不同采收期黔產(chǎn)鴨跖草中異葒草素含量及生物產(chǎn)量的動(dòng)態(tài)變化

李雪營(yíng)，梁黔生，林先燕，魏學(xué)軍

(黔南民族醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校 藥學(xué)系，貴州 都勻 558000)

鴨跖草為鴨跖草科植物鴨跖草(CommelinacommunisL.)的干燥地上部分，主要分布在我國(guó)西南、華東和華北等地區(qū)，具有清熱解毒、利水消腫的功效，臨床主要用于風(fēng)熱感冒、高燒不退、咽喉腫痛、水腫尿少、熱淋澀痛、癰腫疔毒等病癥的治療[1]。其含有較多異葒草素，常作為質(zhì)量評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)[2-3]。

目前對(duì)鴨跖草的研究多集中在化學(xué)成分和藥效學(xué)等方面，在質(zhì)量控制方面的研究較少。雖然鴨跖草的采收期在2015年版《中國(guó)藥典》中有夏、秋季采收的規(guī)定，但亦有在其他季節(jié)采收的報(bào)道[4]，市場(chǎng)上甚至出現(xiàn)春、夏、秋及初冬采收的情況。以季為采收的時(shí)間單位周期較長(zhǎng)，難以控制藥材的內(nèi)在質(zhì)量，進(jìn)而影響藥材的療效，存在指導(dǎo)性不足的問(wèn)題?，F(xiàn)有研究報(bào)道[3]表明，單純以不同采收期異葒草素的含量高低作為評(píng)價(jià)指標(biāo)而未考慮生物產(chǎn)量，其結(jié)果亦存在科學(xué)性不足的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)以黔產(chǎn)鴨跖草為研究對(duì)象，觀察和分析不同采收期異葒草素含量及生物產(chǎn)量的動(dòng)態(tài)變化，并以異葒草素總量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，探討鴨跖草的適宜采收期，明確采收時(shí)間，研究結(jié)果可為其后續(xù)開(kāi)發(fā)運(yùn)用和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系的建立提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀(北京安捷倫公司)；RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)IKA公司)；DHG-9240A真空干燥箱(上海金山公司)；DV215CD 電子天平(奧豪斯)。

1.2 材料

鴨跖草鮮品2019年4-10月采集于都勻市小圍寨鎮(zhèn)，樣本經(jīng)我校中藥教研室魏學(xué)軍教授鑒定為鴨跖草科鴨跖草屬植物鴨跖草(CommelinacommunisL.)的全草。異紅草素對(duì)照品(批號(hào)111974-201401)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

將不同時(shí)期采摘的鴨跖草干燥至恒重后粉碎，得樣品A1～A14(見(jiàn)表1)，各樣品均制備3批次備用。

2.2 供試品溶液制備[3]

分別精密稱(chēng)取不同批次鴨跖草藥材2 g，置圓底燒瓶中，加入20倍量70%乙醇溶液，加熱回流提取3次，時(shí)間分別為 2 h、1.5 h和1 h。合并提取液，過(guò)濾，離心，干燥后殘?jiān)眠m量甲醇溶解，微孔濾膜濾過(guò)后定容至10 mL量瓶中，得供試品溶液。

2.3 異葒草素含量測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取異葒草素20.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解并定容至刻度，搖勻即得異葒草素對(duì)照品溶液。

2.3.2 色譜條件 色譜柱：C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(15∶85)，體積流量：1.0 mL/min，柱溫：25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm，進(jìn)樣量：5 μL。色譜見(jiàn)圖1。

圖1 異葒草素對(duì)照品(A)和供試品(B)HPLC

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.5、5.0、7.5、12.5 mL于25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述對(duì)照品溶液，按照“2.3.2”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=3 080.4X+52.153(r=0.999 9)。試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照品在0.08～1.01 μg進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積積分線性關(guān)系良好。

2.3.4 精密度試驗(yàn) 取異葒草素照品溶液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，按照“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定5次峰面積，RSD值為0.35%。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取異葒草素對(duì)照品溶液2.0 mL，置 于10 mL量瓶中，按照“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件，分別于放置0、2、4、6、8 h后進(jìn)樣測(cè)定，異葒草素峰面積的RSD值為0.45%。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品A15份，按照“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行平行測(cè)定，異葒草素峰面積的RSD值為1.51%。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知異葒草素量的樣品A35份，加入適量異葒草素對(duì)照品，按照“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，異葒草素平均回收率為98.67%，RSD值為0.88%。

2.3.8 含量測(cè)定 精密量取各樣品不同批次提取所得供試品溶液適量，按照“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算異葒草素量，測(cè)定值為3批次的均值。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 鴨跖草的生物產(chǎn)量

樣品A1～A14每次采集10株，隨機(jī)選取3株，去根干燥后稱(chēng)重，以平均值計(jì)。結(jié)果見(jiàn)表 1。

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，不同采收期黔產(chǎn)鴨跖草中異葒草素的含量及生物產(chǎn)量均呈先升高后降低的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，且兩者具有較高的相似度。從表1直觀分析可見(jiàn)，異葒草素含量以7月下旬最高，生物產(chǎn)量以8月下旬為高，7月與8月間的異葒草素含量和生物產(chǎn)量亦處于較高水平。為科學(xué)評(píng)價(jià)，試驗(yàn)中采用異葒草素總量(異葒草素總量=異葒草素含量×生物產(chǎn)量)為考察指標(biāo)，數(shù)據(jù)采用方差分析后顯示，7月和8月間采收的鴨跖草中異葒草素總量無(wú)顯著性差異，但與其他采收時(shí)間差異顯著。生物產(chǎn)量測(cè)定結(jié)果顯示，鴨跖草地上部分的產(chǎn)量不同器官比重順序依次為：葉>莖>花>果實(shí)，以葉的占比最大，花和果實(shí)的占比最小。7月與8月正是該植物的生長(zhǎng)成熟期，植株生長(zhǎng)茂盛，這兩月的生物產(chǎn)量處于較高水平，進(jìn)入9月后，植株下半部分出現(xiàn)葉片枯萎或脫落及莖枯萎的現(xiàn)象，是生物產(chǎn)量逐漸降低的主要因素。8-9月為該植物的花期，9-10月為果期，開(kāi)花結(jié)果均需要消耗一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中可能也影響到異葒草素的合成與代謝，因而8月起異葒草素的含量呈逐漸降低趨勢(shì)。

表1 不同采收期鴨跖草中異葒草素含量和生物產(chǎn)量動(dòng)態(tài)變化

本研究對(duì)全草入藥和地上部分入藥進(jìn)行了對(duì)照試驗(yàn)，結(jié)果顯示：7月30日采集的鴨跖草全草(含根)和地上部分生物產(chǎn)量分別為(12.68±0.37)g與(12.39 ± 0.49)g，兩者無(wú)顯著性差異，提示根的產(chǎn)量對(duì)兩種入藥方式的影響較??；異葒草素的含量測(cè)定值分別為(1.629±0.003)mg·g-1與(1.877±0.007)mg·g-1，全草的含量低于地上部分，且兩者具顯著性差異，究其原因可能與根中異葒草素的含量相對(duì)較低有關(guān)。

綜上所述，黔產(chǎn)鴨跖草若以異葒草素為質(zhì)控指標(biāo)，結(jié)合采收加工的科學(xué)性、便捷性，建議在植株生長(zhǎng)茂盛，結(jié)果前采收地上部分入藥，采收時(shí)間以7-8月為宜。