CA-1500全自動(dòng)血凝儀的分析性能評價(jià)

王茜

(四川省彭州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 彭州 611930)

國家醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可委員會(huì)及美國病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)要求，實(shí)驗(yàn)室在引入新的檢測系統(tǒng)時(shí)，必須對檢測系統(tǒng)的分析性能進(jìn)行評價(jià)。因此本研究對我院新購置的SYSMEX公司的CA-1500全自動(dòng)血凝儀進(jìn)行了較全面的性能評價(jià)。該儀器在進(jìn)行不同凝血項(xiàng)目檢測時(shí)，有凝固法、發(fā)色底物法、免疫比濁法等原理。故在對此進(jìn)行評價(jià)時(shí)，覆蓋了應(yīng)用不同的分析原理進(jìn)行檢測的項(xiàng)目。在應(yīng)用凝固法的分析項(xiàng)目中，除了評價(jià)其測定凝血常規(guī)項(xiàng)目血漿凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)含量、凝血酶時(shí)間(TT)等的分析性能外，還以凝血因子FⅧ活性作為代表對其它測定凝血因子的性能進(jìn)行了評價(jià)。又分別以抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)及D-二聚體(D-dimer)為代表，評價(jià)了該儀器在應(yīng)用發(fā)色底物法及免疫比濁法等原理時(shí)的分析性能。

1 材料與方法

1.1 試劑 由DADE BEHRING公司生產(chǎn)。包括正常水平定值質(zhì)控物(Control Plasma N)，批號(hào): 502796;異常水平定值質(zhì)控(Control Plasma P)，批號(hào):512622;標(biāo)準(zhǔn)人類血漿(SHP)，批號(hào):502504;DDimer定標(biāo)血漿(D-Dimer Standard Plasma)，批號(hào): 535815;PT測定試劑:(Thtomborel S)，批號(hào): 545148;APTT測定試劑(ACTIN)，批號(hào):537154; Cacl2，批號(hào):536887;FIB測定試劑:Thrombin Reagent，批號(hào):540261;TT測定試劑:Test Thrombin和配套緩沖液，批號(hào):544256;D-Dimer PLUS和配套緩沖液，批號(hào):37261;測定試劑Antithrombin III(A)，批號(hào):37216。

1.2 檢測方法 應(yīng)用CA-1500全自動(dòng)血凝儀進(jìn)行PT、APTT、FIB、TT及血漿凝血因子測定。原理為凝固法(散射光比濁法加百分比終點(diǎn)法)，即將血液凝固過程中的混濁度變化轉(zhuǎn)換成散射光的變化后進(jìn)行檢測;進(jìn)行AT-Ⅲ測定的原理為發(fā)色底物法;進(jìn)行DDimer、vWF測定的原理為免疫比濁法。

1.3 分析性能的評價(jià)

1.3.1 精密度 根據(jù)NCCLS EP15-A文件要求，用二個(gè)水平的質(zhì)控血漿分別進(jìn)行批內(nèi)和日間重復(fù)性試驗(yàn)，重復(fù)測定20次以及每天測定1次，連續(xù)測定20天。分別計(jì)算批內(nèi)和日間的均值()、標(biāo)準(zhǔn)差(SD)和變異系數(shù)(CV)［1，2］。

1.3.2 準(zhǔn)確度 使用兩個(gè)水平的定值質(zhì)控品分別測定各項(xiàng)目，測得結(jié)果必須符合試劑廠家提供的定值范圍。

1.3.3 線性評價(jià) 根據(jù)NCCLS EP6-P要求，選取一份接近預(yù)期上限的高值樣本(H)，分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋度重復(fù)測定3次，計(jì)算均值(偏離應(yīng)小于10%)，將測定均值與理論值作比較，計(jì)算y=ax+b，驗(yàn)證線性范圍［2］。要求:α值在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù) r≥0.99。

1.3.4 檢測下限 連續(xù)測定蒸餾水樣本(0水平) 10次，計(jì)算CV。

1.3.5 攜帶污染率 ①異常樣本對正常樣本的污染:將正常樣本置樣本架1和3位置，異常樣本置于2位置，每個(gè)樣本分別測定3次，記錄結(jié)果:N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。異常樣本對正常樣本的污染率(K1)=［N4-Mean(N1，N2，N3)］/Mean (N1，N2，N3)。②正常樣本對異常樣本的污染:將異常樣本置樣本架1和3位置，正常樣本置于2位置，每個(gè)樣本分別測定3次，記錄結(jié)果:A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。正常樣本對異常樣本的污染率(K2)=［A4-Mean(A1，A2，A3)］/Mean(A1，A2，A3)。

1.3.6 干擾試驗(yàn) 將干擾物質(zhì)(血紅蛋白、甘油三酯和直接膽紅素)加入正?；虍惓Ｑ獫{中作為實(shí)驗(yàn)樣本，而將標(biāo)本稀釋液(OVB)加入正?；虍惓Ｑ獫{中作為對照樣本。所有樣本均重復(fù)測定兩次，兩次測定結(jié)果偏差在10%以內(nèi)的數(shù)據(jù)可以用于計(jì)算影響度(%)=(實(shí)驗(yàn)樣本檢測值均值-對照樣本檢測值均值)/對照樣本檢測值均值×100。

2 結(jié)果

2.1 精密度 各項(xiàng)檢測的批內(nèi)精密度均小于1/ 4TEa，日間精密度均小于1/3TEa。符合美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修改法案'88(CLIA'88)可接受范圍，結(jié)果見表1。

表1 CA-1500全自動(dòng)血凝儀精密度評價(jià)結(jié)果

2.2 準(zhǔn)確度 實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)檢測的準(zhǔn)確度均符合 CLIA'88可接受范圍，結(jié)果見表2。

表2 CA-1500全自動(dòng)血凝儀準(zhǔn)確度

2.3 線性評價(jià) FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer的線性范圍分別在(0.60～5.96)g/L、22.5%～225.4%、15. 9%～158.8%及(241～2405)μg/L，線性良好，符合CLIA'88可接受范圍，結(jié)果見表3及圖1。

表3 CA-1500全自動(dòng)血凝儀的線性

圖1 CA-1500全自動(dòng)血凝儀的線性評價(jià)a:FIB;b:FⅧ:C;c:AT-Ⅲ;d:D-Dimer

2.4 變異系數(shù)及檢測下限 FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、DDimer的 CV 分 別 為 6.45%、6.79%、0.44%、4.04%，均小于20%，以上項(xiàng)目的檢測下限均為0，符合CLIA'88可接受范圍。

2.5 攜帶污染率 PT、APTT、FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ的k1均小于儀器標(biāo)定的范圍10%。PT、APTT、FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ的k2均小于儀器標(biāo)定的范圍10%。異常樣本對正常樣本的污染及正常樣本對異常樣本的污染結(jié)果見表4。

表4 CA-1500全自動(dòng)血凝儀的攜帶污染率

2.6 干擾試驗(yàn) 結(jié)果見表5～表7。在血紅蛋白濃度小于6.0 g/L、甘油三酯濃度小于5.640 mmol/L或直接膽紅素濃度小于374.0 μmol/L時(shí)，對PT、APTT、FIB三項(xiàng)測定的干擾均小于 10%，符合CLIA'88可接受范圍

表5 血紅蛋白對CA-1500全自動(dòng)血凝儀測定結(jié)果的干擾

表6 甘油三酯對CA-1500全自動(dòng)血凝儀測定結(jié)果的干擾

表7 直接膽紅素對CA-1500全自動(dòng)血凝儀測定結(jié)果的干擾

2 討論

本研究中，PT、APTT、TT、Fib、FⅧ:C、AT-Ⅲ及D-dimer檢測的批內(nèi)和日間精密度均滿足CLIA'88要求，即批內(nèi)精密度小于1/4TEa，而日間精密度小于1/3TEa。受質(zhì)控品的限制，未進(jìn)行異常水平TT的日間精密度評價(jià)，而異常水平TT的批內(nèi)精密度評價(jià)選用的樣本為混合血漿，而非質(zhì)控品。

由于受凝血檢測缺乏參考血漿的限制，無法用參考血漿評價(jià)本儀器的準(zhǔn)確度。而PT、APTT和TT等項(xiàng)目是對時(shí)間進(jìn)行測定，也無法應(yīng)用回收試驗(yàn)來評價(jià)儀器的準(zhǔn)確度。故本研究中選擇定值質(zhì)控品來評價(jià)其準(zhǔn)確度，只能反映本儀器的檢測結(jié)果是否符合在SYSMEX CA系列儀器上使用DADE BEHRING試劑進(jìn)行檢測的要求。

因PT、APTT、TT等項(xiàng)目的測定結(jié)果為時(shí)間，不能進(jìn)行線性評價(jià)。本研究僅對FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer做了線性評價(jià)。FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer分別在(0.60～5.96)g/L，22.5% ～225.4%、15.9%～158.8%及(241～2405)μg/L的線性良好。同時(shí)，因該儀器具有自動(dòng)稀釋功能，在進(jìn)行FIB的檢測時(shí)，可以增加或減少稀釋倍數(shù)，因此可認(rèn)為FIB的線性范圍可達(dá)到0.3～11.92 g/L，覆蓋了有臨床意義的濃度范圍。

因?yàn)楦邼舛葮颖緦Φ蜐舛葮颖镜奈廴靖?，所以很多研究在分析攜帶污染率時(shí)，只分析高值標(biāo)本對低值標(biāo)本的污染。而考慮到凝血檢測異?？赡苁且?yàn)閰⑴c凝血物質(zhì)濃度低或者抗凝物質(zhì)的存在，本研究設(shè)計(jì)了兩個(gè)方面的污染率，即異常標(biāo)本對正常標(biāo)本的污染和正常標(biāo)本對異常標(biāo)本的污染。

本研究中，在血紅蛋白濃度小于6.0 g/L、甘油三酯濃度小于5.640mmol/L或直接膽紅素濃度小于374μmol/L時(shí)，對PT、APTT、FIB的干擾均小于10%?？烧J(rèn)為這些濃度的干擾物質(zhì)對測定結(jié)果無影響，該儀器具有一定的抗干擾能力。但本儀器測定時(shí)采用的是散射光比濁法，由于方法學(xué)本身的局限性，更高濃度的干擾物存在時(shí)，會(huì)對結(jié)果有較大影響。對于嚴(yán)重溶血標(biāo)本，除了考慮血紅蛋白對測定結(jié)果影響之外，還應(yīng)考慮到凝血因子的激活或消耗對結(jié)果的影響，應(yīng)重新采血;直接膽紅素濃度大于374μmol/L的標(biāo)本在我院臨床標(biāo)本中所占比例＜0.1%，其抗直接膽紅素干擾的能力可滿足臨床需求;甘油三酯濃度大于5.640 mmol/L的標(biāo)本在我院臨床標(biāo)本中所占比例約為1%，對高甘油三酯標(biāo)本應(yīng)采用高速離心后分離血漿的方法，以期消除干擾。

綜上所述，SYSMEX公司的CA-1500全自動(dòng)血凝儀具備良好的分析性能，符合臨床要求，可以應(yīng)用于患者標(biāo)本的檢測。

［1］National committee for clinical laboratory standards.Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices:Tentative guideline［S］.2nd edition.Document EP 52A.Wayne，Pa NCCLS，1999.

［2］Clinical laboratory improvements amendments of 1988 final rule.Laboratory requirements［J］.Federal Register Februaty，1992，57: 7002-7288.

［3］National committee for clinical laboratory standards.Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods:Proposed guideline［S］.Document EP 6-P.Wayne，Pa NCCLS，1986.