方薄荷涂劑處方量取樟腦以外的其余原輔料，同法制備得到缺樟腦的復(fù)方薄荷涂劑，即陰性制劑，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，取陰性制劑2ml，置100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性

以“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各25μL，注入色譜柱，采集色譜圖(見(jiàn)圖1)。

由圖1可知，供試品溶液與對(duì)照品在保留時(shí)間(tR)為6.2min處出現(xiàn)色譜峰，陰性對(duì)照無(wú)此峰，我們認(rèn)為tR=6.2min處的色譜峰為樟腦色譜峰，分離效果良好，供試品溶液中樟腦色譜峰與相鄰色譜峰分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)以樟腦計(jì)大于8000。

2.4 線性關(guān)系與線性范圍考察

精密稱取樟腦對(duì)照品10.14mg，置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液適量，加無(wú)水乙醇配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、1.0mg·mL-1的系列對(duì)照品溶液。吸取上述各濃度對(duì)照品溶液25μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積。以濃度C(mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，樟腦峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到線性回歸方程：Y=664401X-726.6，r=0.9999。結(jié)果表明，樟腦在0.05～1.00mg·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取濃度為0.6084mg·mL-1的樟腦對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(n=6)為0.4%，小于2%，本實(shí)驗(yàn)的精密度滿足要求。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.2.2”項(xiàng)下操作，平行配制6份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，并計(jì)算樟腦含量。結(jié)果樟腦含量的平均值(n=6)為10.1250mg·mL-1，RSD為0.6%，小于2%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性

取同一供試品溶液，按上述色譜條件在0h，2h，4h，6h，8h，12h，24h進(jìn)行測(cè)定，樟腦色譜峰無(wú)明顯變化，其峰面積的RSD為0.6%，表明樣品溶液在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知樟腦含量的樣品(9.2550mg·mL-1)1ml，平行取6份，分別置于100ml量瓶中，加入3.0646mg/ml樟腦對(duì)照品溶液3ml，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，備用。吸取上述續(xù)濾液25μL注入高效液相色譜儀，在實(shí)驗(yàn)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算含量，并計(jì)算加樣回收率。樟腦的平均回收率為100.36%，RSD為0.73%，見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下操作，制備供試品溶液，在上述色譜條件下，每份進(jìn)樣2次，測(cè)定峰面積，并計(jì)算復(fù)方薄荷涂劑中樟腦的含量，見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用PAD HPLC色譜法測(cè)定復(fù)方薄荷涂劑中樟腦的含量，精密度高(RSD=0.4%)、重復(fù)性好(RSD=0.6%)，在0.05～1.0mg·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。加樣回收率在98%～102%之間，RSD小于2%，表明該方法準(zhǔn)確度高。所以，該法適用于復(fù)方薄荷涂劑中樟腦的含量測(cè)定。

4 討論

4.1 波長(zhǎng)的選擇

建立檢測(cè)方法的初期，波長(zhǎng)的選擇至關(guān)重要。使用沃特世PDA檢測(cè)器對(duì)樟腦對(duì)照品溶液在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到其波長(zhǎng)掃描圖譜(沃特世PAD檢測(cè)器命名為光譜指數(shù)圖)，顯示對(duì)照品溶液在287.7nm處有吸收峰。另外，樣品中處方中的各個(gè)輔料，根據(jù)處方量配制相同濃度的輔料供試品溶液，同法在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，在288nm波長(zhǎng)處無(wú)吸收，表明輔料在288nm處無(wú)干擾，故選擇288nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

4.2 流動(dòng)相比例的考察

文獻(xiàn)中HPLC法測(cè)定樟腦含量多采用甲醇-水體系[2-7]為流動(dòng)相，所以本文直接考察了甲醇-水的比例，如甲醇-水為(80∶20)、(75∶25)、(70∶30)、(60∶40)，結(jié)果顯示有機(jī)相(甲醇)比例越低，出峰時(shí)間越晚，色譜峰之間的距離越大，峰寬越大，干擾峰出盡所需時(shí)間越長(zhǎng)，如圖4。綜合考慮保留時(shí)間、峰型、峰面積和分離度，最終選取甲醇-水體積比為75∶25作為流動(dòng)相。

4.3 柱溫的選擇

同等色譜條件下，不同柱溫可能會(huì)對(duì)保留時(shí)間、峰型有影響，所以分別在柱溫為25℃、30℃、35℃時(shí)進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示保留時(shí)間分別為6.2min、6.1min、5.9min，表明隨著柱溫升高，出峰時(shí)間越早，但是峰型和峰面積無(wú)明顯變化，含量測(cè)定結(jié)果也無(wú)明顯差異?？紤]到環(huán)境溫度隨季節(jié)性的變化，30℃比較容易控制，所以選擇柱溫為30℃。