兩個(gè)野生蜜環(huán)菌菌株鑒定及菌絲體培養(yǎng)研究

杜忠偉，胡志強(qiáng)，亢學(xué)平，李健，王旭，王鑫

(延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 延邊 133000)

蜜環(huán)菌(Arimillariamellea)，屬于擔(dān)子菌亞門，傘菌亞綱，傘菌目，白蘑科，蜜環(huán)菌屬，是一種可以食用菌的大型真菌，廣泛分布于北半球的溫帶地區(qū)。菌絲體是蜜環(huán)菌的營(yíng)養(yǎng)器官，在不良的環(huán)境條件下形成菌索，人工培養(yǎng)主要是對(duì)菌索的培養(yǎng)。蜜環(huán)菌與天麻存在共生關(guān)系，通過菌索入侵天麻，并為天麻的無性繁殖提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。因此蜜環(huán)菌的質(zhì)量對(duì)天麻產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量產(chǎn)生重要的影響。目前全世界己鑒定的蜜環(huán)菌生物種近40 種，選育優(yōu)良的蜜環(huán)菌菌株是發(fā)展天麻產(chǎn)業(yè)的前提和基礎(chǔ)，我們針對(duì)東北地區(qū)的常見蜜環(huán)菌進(jìn)行采集，對(duì)其中兩種進(jìn)行了比較試驗(yàn)，為蜜環(huán)菌菌種選育提供基礎(chǔ)資料。

1 材料和方法

1.1 研究材料

將采集到的兩個(gè)蜜環(huán)菌菌株編號(hào)為AM1和AM2。

AM1采集地：吉林省延邊和龍市八家子泉水洞林場(chǎng)，采集時(shí)間：2019年9月3日，闊葉林樹根部。

AM2采集地：吉林省延邊和龍市八家子泉水洞林場(chǎng)，采集時(shí)間：2019年9月12日，針葉林樹根部。

母種培養(yǎng)基：選擇使用PDA加富培養(yǎng)基進(jìn)行菌種培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25 ℃。

圖1 野生采集的蜜環(huán)菌子實(shí)體(注：A,C:AM1;B,D:AM2)

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基制作及接種。制作PDA加富培養(yǎng)基：先稱取木屑6 g，麩皮20 g，用適量水調(diào)勻，再加入1000 mL水煮制，待煮沸時(shí)開始記時(shí)，保持30 min后過濾，將過濾好的溶液加入到制作好的PDA培養(yǎng)基中，混合加熱后，倒入試管中，高溫高壓(121 ℃，30 min)滅菌，擺斜面、冷卻，將等量的菌種在超凈工作臺(tái)上接種至培養(yǎng)基中間位置。

1.2.2 菌絲體培養(yǎng)。將接完種的試管標(biāo)記好后放入25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，萌發(fā)后測(cè)量菌索生長(zhǎng)速度，觀察培養(yǎng)基的顏色變化，及兩個(gè)菌株的長(zhǎng)勢(shì)。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 形態(tài)學(xué)鑒定

通過形態(tài)學(xué)的描述比較，利用顯微鏡觀察孢子的形態(tài)特征，檢索真菌志和相關(guān)資料進(jìn)行鑒定。

AM1:子實(shí)體簇生，菌蓋直徑3～8 cm，初期成半球形，后期平展，顏色深棕色，表面有毛狀鱗片，菌肉白色，菌褶初期白色后期黃棕色，延生。菌柄長(zhǎng)5～10 cm，圓柱形，頂部至基部顏色由白色變?yōu)榛野咨?，在基部有黃色菌絲，具有菌環(huán)。擔(dān)孢子呈橢圓形，無色，(8～10) μm ×(5～7) μm,非淀粉質(zhì)。

經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定AM1為奧氏蜜環(huán)菌(Arimillariaostoyae)。

AM2:子實(shí)體生于闊葉林樹干根部或有樹根的地上，簇生，菌蓋直徑3～8 cm，扁球形至平展，黃白色至黃色，中間部位有鱗片，菌肉白色，菌褶黃白色，延生，稀疏，不等長(zhǎng)。菌柄細(xì)長(zhǎng)，長(zhǎng)度3～10 cm，直徑3～10 mm，中空，延生，從上至下顏色變深成黃褐色，擔(dān)孢子呈橢圓形至卵圓形，(8～10) μm×(5～7) μm，光滑，無色，非淀粉質(zhì)。至混合均勻鑒定AM2為假蜜環(huán)菌(Arimillariatabescens)。

經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定兩株蜜環(huán)菌為不同種。

2.2 菌絲體培養(yǎng)

兩種蜜環(huán)菌在PDA加富培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)存在明顯的差別，AM1菌索生長(zhǎng)較快，長(zhǎng)勢(shì)好，菌索粗壯，產(chǎn)生的黑色色素較多。AM2菌索生長(zhǎng)較慢，長(zhǎng)勢(shì)差，菌索較細(xì)，培養(yǎng)基表面白色菌絲較多。

圖2 菌絲體(菌索)培養(yǎng)

表1 兩株蜜環(huán)菌在相同培養(yǎng)基下生長(zhǎng)情況比較

3 結(jié)論與討論

目前，蜜環(huán)菌主要用于種植天麻、豬苓等藥材，人工培養(yǎng)蜜環(huán)菌菌材為天麻及豬苓等提供營(yíng)養(yǎng)。天麻、豬苓種植是個(gè)靈活、實(shí)用、投入低、效益高的產(chǎn)業(yè)，適宜于城鎮(zhèn)居民下崗、失業(yè)者、打工回鄉(xiāng)創(chuàng)業(yè)者等不同社會(huì)群體生產(chǎn)發(fā)展，天麻、豬苓等種植可利用廢棄資源、閑置空地，有利于生態(tài)環(huán)境的保護(hù)，創(chuàng)造了良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)生態(tài)效益。而蜜環(huán)菌菌種質(zhì)量直接影響天麻、豬苓等的質(zhì)量和產(chǎn)量，蜜環(huán)菌菌索粗壯，長(zhǎng)速快說明蜜環(huán)菌活力及侵染能力強(qiáng)，能夠很好的為豬苓及天麻提供營(yíng)養(yǎng)，在選擇蜜環(huán)菌時(shí)主要看其菌索的活力，活力強(qiáng)則天麻、豬苓產(chǎn)量高，品質(zhì)好。通過對(duì)兩種蜜環(huán)菌AM1和AM2的鑒定及培養(yǎng)驗(yàn)證，能夠選擇出菌索粗壯，生長(zhǎng)快速的蜜環(huán)菌。AM1和AM2用來作為天麻、豬苓栽培的菌材制作種源，需要進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。