大蒜素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抑制作用及機(jī)制

李鴻洋,李敬雙,高泉頎,于 洋,*

(1.錦州醫(yī)科大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧錦州 121000;2.錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,遼寧錦州 121000)

炎癥是機(jī)體對(duì)各種致炎因子所產(chǎn)生的防御反應(yīng)。炎癥表現(xiàn)為對(duì)機(jī)體的保護(hù)作用,但過(guò)度和持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)對(duì)機(jī)體造成傷害。隨著近年來(lái)對(duì)天然抗炎藥物的深入研究,越來(lái)越多天然藥物的抗炎作用獲得認(rèn)可。探索具有抗炎活性的天然產(chǎn)物以改善或治愈炎癥已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。

大蒜(AlliumsativumL.)為百合科(Liliaceae)蔥屬(Allium),二年生草本植物。大蒜營(yíng)養(yǎng)豐富,嫩苗、花莖和鱗莖均可食用,用途廣泛,加工產(chǎn)品種類多樣,在國(guó)際貿(mào)易市場(chǎng)上占有重要地位,也是我國(guó)重要的出口創(chuàng)匯蔬菜[1]。大蒜素是大蒜中含硫有機(jī)化合物的主要有效成分,化學(xué)名為二烯丙基三硫化物,其分子式為C6H9S3[2]。研究表明,大蒜素具有多種藥理學(xué)作用,例如抗癌[3]、抗炎[4]、抗菌[5]、抗氧化作用等[6]。

Wang等[7]研究結(jié)果表明,大蒜素通過(guò)PI3K/AKT途徑改善氧化應(yīng)激、炎癥和凋亡,從而減輕LPS誘導(dǎo)的新生大鼠急性肺損傷(ALI)。大蒜素可用于開(kāi)發(fā)治療ALI的新藥。Zhang等[8]通過(guò)大蒜素對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)血管氧化應(yīng)激和炎癥的影響及作用機(jī)制,發(fā)現(xiàn)大蒜素能夠減弱LPS誘導(dǎo)的血管炎癥反應(yīng)。任亮等[9]通過(guò)大蒜素對(duì)模型小鼠抗炎作用的研究,發(fā)現(xiàn)大蒜素具有一定的抗炎作用。姜云傳[10]通過(guò)大蒜素抑制小膠質(zhì)細(xì)胞抗炎作用的研究,發(fā)現(xiàn)大蒜素可能通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化和釋放細(xì)胞因子白介素1β(IL-1β)等來(lái)發(fā)揮抗炎作用。已有研究表明,大蒜素具有抗炎作用,但有關(guān)大蒜素抗炎作用機(jī)制尚不明確,需要進(jìn)一步探討研究。

為進(jìn)一步明確大蒜素的抗炎作用及其機(jī)制,本研究以LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞為體外炎癥模型,在基因和蛋白水平上觀察大蒜素對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬炎癥因子COX-2、NO、IL-6的影響,并以地塞米松作為陽(yáng)性對(duì)照,探討其抗炎的活性及作用機(jī)制,以期為大蒜素在臨床抗炎藥效的開(kāi)發(fā)和利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

健康SPF級(jí)雄性Balb/c小鼠 體重(25±3) g,6～8周齡,購(gòu)于錦州醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)研究院,生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(遼)2014-0004;大蒜素 批號(hào):J25J9S64201,純度:UV≥98%,上海源葉生物科技有限公司;新生牛血清 浙江天杭生物科技有限公司;脂多糖(LPS)、甲基咪唑藍(lán)(MTT)、臺(tái)盼藍(lán)、中性紅、RPMI-1640培養(yǎng)基、二甲基亞砜(DMSO)、COX-2、IL-6、NO檢測(cè)試劑盒 北京索萊寶科技有限公司;地塞米松 上海聯(lián)碩生物科技有限公司;PrimeScriptTMRT reagent Kit、TB GreenTMPremix Ex TaqTMⅡ、引物 大連寶生物科技有限公司;Trizol(R0016)、BCA蛋白定量試劑盒 碧云天生物技術(shù)有限公司;COX-2、IL-6、iNOS抗體 萬(wàn)類生物科技有限公司;NF-κB p65、Phospho-NF-κB p65 Cell Signaling Technology(CST)公司;β-actin抗體 武漢博士德生物工程有限公司。

CKX41S型倒置顯微鏡 日本 Olympus公司;HBS-1096A型酶標(biāo)儀 南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;Mastercyler ep realplex4型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、AG 22331 Hamburg型PCR擴(kuò)增儀 德國(guó)Eppendorf公司;Amersham Imager 600全自動(dòng)成像分析系統(tǒng) GE。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 小鼠飼養(yǎng)于環(huán)境溫度(20±2) ℃,濕度50%±10%,按照12 h光照/12 h黑暗,自由攝食、飲水的飼養(yǎng)條件喂養(yǎng),實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。頸椎脫臼法處死小鼠,75%乙醇浸泡3 min,將5 mL預(yù)冷的PBS注入腹腔,輕按摩腹部約2 min,靜置5 min,抽取腹腔液,于2000 r/min、4 ℃離心5 min,棄上清。將細(xì)胞沉淀在紅細(xì)胞裂解液中稀釋(4 mL/小鼠),在室溫下孵育5 min,然后于2000 r/min、4 ℃離心5 min,棄上清。將細(xì)胞沉淀懸浮于RPMI-1640完全培養(yǎng)基,計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞至所需濃度。于37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱孵育18 h至完全貼壁,吸棄上清,去掉未貼壁細(xì)胞,加入新鮮的RPMI 1640完全培養(yǎng)基,即得到純化的腹腔巨噬細(xì)胞[11]。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理 實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、LPS組、LPS+地塞米松組、LPS+不同濃度的大蒜素處理組,每組均設(shè)5復(fù)孔。正常對(duì)照組:不做任何處理,正常培養(yǎng)24 h;LPS組:每孔加入終濃度為1 μg/mL的LPS;LPS+地塞米松組:每孔先加入終濃度為100 μg/mL的地塞米松對(duì)細(xì)胞預(yù)處理2.5 h,再加入終濃度為1 μg/mL的LPS刺激細(xì)胞;LPS+不同濃度的大蒜素處理組:每孔先加入不同濃度(40、80、160 μg/mL)的大蒜素對(duì)細(xì)胞預(yù)處理2.5 h,再加入終濃度為1 μg/mL的LPS刺激細(xì)胞。

1.2.3 細(xì)胞活力測(cè)定 參考Liu等[12]實(shí)驗(yàn)方法,采用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞活力。細(xì)胞按5×103cell/mL接種于96孔板,按照1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及處理,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)24 h。除去培養(yǎng)基后,每孔加入5 mg/mL的MTT 20 μL,避光孵育4 h,吸棄培養(yǎng)基,每孔加入150 μL DMSO,振蕩10 min使紫色沉淀充分溶解,酶標(biāo)儀于570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。

細(xì)胞活力(%)=(實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對(duì)照組吸光度值)×100

1.2.4 中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能 參考甄慶潔等[13]實(shí)驗(yàn)方法,細(xì)胞按1×105cell/mL接種于96孔板,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)18 h,按照1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及處理,培養(yǎng)24 h,棄上清,加100 μL的中性紅溶液(生理鹽水溶解,1 g/L),孵育30 min后,用預(yù)冷的PBS清洗3次,每孔加入細(xì)胞裂解液100 μL,4 ℃裂解12 h,酶標(biāo)儀于570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。

1.2.5 Griess法檢測(cè)NO的含量 參考杭宜嶺等[14]實(shí)驗(yàn)方法,細(xì)胞按2×106cell/mL接種于24孔板,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)18 h,按照1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及處理,培養(yǎng)24 h,于4 ℃ 3000 r/min離心20 min,收集細(xì)胞上清液,每組均設(shè)5個(gè)復(fù)孔,按照NO檢測(cè)試劑盒,酶標(biāo)儀于450 nm處測(cè)定細(xì)胞上清液中NO的含量。

1.2.6 ELISA法檢測(cè)炎癥因子COX-2酶活性和IL-6的含量 參考Lee等[15]實(shí)驗(yàn)方法,細(xì)胞按2×106cell/mL接種于24孔板,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)18 h,按照1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及處理,培養(yǎng)24 h,于4 ℃ 3000 r/min離心10 min,收集細(xì)胞上清液,每組均設(shè)5復(fù)孔,按照ELISA檢測(cè)試劑盒操作,酶標(biāo)儀于450 nm處測(cè)定OD值并計(jì)算炎癥因子COX-2酶活性和IL-6的含量。

1.2.7 Real-time PCR法檢測(cè)基因COX-2、iNOS和IL-6 mRNA表達(dá) 參考Pan等[16]實(shí)驗(yàn)方法,細(xì)胞按1×106cell/mL接種于12孔板,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)18 h;按照1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及處理,培養(yǎng)24 h,棄上清,用預(yù)冷的PBS清洗2次,采用Trizol法提取細(xì)胞總RNA。按照PrimeScriptTMRT reagent Kit 試劑盒進(jìn)行操作,將1 μg的總RNA反轉(zhuǎn)錄成CDNA。根據(jù) NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)查詢得到相關(guān)基因序列,采用Primer 6引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物如表1。

表1 小鼠COX-2、iNOS、IL-6和內(nèi)參ACTB引物序列Table 1 COX-2,iNOS,and IL-6 of mouse and internal reference ACTB primer sequences in the experiment

按照TB GreenTMPremix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)試劑盒的說(shuō)明配制反應(yīng)體系:2×TB Green Premix Ex Taq II 12.5 μL,特異性引物F和R(終濃度為0.4 μmol/L)各1 μL,cDNA 2 μL,滅菌水8.5 μL,共25 μL,混合均勻,進(jìn)行Real time PCR反應(yīng),按照擴(kuò)增試劑盒的程序設(shè)置為預(yù)變性95 ℃ 30 s,變性95 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s退火,40個(gè)循環(huán)。以β-肌動(dòng)蛋白(ACTB)作為內(nèi)參,采用 2-ΔΔCt方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.8 Western Blot法檢測(cè)COX-2、iNOS和IL-6及P65的總體及磷酸化水平 參考Oh等[17]實(shí)驗(yàn)方法,細(xì)胞按2×108cell/mL接種于6孔板,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)18 h;按照1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及處理,培養(yǎng)24 h,棄上清。用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞,然后在冰上用RIPA強(qiáng)裂解緩沖液提取總蛋白,并用BCA法進(jìn)行蛋白定量,煮沸備用。用10%的SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白,并在300 mA 60 min條件下轉(zhuǎn)至PVDF膜上,用含5%脫脂奶粉的TBST緩沖液室溫封閉2 h,并用TBST洗滌5 min,4 ℃條件下一抗(COX-2、iNOS、IL-6、p-p65、p65和β-actin)孵育過(guò)夜,并用TBST洗滌3次后室溫下辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記過(guò)的羊抗兔孵育1 h。TBST洗膜3次,ECL發(fā)光顯影液曝光膠片,曝光成像后,運(yùn)用Image J軟件進(jìn)行灰度分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 大蒜素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活力的影響

由圖1可知,MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,大蒜素在40、80、160 μg/mL三個(gè)濃度劑量下,單獨(dú)作用或與1 μg/mL LPS共同處理24 h后均未對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)造成顯著影響(P>0.05)。因此,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中采用1 μg/mL LPS作為刺激濃度,并選取40～160 μg/mL濃度范圍作為大蒜素的處理濃度。

圖1 大蒜素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活力的影響Fig.1 Effect of allicin on the cell viability of mouse peritoneal macrophages

2.2 大蒜素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的影響

由圖2可知,通過(guò)中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)法,檢測(cè)大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響,當(dāng)1 μg/mL LPS刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞時(shí),與正常對(duì)照組比較,LPS組巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力極顯著增加(P<0.01),表明LPS能增加巨噬細(xì)胞吞噬功能。與LPS組比較,大蒜素處理組和地塞米松組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力增加,其中大蒜素(40 μg/mL)處理組與LPS組之間比較差異不顯著(P>0.05),其他各處理組均極顯著高于LPS組(P<0.01),且呈良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,表明大蒜素能有效的激活小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,從而增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力。

圖2 大蒜素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中性紅吞噬能力的影響Fig.2 The effect of allicin on neutral red phagocytic capacity of mouse peritoneal macrophages注:與正常對(duì)照組比較,##表示差異極顯著P<0.01;與LPS組比較,*表示差異顯著P<0.05,**表示差異極顯著P<0.01;圖2～圖8、圖10～圖12同。

2.3 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生COX-2酶活性、NO和IL-6分泌的影響

在體外細(xì)胞炎癥模型制作中,LPS是最主要、作用最強(qiáng)的促炎手段[18]。在炎性因素影響下COX-2及其產(chǎn)物前列腺素E2(PGE2)可被迅速誘導(dǎo)合成,促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展[18]。一氧化氮(NO)是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子,在炎癥的各個(gè)階段均有產(chǎn)生[19]。小鼠腹腔巨噬細(xì)胞在LPS的誘導(dǎo)下釋放大量的促炎因子,如IL-6的累積會(huì)加劇炎癥反應(yīng)進(jìn)程。

由圖3～圖5可知,當(dāng)用1 μg/mL的LPS刺激細(xì)胞時(shí),與正常對(duì)照組比較,LPS組的COX-2酶活性、NO和IL-6分泌極顯著增加(P<0.01),說(shuō)明LPS刺激腹腔巨噬細(xì)胞造模成功。與LPS組比較,地塞米松處理組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2酶活性與NO和IL-6的分泌極顯著降低(P<0.01);大蒜素40 μg/mL濃度組與LPS組比較COX-2酶活性、NO和IL-6分泌顯著降低(P<0.05),其他各處理組與LPS組比較均極顯著降低(P<0.01),且在大蒜素濃度為160 μg/mL時(shí),NO和COX-2的抑制活性高于地塞米松組,但差異不顯著(P>0.05)。

圖3 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中COX-2酶活性的影響Fig.3 Effect of allicin on COX-2 enzyme activity of LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖4 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中NO分泌的影響Fig.4 Effect of allicin on NO secretion of LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖5 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中IL-6分泌的影響Fig.5 The effect of allicin on IL-6 secretion of LPS-induced mouse peritoneal macrophages

2.4 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2、iNOS和IL-6 mRNA表達(dá)的影響

在病理狀態(tài)下,NO可以通過(guò)NO/cGMP路徑上調(diào)COX-2的表達(dá),NO由誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)經(jīng)一系列氧化還原反應(yīng)生成,在由LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥中,誘導(dǎo)型iNOS表達(dá)增高由iNOS衍生的過(guò)量NO誘導(dǎo)的硝化應(yīng)激會(huì)引起過(guò)度炎癥反應(yīng),加重炎癥的發(fā)生[20]。同時(shí),COX-2也促進(jìn)iNOS的表達(dá),共同參與炎癥的發(fā)生、發(fā)展[21]。IL-6原被確定為B細(xì)胞生長(zhǎng)因子[22],IL-6在急性炎癥反應(yīng)中的作用主要表現(xiàn)為對(duì)多種細(xì)胞的促炎作用和誘導(dǎo)肝組織產(chǎn)生急性反應(yīng)蛋白。

由圖6、圖8可知,小鼠腹腔巨噬細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后,與正常對(duì)照組比較,LPS能極顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2和IL-6 mRNA的表達(dá)(P<0.01)。與LPS組比較,大蒜素(40 μg/mL)處理組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2和IL-6 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P<0.05),其他各處理組COX-2和IL-6 mRNA表達(dá)水平均極顯著降低(P<0.01),且大蒜素濃度為160 μg/mL組對(duì)IL-6 mRNA轉(zhuǎn)錄抑制作用高于地塞米松組,但差異不顯著(P>0.05)。由圖7可知,LPS能極顯著提高iNOS mRNA表達(dá)(P<0.01),大蒜素和地塞米松處理后均能極顯著降低LPS誘導(dǎo)的iNOS mRNA 表達(dá)(P<0.01)。結(jié)果表明,大蒜素在LPS刺激的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中可以發(fā)揮保護(hù)和抑制作用。

圖6 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中COX-2 mRNA表達(dá)水平的影響Fig.6 Effect of allicin on the mRNA expression level of COX-2 in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖7 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中iNOS mRNA表達(dá)水平的影響Fig.7 Effect of allicin on the mRNA expression level of iNOS in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖8 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中IL-6 mRNA表達(dá)水平的影響Fig.8 Effect of allicin on the mRNA expression level of IL-6 in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

2.5 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2、iNOS和IL-6蛋白表達(dá)以及NF-κB p65磷酸化的影響

NF-κB是LPS刺激的反應(yīng)中至關(guān)重要的下游信號(hào)途徑,與腫瘤的生長(zhǎng)和炎癥有關(guān)[23]。NF-κB是真核細(xì)胞中的典型轉(zhuǎn)錄因子,參與炎癥、免疫反應(yīng)和抗凋亡機(jī)制,炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生受NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié),LPS能誘導(dǎo)NF-κB信號(hào)通路的激活[24]。當(dāng)NF-κB被激活時(shí),活性的P65被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中以結(jié)合到促炎基因,這可以觸發(fā)在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng),如促炎性酶如COX-2、iNOS及促炎細(xì)胞因子IL-6。

由圖10可知,與正常對(duì)照組比較,LPS組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2蛋白表達(dá)極顯著增加(P<0.01),表明LPS刺激巨噬細(xì)胞造模成功。與LPS組比較,大蒜素處理組和地塞米松組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2蛋白表達(dá)均顯著降低,并隨著大蒜素濃度的增加,COX-2蛋白表達(dá)逐漸降低,其中大蒜素(40 μg/mL)處理組與LPS組比較差距顯著(P<0.05),其他各處理組及地塞米松組均極顯著低于LPS組(P<0.01)。由圖11～圖13可知,LPS組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞iNOS和IL-6的蛋白表達(dá)以及NF-κB p65磷酸化程度均極顯著增加(P<0.01)。大蒜素各處理組與地塞米松組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞iNOS和IL-6的蛋白表達(dá)以及NF-κB p65磷酸化程度均極顯著降低(P<0.01),且都呈濃度依賴性。結(jié)果表明,大蒜素和地塞米松均能夠顯著抑制炎癥因子COX-2、iNOS和IL-6的蛋白表達(dá),也能顯著抑制NF-κB p65發(fā)生磷酸化作用,抑制NF-κB信號(hào)通路的激活。

圖9 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中COX-2、iNOS、IL-6、P-P65和P65影響的蛋白表達(dá)電泳圖Fig.9 Electrophoresis of allicin on the protein expression COX-2,iNOS,IL-6,P-P65 and P65 in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖10 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中COX-2蛋白表達(dá)的影響Fig.10 Effect of allicin on the protein expression COX-2 in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖11 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中iNOS蛋白表達(dá)的影響Fig.11 Effect of allicin on the protein expression iNOS in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖12 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中IL-6蛋白表達(dá)的影響Fig.12 Effect of allicin on the protein expression IL-6 in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

圖13 大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中NF-κB p65磷酸化的影響Fig.13 Effect of allicin on NF-κB p65 Phosphorylation in LPS-induced mouse peritoneal macrophages

3 結(jié)論

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),大蒜素作用于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,在一定劑量范圍內(nèi),MTT測(cè)定證實(shí)其無(wú)細(xì)胞毒性;中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)表明大蒜素能提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力;通過(guò)檢測(cè)大蒜素作用后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的COX-2酶活性與NO和IL-6分泌降低,證實(shí)大蒜素具有抑制COX-2酶活性與NO和IL-6分泌的作用。同時(shí)大蒜素還能顯著抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞COX-2、iNOS和IL-6 mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá),顯著抑制NF-κB p65信號(hào)通路的磷酸化。表明大蒜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的抗炎作用可能是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路激活途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。因此,本研究結(jié)果初步表明,大蒜素可能是治療與巨噬細(xì)胞過(guò)度活化有關(guān)的各種炎性疾病的潛在藥物。