蘆丁脂質(zhì)體凍干的制備和性能研究*

鄭 穎，李恩博，朱俊飛，余秀娟

(1 河北北方學(xué)院理學(xué)院，河北 張家口 075000；2 河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口 075000)

蘆丁，又名紫槲皮甙 ，是一類主要從豆科、蕓香科類植物中提取獲得的天然黃酮類化合物，具有消炎止痛，抗自由基氧化，防曬抗輻射，緩解肌肉疲勞等功效，是草本防曬護膚用品的主要配方成分。通常蘆丁水溶性較差，不利于皮膚的涂抹吸收，嚴重影響了它的使用效果[1-3]。脂質(zhì)體是一類在醫(yī)藥領(lǐng)域中常見的藥物載體物質(zhì)，具有水溶性好，毒副作用小，易于生物降解吸收等優(yōu)勢，常用于各類口服藥物的包封使用[4-6]。為增強蘆丁的水溶吸收性，提高它的使用效率，本次研究中，我們采用冷凍干燥技術(shù)以蘆丁為原料，制備了它的脂質(zhì)體凍干，考察了藥脂比，醇酯比等制備條件對產(chǎn)品包封率的影響，并對蘆丁脂質(zhì)體凍干的溶解性和穩(wěn)定性進行考察。

1 實 驗

1.1 實驗藥品和儀器

蘆丁，大連美侖生物技術(shù)有限公司；卵磷脂、甘露醇、膽固醇，上海麥克林生化科技有限公司；磷酸緩沖鹽溶液(PBS)自行配制；其余試劑等均為國產(chǎn)分析純試劑；Modulyo冷凍干燥機，美國Thermo FIsher公司；722分光光度計，上海光學(xué)儀器廠；超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；TGL-20M冷凍離心機，上海盧湘儀離心機儀器有限公司。

1.2 蘆丁脂質(zhì)體凍干的制備

稱量蘆丁2 mg，按比例將蘆丁、膽固醇，卵磷脂溶解于100 mL無水乙醇，超聲分散至獲得淺黃色溶液。常壓條件下，40 ℃水浴旋蒸至溶劑揮發(fā)，待容器壁形成透明薄膜之后，減壓蒸餾至溶劑完全揮發(fā)，加入PBS緩沖溶液10 mL，45 ℃水合反應(yīng)1 h，所得乳濁液超聲分散后，既得蘆丁脂質(zhì)體，將所得脂質(zhì)體置于冰箱中4 ℃冷藏。在經(jīng)過預(yù)冷凍的蘆丁脂質(zhì)體溶液中加入質(zhì)量比為10%的甘露醇后，置于冷凍干燥機中，于-40 ℃減壓冷凍干燥至樣品升華界面消失。既得蘆丁脂質(zhì)體凍干試樣。

1.3 蘆丁含量及包封率測定

所制蘆丁脂質(zhì)體凍干中的蘆丁含量及包封率采用紫外分光光度法測定并計算獲得，首先稱取標準蘆丁樣品，加入無水乙醇溶解，依次配置0 mg/mL，0.01 mg/mL，0.02 mg/mL，0.03 mg/mL，0.04 mg/mL，0.05 mg/mL系列標準溶液，測定溶液在357 nm處吸光度[7]，制作標準樣品吸光度工作曲線。

稱取待測凍干樣品加入10 mL乙醇溶解，測定吸光度，根據(jù)吸光度工作曲線確定脂質(zhì)體凍干中蘆丁總濃度，稱取相同質(zhì)量凍干樣品加入10 mL乙醇溶解，并經(jīng)過冷凍離心分離，稱取上清液，測定吸光度，確定脂質(zhì)體中游離蘆丁總濃度。

包封率E根據(jù)凍干中蘆丁總濃度C總與游離蘆丁濃度C游計算獲得，計算公式為：

E=(C總-C游)/C總×100%

2 結(jié)果與討論

2.1 醇脂比對蘆丁脂質(zhì)體凍干包封率影響

固定蘆丁的質(zhì)量為2 mg，卵磷脂質(zhì)量為100 mg，考察醇脂質(zhì)量比對樣品包封率影響，結(jié)果見表1。由表1知，蘆丁脂質(zhì)體凍干的包封率隨膽固醇含量的增加而增大，當(dāng)醇酯比為2:5時，所得蘆丁脂質(zhì)體凍干包封率達最高值46.3%，膽固醇作為表面活性劑，增加它的使用量，有利于提高脂質(zhì)體乳液的穩(wěn)定性，但是含量過高時，會造成脂質(zhì)體膜親水性增強，膜體發(fā)生破裂，從而影響其包封效果。

表1 醇脂比對樣品包封率的影響Table 1 The influence of alcohol fat ratio on the encapsulation efficiency of samples

2.2 藥脂比對蘆丁脂質(zhì)體凍干包封率影響

固定蘆丁使用量2 mg，膽固醇使用量40 mg時，考察藥脂比對樣品包封率影響，結(jié)果見表2。由表2知，樣品的包封率同樣隨卵磷脂含量的增加而增加，但是持續(xù)增加卵磷脂用量，會造成脂質(zhì)體聚集，穩(wěn)定性變差，發(fā)生滲漏，降低了脂質(zhì)體的包封率，同時增加卵磷脂用量也會造成試樣中蘆丁含量的相對降低，影響上清液中游離蘆丁的濃度，從而導(dǎo)致了測定包封率數(shù)值的下降。當(dāng)藥脂比為1:50時，所得蘆丁脂質(zhì)體凍干具有最大包封率。

表2 藥脂比對樣品包封率的影響Table 2 The effect of drug lipid ratio on the encapsulation efficiency of samples

2.3 脂質(zhì)體溶解性測試

將經(jīng)過上述工藝優(yōu)化處理的過量蘆丁脂質(zhì)體凍干分別溶于10 mL的PBS緩沖溶液(pH=6.5)、去離子水及無水乙醇溶液中，經(jīng)超聲分散20 min后，0.22 μm過濾膜過濾，所得濾液經(jīng)吸光度測定，確定濃度。按同樣方法采用蘆丁原料進行空白實驗，結(jié)果見表3，由表3可知，相對于未經(jīng)處理的蘆丁原料，蘆丁脂質(zhì)體凍干在三種不同溶液中的溶解性得到了明顯提升。相對于弱酸性緩沖溶液和乙醇溶液，其在中性去離子水中溶解度增加最為明顯。蘆丁通過脂質(zhì)體的包封作用，有效地改善了蘆丁的親水性能，促進了其在水中的分散，因此溶解度得到大幅度的上升。

表3 樣品在不同溶劑中的溶解度Table 3 Solubility of samples in different solvents

2.4 蘆丁脂質(zhì)體凍干穩(wěn)定性測試

優(yōu)化工藝得到的脂質(zhì)體凍干經(jīng)過4 ℃低溫保存，每隔10天，測定樣品的包封率，結(jié)果見表4，由表4可知，所制樣品經(jīng)過40天時間保存，仍具有很高的包封率，具備較好的穩(wěn)定性，可實現(xiàn)長期保存。

表4 樣品包封率隨時間變化結(jié)果Table 4 Results of sample encapsulation rate changing with time

3 結(jié) 論

采用冷凍干燥技術(shù)，制備了蘆丁脂質(zhì)體凍干，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)制備工藝為蘆丁2 mg，膽固醇40 mg，卵磷脂100 mg時，以甘露醇作為凍干劑，-40 ℃條件下冷凍干燥所制蘆丁脂質(zhì)體凍干具備最好的包封率，所制蘆丁凍干脂質(zhì)體具有很好的水溶性和穩(wěn)定性，便于長期保存和溶解使用。有利于蘆丁作為護膚用品成分的使用和存儲。