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    風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者的三種免疫學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果分析

    2020-10-13 07:52:50石倩陳志
    中國(guó)防癆雜志 2020年10期
    關(guān)鍵詞:風(fēng)濕性亞群結(jié)核

    石倩 陳志

    風(fēng)濕性疾病是一組侵犯關(guān)節(jié)、骨骼、肌肉、血管及有關(guān)軟組織或結(jié)締組織為主的疾病,其中多數(shù)為自身免疫性疾病。風(fēng)濕性疾病患者大多存在自身免疫功能障礙,內(nèi)環(huán)境失穩(wěn)。此外,其治療方案中,往往包含糖皮質(zhì)激素、抗腫瘤壞死因子抑制劑、細(xì)胞毒制劑等藥品,這些藥品均可使患者的免疫力下降,在此基礎(chǔ)上接觸外來(lái)結(jié)核分枝桿菌,易患結(jié)核病。但由于風(fēng)濕性疾病患者處于免疫功能異常狀態(tài),使其結(jié)核癥狀不典型,易造成風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者的漏診和誤診。故筆者通過(guò)比較風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者與單純肺結(jié)核患者的相關(guān)免疫實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果,分析風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核免疫學(xué)指標(biāo)的特點(diǎn),為臨床醫(yī)生提供參考。

    對(duì)象和方法

    一、研究對(duì)象

    搜集2017年7月至2019年7月解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心全軍結(jié)核病研究所明確診斷為風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者117例,為觀察組;其中類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者54例,強(qiáng)直性脊柱炎患者29例,干燥綜合征患者26例,系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者5例,硬皮病患者2例,風(fēng)濕熱患者1例。采用系統(tǒng)抽樣方法隨機(jī)選取同時(shí)期診斷為單純肺結(jié)核患者117例,為對(duì)照組。兩組患者中初治肺結(jié)核患者用藥方案為H-R(Rft)-Z-E(S)/H-R(Rft),復(fù)治肺結(jié)核患者用藥方案為H-R(Rft)-Z-E(S)/H-R(Rft)-E(Lfx)。觀察組患者均服用了免疫抑制劑(包括糖皮質(zhì)激素、鈣調(diào)磷酸酶抑制劑等)。兩組患者其他一般情況見(jiàn)表1,其中觀察組和對(duì)照組年齡和患病類(lèi)型情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。117例觀察組患者中,男59例,女58例;117例對(duì)照組患者中,男30例,女87例。觀察組和對(duì)照組性別分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因結(jié)核病患者女性多于男性,而風(fēng)濕性疾病中各類(lèi)疾病男女比例不同,如強(qiáng)直性脊柱炎男性較多見(jiàn),而類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎女性患者約3倍于男性;且疾病類(lèi)型較多,故未進(jìn)一步分析性別影響。

    二、診斷標(biāo)準(zhǔn)

    風(fēng)濕性疾病的診斷參照美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì) (American College of Rheumatology,ACR)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。肺結(jié)核的診斷參照《WS 288—2017 肺結(jié)核診斷》[1]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

    三、觀察指標(biāo)

    1.結(jié)核抗體檢測(cè):兩組共234例患者均進(jìn)行了結(jié)核抗體檢測(cè)。結(jié)核抗體的檢測(cè)分為結(jié)核抗體38 kD+16 kD(1 kD=相對(duì)分子質(zhì)量1000;下同)和結(jié)核抗體38 kD的檢測(cè)。采集兩組患者外周靜脈血4 ml于帶凝膠的血清管中,標(biāo)本按常規(guī)法分離、儲(chǔ)存,實(shí)驗(yàn)步驟按照結(jié)核抗體檢測(cè)試劑盒(北京中檢安泰診斷科技有限公司)說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行,根據(jù)顯色情況判定結(jié)核抗體反應(yīng)陽(yáng)性或是陰性。

    表1 兩組患者一般情況比較

    2.γ干擾素釋放試驗(yàn):234例患者均進(jìn)行了γ干擾素釋放試驗(yàn)。采集兩組患者外周靜脈血4 ml,分離外周血單個(gè)核細(xì)胞并計(jì)數(shù);并以酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)測(cè)定法(ELISPOT)(上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司)檢測(cè)γ干擾素分泌性T淋巴細(xì)胞。當(dāng)任一檢測(cè)孔達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)判定為陽(yáng)性:陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為1~5個(gè),A孔或B孔斑點(diǎn)數(shù)減去陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6個(gè);陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6個(gè),A孔或B孔斑點(diǎn)數(shù)必須>2倍陰性對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)。

    3.T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè):因部分患者住院時(shí)間較短或拒絕接受T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè),故觀察組和對(duì)照組患者未全部進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)。其中觀察組患者中36例進(jìn)行了T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè),對(duì)照組患者中45例進(jìn)行了此檢測(cè)。采集兩組患者外周靜脈血4 ml,分別各取100 μl新鮮抗凝血于含不同抗體的樣管(北京中科銳進(jìn)科技有限責(zé)任公司)中,振蕩均勻,室溫避光孵育15 min,加入溶血素溶血,樣本溶血充分后放入流式細(xì)胞儀中,測(cè)定兩組外周血CD4+、CD8+水平,并計(jì)算CD4+/CD8+值。

    四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    結(jié) 果

    一、結(jié)核抗體檢測(cè)

    在結(jié)核抗體38 kD+16 kD的檢測(cè)中觀察組患者陽(yáng)性率為6.84%(8/117),對(duì)照組患者陽(yáng)性率為33.33%(39/117)。兩組間陽(yáng)性率進(jìn)行比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.59,P=0.000)。在結(jié)核抗體38 kD的檢測(cè)中觀察組患者陽(yáng)性率為21.37%(25/117),對(duì)照組患者陽(yáng)性率為71.79%(84/117)。兩組間陽(yáng)性率進(jìn)行比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=59.78,P=0.000)。具體見(jiàn)表2。

    二、γ干擾素釋放試驗(yàn)

    在γ干擾素釋放試驗(yàn)中,觀察組患者陽(yáng)性率為57.26%(67/117),對(duì)照組患者陽(yáng)性率為55.56%(65/117)。兩組間陽(yáng)性率進(jìn)行比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.70,P=0.792),具體見(jiàn)表2。

    三、T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

    觀察組外周血CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+值與對(duì)照組比較明顯增高,兩組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=2.11,P=0.035;Z=4.90,P=0.000);而外周血CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察組低于對(duì)照組,兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=2.27,P=0.023)。具體見(jiàn)表2。

    討 論

    風(fēng)濕性疾病患者本身即存在免疫系統(tǒng)異常[2],糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用使機(jī)體的免疫功能下降[3],易導(dǎo)致各種感染發(fā)生,因此風(fēng)濕性疾病患者結(jié)核感染率逐年增高。而在結(jié)核病的發(fā)病過(guò)程中,以T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答發(fā)揮著重要的作用,結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸與宿主細(xì)胞的免疫功能有著密切關(guān)系。免疫學(xué)檢測(cè)中外周血T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定是反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo),結(jié)核抗體檢測(cè)、γ干擾素釋放試驗(yàn)對(duì)于免疫力低下的結(jié)核病患者具有良好的輔助診斷價(jià)值。故本研究回顧性分析風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者的免疫學(xué)檢測(cè)結(jié)果,以探討風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者的免疫學(xué)指標(biāo)特點(diǎn)。

    結(jié)核分枝桿菌可刺激結(jié)核感染患者產(chǎn)生抗體,抗體是抗原誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的具有免疫活性的免疫球蛋白,其主要作用是與抗原發(fā)生免疫反應(yīng),阻斷病原體的致病作用。而產(chǎn)生的抗體量與感染者機(jī)體的免疫功能有關(guān),當(dāng)患者免疫應(yīng)答低下則可導(dǎo)致機(jī)體不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生少量特異性結(jié)核抗體。在本研究中,觀察組患者結(jié)核抗體38 kD+16 kD陽(yáng)性率僅為6.84%,結(jié)核抗體38 kD的陽(yáng)性率為21.37%,均低于對(duì)照組的陽(yáng)性率(33.33%、71.79%)??梢?jiàn)風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者因風(fēng)濕性疾病導(dǎo)致機(jī)體免疫功能低下,感染結(jié)核分枝桿菌后機(jī)體難以產(chǎn)生高水平的結(jié)核抗體量。結(jié)核抗體的檢測(cè)是針對(duì)機(jī)體體液免疫學(xué)的檢測(cè)方法[4],本研究結(jié)果顯示風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者的體液免疫功能低于單純肺結(jié)核患者,應(yīng)用結(jié)核抗體檢測(cè)對(duì)風(fēng)濕性疾病患者是否并發(fā)肺結(jié)核進(jìn)行診斷與鑒別診斷時(shí),出現(xiàn)假陰性率高,易延誤診斷與治療。

    表2 各項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)結(jié)果在兩組患者中的比較

    γ干擾素釋放試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定釋放γ干擾素的特異性T淋巴細(xì)胞數(shù)量,判斷是否有結(jié)核感染。本研究中觀察組患者結(jié)核分枝桿菌特異性γ干擾素釋放試驗(yàn)陽(yáng)性率為57.26%,高于Villar-Hemandez等[5]研究中34.9%的陽(yáng)性率,差異原因可能與地理環(huán)境、種族、結(jié)核分枝桿菌基因型等有關(guān)。本次研究發(fā)現(xiàn)觀察組患者結(jié)核分枝桿菌特異性γ干擾素釋放試驗(yàn)陽(yáng)性率(57.26%)與對(duì)照組患者陽(yáng)性率(55.56%)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者進(jìn)行γ干擾素釋放試驗(yàn)的陽(yáng)性率與單純肺結(jié)核患者相比并無(wú)特異性。多篇文獻(xiàn)報(bào)道,使用γ干擾素釋放試驗(yàn)判斷風(fēng)濕性疾病并發(fā)結(jié)核感染更具有優(yōu)勢(shì)[6-8]。正如本研究中觀察組患者γ干擾素釋放試驗(yàn)陽(yáng)性率高于結(jié)核抗體陽(yáng)性率,提示γ干擾素釋放試驗(yàn)對(duì)于風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核的診斷更有意義;但兩種免疫學(xué)檢測(cè)均存在假陰性率,故使用這兩種檢測(cè)方法結(jié)果為陰性時(shí)不能完全排除結(jié)核分枝桿菌感染可能。

    感染結(jié)核分枝桿菌后,機(jī)體會(huì)出現(xiàn)免疫應(yīng)答,其中細(xì)胞免疫應(yīng)答發(fā)揮著重要的作用,血液中T淋巴細(xì)胞亞群比例及相關(guān)細(xì)胞因子的作用是細(xì)胞免疫中的重要因素。T淋巴細(xì)胞根據(jù)其細(xì)胞表面的不同分子特征可分為CD4+T 細(xì)胞和 CD8+T 細(xì)胞兩個(gè)亞群,CD4+T 細(xì)胞主要發(fā)揮抗感染免疫作用,可產(chǎn)生多種重要的的細(xì)胞因子;CD8+T 細(xì)胞主要參與細(xì)胞毒性反應(yīng),可特異性殺傷靶細(xì)胞。正常情況下,這兩種細(xì)胞亞群可相互制約,使機(jī)體免疫功能達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。這兩種細(xì)胞亞群發(fā)展或功能的破壞是造成自身免疫和炎癥疾病的主要原因[9],且CD4+、CD8+這兩種細(xì)胞亞群的比例影響著結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸,觀察CD4+、CD8+水平和CD4+/CD8+值的變化有助于疾病的療效觀察和預(yù)后監(jiān)測(cè)。已有研究發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者淋巴細(xì)胞亞群出現(xiàn)紊亂,CD4+水平和CD4+/CD8+值降低,CD8+水平升高[10]。但在本研究中可觀察到風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核患者的CD4+水平和CD4+/CD8+值與單純肺結(jié)核患者相比更高,這可能與風(fēng)濕免疫性疾病中CD4+細(xì)胞亞群的失衡有關(guān),當(dāng)發(fā)生免疫性疾病時(shí),體內(nèi)的CD4+細(xì)胞可異常增高[11]??梢?jiàn)當(dāng)風(fēng)濕性疾病患者并發(fā)肺結(jié)核時(shí),機(jī)體的免疫情況與單純肺結(jié)核患者機(jī)體的免疫情況不同,更為復(fù)雜多變。

    綜上所述,單純肺結(jié)核患者結(jié)核抗體檢測(cè)多陽(yáng)性,當(dāng)患者γ干擾素釋放試驗(yàn)陽(yáng)性且外周血CD4+細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)升高、CD8+細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)降低,無(wú)論結(jié)核抗體檢測(cè)是否為陽(yáng)性,多提示為風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核。以上3種免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果的差異有助于風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核和單純肺結(jié)核的鑒別。但本研究的不足之處在于缺少與單純風(fēng)濕性疾病患者免疫學(xué)指標(biāo)的比較,今后可對(duì)此進(jìn)行研究,深入了解風(fēng)濕性疾病并發(fā)肺結(jié)核后機(jī)體的免疫功能狀態(tài),以便更好地進(jìn)行診斷與預(yù)后監(jiān)測(cè)。

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