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    長(zhǎng)鏈非編碼RNA PCGEM1通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2/Smad2信號(hào)通路調(diào)控口腔鱗狀細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究

    2020-10-12 15:29:32翁旭李勁松范松
    華西口腔醫(yī)學(xué)雜志 2020年5期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞株熒光素酶空白對(duì)照

    翁旭 李勁松 范松

    1.汕頭市中心醫(yī)院口腔科,汕頭 515031;2.中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院口腔科,廣州 510120

    口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcino-ma,OSCC)是口腔癌的一種高發(fā)類型,發(fā)病率約占口腔癌的85%[1],具有發(fā)病迅速、轉(zhuǎn)移率高等特點(diǎn)[2],但發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確。癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程,也是導(dǎo)致治療失敗和死亡的主要原因之一,因此尋找新的治療靶點(diǎn)尤為迫切。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long-chain noncoding RNA,lncRNA)是一類不編碼蛋白的RNA分子,長(zhǎng)度介于200~100 000 nt[3]。研究[4]表明,lncRNA在腫瘤細(xì)胞周期、侵襲轉(zhuǎn)移及化療耐藥等相關(guān)的信號(hào)通路方面均發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,其作用類似于癌基因或抑癌基因。lncRNA PCGEM1是一種在前列腺癌細(xì)胞中特異性高表達(dá)的lncRNA,可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖和遷移[5]。目前關(guān)于lncRNA PCGEM1在OSCC中的作用研究報(bào)道甚少,本研究探討lncRNA PCGEM1對(duì)OSCC細(xì)胞增殖侵襲及遷移的影響。

    1 材料和方法

    1.1 組織標(biāo)本

    收集2016年6月—2018年3月于汕頭市中心醫(yī)院接受手術(shù)治療的80例OSCC患者的癌組織及距離癌組織超過(guò)2 cm處的正常組織,用以上組織構(gòu)建組織芯片免疫組織化學(xué)染色,80例患者的組織標(biāo)本中有20例出現(xiàn)了不同程度缺失,剩余60例經(jīng)組織病理學(xué)檢測(cè)證實(shí)為原發(fā)性O(shè)SCC,納入本研究。60例患者年齡36~75歲,中位年齡53歲。所有患者均同意本研究并簽署知情同意書(shū),且經(jīng)汕頭市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)后收集標(biāo)本。

    1.2 細(xì)胞及主要試劑和儀器

    人正??谇火つど掀ぜ?xì)胞(oral mucosa epithelial cell,OMEC)及人源OSCC細(xì)胞株KB、BcaCD885、SCC-4、CAL27、SCC-15均購(gòu)自美國(guó)模式培養(yǎng)物保藏所(American Type Culture Collection,ATCC)。

    DMEM培養(yǎng)基、SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測(cè)試劑盒(TOYOBO公司,日本),Trizol 試劑盒(TaKaRa公司,日本),Trans-well小室(BD公司,美國(guó)),MTT試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司),Airtech超凈工作臺(tái)(江蘇蘇凈集團(tuán)有限公司),MCO-15AC細(xì)胞培養(yǎng)箱(SANYO公司,日本),Ti-U/Ti-S倒置熒光顯微鏡(Nikon公司,日本),5810R型高速離心機(jī)(Ep-pendorf公司,美國(guó)),R480 qRT-PCR儀(Roche公司,瑞士)。siPCGEM1及陰性對(duì)照(negative con-trol,NC,相對(duì)于siPCGEM1的siRNA隨機(jī)序列)片段、PCGEM1、miR-148a及U6引物均由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)完成。

    1.3 qRT-PCR檢測(cè)lncRNA PCGEM1的表達(dá)

    依據(jù)TRIzol法提取癌組織、正常組織及OMEC、KB、BcaCD885、SCC-4、CAL27、SCC-15細(xì)胞株樣本的總RNA,并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,按照PrimeScrip反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄成cDNA,所有操作嚴(yán)格按照試劑盒要求執(zhí)行。采用SYBR Premix Ex Taq說(shuō)明書(shū)配置qRT-PCR反應(yīng)體系,反應(yīng)條件為:1)預(yù)變性,75 ℃,120 s;2)變性,90 ℃,5 min;3)退火,60 ℃,60 s;4)延伸,72℃,30 s;5)qRT-PCR儀采集熒光信號(hào)40個(gè)循環(huán)。U6作為內(nèi)參,上游引物為5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’,下游引物為5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’;lncRNA PCGEM1的上游引物為5’-GCGGCGGTTAATGCTA-ATTGTG-3’ ,下游引物為5’-ATCCAGTGCAGGG-TCCGAGG-3’;miR-148a的上游引物為5’-ATGCA-GTCTCCACAGCAGCAGAG-3’,下游引物為5’-CG-AACGGAATGTGCGGAAGTG-3’。相對(duì)表達(dá)量用2 ΔΔCT表示。每個(gè)樣本獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

    1.4 分析lncRNA PCGEM1和miR-148a的表達(dá)與患者臨床病理特征間的關(guān)系

    以lncRNA PCGEM1和miR-148a在OSCC組織中相對(duì)表達(dá)量中位數(shù)作為節(jié)點(diǎn),將患者分為lncRNA PCGEM1高表達(dá)組、lncRNA PCGEM1低表達(dá)組及miR-148a高表達(dá)組、miR-148a低表達(dá)組,分析不同表達(dá)組間患者臨床病理特征(性別、年齡、TNM分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑)的差異。

    1.5 細(xì)胞系構(gòu)建

    調(diào)整KB細(xì)胞株密度至1×106個(gè)·mL-1,取2 mL接種于6孔板中,培養(yǎng)過(guò)夜,采用Lipofectamine 2000將濃度均為100 nmol·L-1的siPCGEM1和陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染至細(xì)胞,將細(xì)胞分為KB-siPCGEM1組及KB-NC組,并以未處理的KB細(xì)胞作為空白對(duì)照組。

    1.6 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖

    將KB、KB-NC及KB-siPCGEM1按照每孔1×103個(gè)細(xì)胞密度鋪至96孔板,設(shè)24、48、72、96 h 4個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)5個(gè)復(fù)孔,輕輕混勻后,置入37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。于設(shè)定時(shí)間點(diǎn)取出96孔板,每孔加MTT溶液20 μL,37 ℃避光4 h后棄掉孔內(nèi)液體,再加二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)各100 μL,置于37 ℃搖床上快速振蕩15 min,以充分溶解結(jié)晶物,最后將96孔板置于酶標(biāo)儀上檢測(cè)492 nm處的OD值。

    1.7 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲

    實(shí)驗(yàn)前12 h更換為無(wú)血清培養(yǎng)基,將40 μL基質(zhì)膠(matrigel)鋪于Transwell小室(規(guī)格24孔,孔徑8 μm)中,消化細(xì)胞并用1×PBS清洗2遍,將500 μL完全培養(yǎng)基加入24孔板,細(xì)胞計(jì)數(shù),取5×105個(gè)細(xì)胞重懸,向Transwell小室中加200~250 μL細(xì)胞懸液,保證下層完全培養(yǎng)基與Transwell小室間無(wú)氣泡。置于培養(yǎng)箱內(nèi)正常培養(yǎng)24 h,加用甲醇配制、PBS稀釋的0.1%結(jié)晶紫染液500 μL進(jìn)行染色,室溫避光15 min,PBS漂洗以后用棉棒擦Transwell小室內(nèi)部,倒置晾干,置于倒置顯微鏡下觀察穿過(guò)膜的細(xì)胞并拍照計(jì)數(shù)。

    1.8 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移

    將KB、KB-NC及KB-siPCGEM1按5×105個(gè)/孔均勻鋪至6孔板,用10 μL白槍頭劃線并以尺子輔助,加PBS將細(xì)胞碎片沖洗掉,然后加1%血清的培養(yǎng)基,置于顯微鏡下拍照并做好標(biāo)記,此時(shí)記為0 h,繼續(xù)于37 ℃、5%CO2溫箱培養(yǎng),24 h后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞運(yùn)動(dòng)情況并拍照。

    1.9 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)

    用生物信息學(xué)網(wǎng)站starBase預(yù)測(cè)lncRNA PCGEM1可互補(bǔ)結(jié)合的微小RNA(microRNA,miRNA),再根據(jù)www.microRNA.org網(wǎng)站預(yù)測(cè)相應(yīng)miRNA可靶向結(jié)合的基因。

    1.10 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

    通過(guò)miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)獲得人的PCGEM1和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(transforming growth factor β2,TGF β2)基因序列,以HNEC細(xì)胞基因組DNA為模板,采用qRT-PCR擴(kuò)增PCGEM1和TGFβ2的3’-非翻譯區(qū)序列,構(gòu)建至熒光素酶報(bào)告基因載體psi-CHECK中,記為野生型lncRNA PCGEM1-wild和TGF β2 wild,同時(shí)構(gòu)建突變型重組質(zhì)粒lncRNA PCGEM1-mutant和TGF β2 mutant。將HEK293T細(xì)胞按30%左右密度鋪于24孔板,將miRNA-148a模擬物(miRNA-148a mimic)以及miRNA-148a模擬物的對(duì)照物(mimic control)分別與野生型lncRNA PCGEM1-wild及突變型重組質(zhì)粒lncRNA PCGEM1-mutant、TGF β2 mutant共轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞,以空載質(zhì)粒作為對(duì)照。轉(zhuǎn)染后24 h,根據(jù)雙熒光素酶測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)熒光素酶活性。

    1.11 免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)

    將轉(zhuǎn)染48 h的KB細(xì)胞,加入適量的RIPA裂解液裂解30 min,12 000 r·min-14 ℃離心10 min,收集上清,用總蛋白提取試劑盒分別提取組織及細(xì)胞中總蛋白,BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白含量。制備蛋白樣品并進(jìn)行十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sul-fate,SDS)-聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE),然后轉(zhuǎn)至PVDF膜,加含有5%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的封閉液室溫下封閉2 h。分別加適量用封閉液稀釋的TGF β2、p-Smad2一抗,之后置于4 ℃冰箱過(guò)夜。次日用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution,PBST)將膜沖洗干凈,再分別加稀釋好的辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗,室溫孵育2 h,PBST洗膜,增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法(polymerase chain reaction-enhanced chemilu-minecence,ECL)對(duì)結(jié)合的抗體進(jìn)行觀察,暗室曝光拍照,同時(shí)以GAPDH作為內(nèi)參蛋白。

    1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料采用百分比表示,組間對(duì)比采用卡方檢驗(yàn),計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

    2 結(jié)果

    2.1 lncRNA PCGEM1、miR-148a在不同組織及細(xì)胞中的表達(dá)

    qRT-PCR結(jié)果顯示,1)OSCC組織中miR-148a、lncRNA PCGEM1的表達(dá)水平高于正常組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2)與OMEC相比,lncRNA PCGEM1、miR-148a在KB、BcaCD885、SCC-4、CAL27、SCC-15中的表達(dá)明顯升高(P<0.05),其中KB的lncRNA PCGEM1和miR-148a表達(dá)最高,與其他OSCC細(xì)胞相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖1)。

    2.2 lncRNA PCGEM1和miR-148a在OSCC不同臨床病理中表達(dá)的差異

    60例患者lncRNA PCGEM1的相對(duì)表達(dá)量在0.56~1.43范圍內(nèi),以中位數(shù)0.96為分組界值,<0.96記為lncRNA PCGEM1低表達(dá)(22例),≥0.96記為lncRNA PCGEM1高表達(dá)(38例);miR-148a的相對(duì)表達(dá)量在0.52~1.22范圍內(nèi),以中位數(shù)為0.86為分組界值,<0.86記為miR-148a低表達(dá)(32例),≥0.86記為lncRNA PCGEM1高表達(dá)(28例)。統(tǒng)計(jì)分析表明,lncRNA PCGEM1和miR148a低表達(dá)者的性別、年齡和腫瘤直徑的比例與高表達(dá)者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度的比例與高表達(dá)者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

    圖 1 lncRNA PCGEM1、miR-148a在不同組織及細(xì)胞中的表達(dá)Fig 1 Expression of lncRNA PCGEM1 and miR-148a in different tissues and different cell lines

    2.3 細(xì)胞系構(gòu)建

    qRT-PCR結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組和KB-NC組相比,KB-siPCGEM1組中l(wèi)ncRNA PCGEM1的表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);空白對(duì)照組和KB-NC組中l(wèi)ncRNA PCGEM1的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),提示成功構(gòu)建lncRNA PCGEM1沉默細(xì)胞系(圖2)。

    2.4 lncRNA PCGEM1對(duì)OSCC細(xì)胞株KB增殖能力的影響

    MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組和KB-NC組相比,KB-siPCGEM1組OD492nm值明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說(shuō)明lncRNA PCGEM1被沉默后,細(xì)胞增殖能力顯著降低(圖3)。

    表 1 lncRNA PCGEM1和miR-148a在OSCC不同臨床病理中表達(dá)的差異Tab 1 Differences in expression of lncRNA PCGEM1 and miR-148a in different clinicopathologic OSCC

    圖 2 lncRNA PCGEM1在各組KB中的表達(dá)Fig 2 Expression of lncRNA PCGEM1 in KB of each group

    2.5 lncRNA PCGEM1對(duì)OSCC細(xì)胞株KB侵襲能力的影響

    Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,空白對(duì)照組、KB-NC組和KB-siPCGEM1組的侵襲細(xì)胞數(shù)分別為(412±53)、(396±48)、(182±25)個(gè)。與空白對(duì)照組和KB-NC組相比,KB-siPCGEM1組細(xì)胞侵襲數(shù)量明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。該結(jié)果表明沉默lncRNA ANCR后,細(xì)胞侵襲能力明顯降低(圖4)。

    圖 3 lncRNA PCGEM1對(duì)OSCC細(xì)胞株KB增殖能力的影響Fig 3 Effect of lncRNA PCGEM1 on KB proliferation of OSCC cell line

    2.6 lncRNA PCGEM1對(duì)OSCC細(xì)胞株KB遷移能力的影響

    劃痕實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示,空白對(duì)照組、KB-NC組和KB-siPCGEM1組的細(xì)胞遷移率分別為78.21%±3.43%、80.23%±3.09%、43.64%±2.51%。與空白對(duì)照組和KB-NC組相比,KB-siPCGEM1組細(xì)胞遷移率下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明沉默lncRNA PCGEM1后,細(xì)胞遷移能力下降(圖5)。

    圖 5 lncRNA PCGEM1對(duì)OSCC細(xì)胞株KB遷移能力的影響 倒置顯微鏡 × 200Fig 5 Effect of lncRNA PCGEM1 on KB migration of OSCC cell line inverted microscope × 200

    2.7 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

    starBase網(wǎng)站預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,lncRNA PCGEM1可與miR-148a互補(bǔ)結(jié)合,再經(jīng)www.microRNA.org網(wǎng)站預(yù)測(cè)分析顯示,miR-148a與TGF β2存在靶向結(jié)合位點(diǎn)。雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染miR-148a mimic后,lnc RNA PCGEM1-wild和TGFβ2 wild的熒光素酶活性被抑制(P<0.05),而lnc RNA PCGEM1-mutant和TGFβ2 mutant的熒光素酶活性無(wú)明顯變化(P>0.05),說(shuō)明miR-148a與lncRNA PCGEM1和TGF β2具有靶向調(diào)控關(guān)系(圖6)。

    2.8 lncRNA PCGEM1與TGF β2/Smad2的關(guān)系

    qRT-PCR和Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示,KB-siPCGEM1組中miR148a、TGF β2及p-Smad2的表達(dá)均低于空白對(duì)照組和KB-NC組(P<0.05),空白對(duì)照組和KB-NC組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖7)。

    圖 6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)Fig 6 Double luciferase reporter gene detection

    3 討論

    OSCC是口腔惡性腫瘤中最為常見(jiàn)的類型,研究[6]表明,有多個(gè)癌基因及抑癌基因參與了OSCC的發(fā)生發(fā)展,從分子生物學(xué)角度出發(fā)尋找其進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物,對(duì)于臨床上治療方法的選擇和患者預(yù)后的判斷有著重要的意義。

    圖 7 lncRNA PCGEM1與TGF β2/Smad2的關(guān)系Fig 7 Relationship between lncRNA PCGEM1 and TGF β2/Smad2

    目前關(guān)于lncRNA在腫瘤中的作用僅有一小部分被透徹研究,有些lncRNA在腫瘤中的表達(dá)異常,功能類似于癌基因或抑癌基因,可以通過(guò)參與調(diào)控細(xì)胞周期影響癌癥的發(fā)生發(fā)展[7]。目前,尚無(wú)標(biāo)志性lncRNA可直接預(yù)測(cè)OSCC,但lncRNA PCGEM1在前列腺癌中特異性表達(dá)已被證實(shí),該基因位于染色體2q32位點(diǎn)上[8]。Zhang等[9]采用qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)lncRNA PCGEM1在胃癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織。Chen等[10]研究表明,在胰腺癌患者癌組織、血清及胰腺癌細(xì)胞分化過(guò)程中,lncRNA PCGEM1的表達(dá)量異常升高,而被沉默后,胰腺癌細(xì)胞的增殖能力減弱,并且增殖相關(guān)的基因表達(dá)量下降[11],由此推測(cè)lncRNA PCGEM1對(duì)胰腺癌細(xì)胞的增殖起到促進(jìn)作用。本研究采用qRT-PCR檢測(cè)lncRNA PCGEM1在OSCC組織和癌旁組織中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)其在OSCC組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織,分析lncRNA PCGEM1表達(dá)與OSCC患者的臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系發(fā)現(xiàn),lncRNA PCGEM1的表達(dá)在不同TNM分期、組織分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上存在明顯差異(P<0.05)。此外,本研究構(gòu)建了lncRNA PCGEM1沉默細(xì)胞系,探討lncRNA PCGEM1在OSCC中的作用,結(jié)果顯示lncRNA PCGEM1下調(diào)后,OSCC癌細(xì)胞KB的增殖、侵襲和遷移能力明顯下降,說(shuō)明lncRNA PCGEM1在OSCC的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。

    研究[12]表明,miRNA是通過(guò)堿基不完全互補(bǔ)的方式與靶基因結(jié)合,從而影響腫瘤細(xì)胞的凋亡、侵襲及遷移,并引發(fā)周圍細(xì)胞的壞死與凋亡。同時(shí),miRNA也是lncRNA發(fā)揮作用的重要環(huán)節(jié)。本研究通過(guò)starBase數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)lncRNA PCGEM1可與miR-148a互補(bǔ)結(jié)合。Li等[13]研究發(fā)現(xiàn),miR-148a在食管癌組織中的表達(dá)低于正常癌旁組織,上調(diào)miR-148a表達(dá)可促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖和遷移,miR-148a作為癌基因?qū)κ彻馨┑倪M(jìn)展具有促進(jìn)作用。本研究結(jié)果顯示,miR-148a的表達(dá)在不同TNM分期、組織分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上存在明顯差異(P<0.05)。本研究中,OSCC組織miR-148a的表達(dá)明顯高于正常組織,KB細(xì)胞lncRNA PCGEM1沉默后,miR-148a表達(dá)下調(diào)。提示lncRNA PCGEM1促進(jìn)OSCC細(xì)胞株KB的增殖作用可能與上調(diào)miR-148a有關(guān)。研究[14]表明,TGF β2也是miR-148a下游的作用靶點(diǎn)之一,miR-148a可與TGF β2的3’非翻譯區(qū)(3’ untranslated regions,3’UTR)互補(bǔ)結(jié)合,啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制,調(diào)控TGF β2下游信號(hào)通路。www.microRNA.org網(wǎng)站預(yù)測(cè)分析顯示,miR-148a可互補(bǔ)結(jié)合TGF β2。本研究通過(guò)熒光素酶基因報(bào)告分析也證實(shí)二者存在調(diào)控關(guān)系。TGF β2/Smad2信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要角色,該通路通過(guò)磷酸化轉(zhuǎn)錄因子Smad蛋白實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)通路信號(hào)的傳導(dǎo)[15]。Smad蛋白包括Smad1~Smad9,其中當(dāng)Smad2磷酸化水平受到抑制時(shí),TGF β2/Smad2信號(hào)通路的生物學(xué)功能發(fā)生轉(zhuǎn)變,對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲起到抑制作用[16]。Yu等[17]研究也發(fā)現(xiàn),下調(diào)lncRNA PCGEM1表達(dá)后,TGF β2蛋白表達(dá)水平降低,結(jié)直腸癌的侵襲及遷移受到抑制。本研究中,KB-siPCGEM1組miR-148a表達(dá)下調(diào)后,TGF β2、p-Smad2蛋白的表達(dá)量降低。因此推斷,lncRNA PCGEM1可能通過(guò)調(diào)節(jié)TGF β2/smad2信號(hào)通路影響癌癥的進(jìn)展。

    綜上,lncRNA PCGEM1在OSCC中高表達(dá),高表達(dá)lncRNA PCGEM1可能通過(guò)上調(diào)miR-148a水平,強(qiáng)化TGF β2/Smad2信號(hào)通路,從而促進(jìn)OSCC的進(jìn)展。

    利益沖突聲明:作者聲明本文無(wú)利益沖突。

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