痰液及血清中單核細(xì)胞趨化因子蛋白、白介素-35表達(dá)在肺結(jié)核患者檢測(cè)中的臨床意義

謝 巍，涂 宏

(四川省遂寧市中心醫(yī)院，a.感染性疾病科；b.心血管三病區(qū)，四川 遂寧 629000)

肺結(jié)核(pulmonary tuberculosis，PT)系指由結(jié)核分枝桿菌所致的慢性傳染病，人群普遍易感，病程長(zhǎng)且病情較為復(fù)雜，病機(jī)與細(xì)胞因子或免疫調(diào)節(jié)等密切相關(guān)，目前PT在全球范圍內(nèi)廣泛流行，成為危害人類生命健康的常見疾病之一[1]，近年來隨著PT患者耐藥現(xiàn)象的普遍，全球結(jié)核病疫情進(jìn)一步加重，使得PT早期預(yù)測(cè)和早期防治成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)[2]，結(jié)核病的病情發(fā)展不僅取決于結(jié)核分枝桿菌致病力的大小，且與機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)減弱密切相關(guān)，此外文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)核分枝桿菌感染至肺部會(huì)導(dǎo)致單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在感染部位聚集，引發(fā)肺部炎癥、纖維化以及肉芽腫等的形成[3]，因而通過檢測(cè)PT患者血清或痰液中相關(guān)因子水平或?qū)膊☆A(yù)測(cè)有積極作用。白介素-35(IL-35)在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能以及抗炎癥反應(yīng)等過程中起到重要的作用[4]，單核細(xì)胞趨化因子蛋白(MCP-1)屬于一種重要的單核細(xì)胞趨化及激活因子[5]。目前關(guān)于兩者在PT患者痰液細(xì)胞和血清中表達(dá)水平及其臨床意義的研究依然較少。本文探討PT患者痰液細(xì)胞和血清中MCP-1及IL-35水平變化及意義，旨在為PT病情預(yù)測(cè)提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2016年7月至2019年7月本院收治的106例PT患者(疾病組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》[6]有關(guān)PT診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)痰涂片檢查、結(jié)核菌素試驗(yàn)以及X射線檢查確診；②臨床資料完善；③未合并其他類型傳染病或肺部疾??；④健康體檢者要求身體健康、既往無肺部疾病史、不存在免疫性疾病或炎性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在肝、腎、心等重要臟器功能障礙；②存在免疫系統(tǒng)疾??；③合并惡性腫瘤。疾病組依據(jù)隨訪資料分為疾病活動(dòng)組(活動(dòng)性肺結(jié)核，n=63)、疾病穩(wěn)定組(穩(wěn)定期肺結(jié)核，n=43)，同期收治的35例肺疾病患者(排除存在器質(zhì)性病變者)為對(duì)照組。疾病活動(dòng)組男41例，女22例，年齡11～60歲[(31.06±3.95)歲]；疾病穩(wěn)定組男29例，女14例，年齡10～59歲[(30.99±4.02)歲]；對(duì)照組男22例，女13例，年齡21～59歲[(41.23±4.01)歲]。三組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。

1.2 方法①分組方法：結(jié)核桿菌不復(fù)制或復(fù)制量很少，肺結(jié)核病灶無活動(dòng)、空洞閉合，痰菌連續(xù)陰性(每月至少檢查一次)均>大于6個(gè)月為肺結(jié)核穩(wěn)定期；存在發(fā)熱、咳嗽、咳痰、咯血或呼吸困難等癥狀且痰中查及結(jié)核菌，血沉增快，CT檢查提示兩上肺片狀滲出影或有空洞為肺結(jié)核活動(dòng)期。②標(biāo)本采集：采集晨起痰液并放置在無菌螺旋蓋痰瓶中，1500 r/min離心15 min后，上清液放置在低溫處保存待測(cè)，林格液沖洗沉淀物1次后進(jìn)行細(xì)胞涂片，吉姆薩染色法對(duì)涂片進(jìn)行染色，計(jì)算痰液中單核巨噬細(xì)胞總數(shù)，確保三組痰液回收量無明顯差異；痰液采集當(dāng)日收集所有對(duì)象的晨起空腹外周肘靜脈血5 ml，常規(guī)離心分離血清留存待測(cè)。③痰液細(xì)胞和血清中MCP-1及IL-35水平檢測(cè)：酶聯(lián)免疫吸附法(試劑盒及儀器由上海西唐生物科技有限公司提供，其中MCP-1試劑盒型號(hào)為DCP00，IL-35試劑盒型號(hào)為BMS2017)測(cè)定三組痰液細(xì)胞和血清中MCP-1及IL-35水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析及SNK-q檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 疾病組、對(duì)照組痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平比較疾病組痰液細(xì)胞、血清中MCP-1表達(dá)水平高于對(duì)照組，IL-35表達(dá)水平低于對(duì)照組 (P<0.05)，且疾病組痰液細(xì)胞中MCP-1及IL-35表達(dá)水平高于血清中的水平(t=37.894、295.632，P<0.001)，見表1。

表1 疾病組、對(duì)照組痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)情況比較

2.2 不同年齡、性別的PT患者痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平比較不同年齡、性別的PT患者痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，見表2。

表2 不同年齡、性別的PT患者痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平比較

2.3 不同病情程度PT患者痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平比較疾病活動(dòng)組痰液細(xì)胞、血清中MCP-1水平明顯高于疾病穩(wěn)定組，而痰液細(xì)胞、血清中IL-35表達(dá)水平明顯低于疾病穩(wěn)定組(P<0.05)；相關(guān)性分析顯示PT患者病情程度與痰液細(xì)胞、血清中MCP-1水平呈明顯的正相關(guān)(r=0.521、0.741，P<0.05)，但與痰液細(xì)胞、血清中IL-35水平呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.851、-0.980，P<0.05)。見表3和圖1，圖2。

表3 不同病情程度PT患者痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平比較

圖1 PT病情程度與MCP-1水平的關(guān)系 a.痰液細(xì)胞中；b.血清中

圖2 PT病情程度與IL-35水平的關(guān)系 a.痰液細(xì)胞中；b.血清中

2.4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表達(dá)在PT病情診斷中的價(jià)值分析痰液及血清中MCP-1、IL-35聯(lián)合檢測(cè)診斷PT病情程度的靈敏度和準(zhǔn)確度各為97.67%、94.34%，較痰液、血清MCP-1、IL-35各自檢測(cè)診斷的靈敏度(81.40%、72.09%)、準(zhǔn)確度(84.91%、79.25%)明顯高，見表4。

3 討論

PT為呼吸道常見傳染病，我國為結(jié)核病流行最為嚴(yán)重的國家之一，年發(fā)病人數(shù)約為130萬，占全球總發(fā)病率的14.3%，近年來隨著國內(nèi)對(duì)肺結(jié)核患者管理的松懈，導(dǎo)致耐藥PT患者日益增多，使得PT患者的臨床治療面臨著較大挑戰(zhàn)，PT早期診治成為臨床研究的重點(diǎn)[7]。近年來有研究[8]指出結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸與機(jī)體免疫功能降低有關(guān)，其中IL-35作為新發(fā)現(xiàn)的炎性抑制因子，其可抑制效應(yīng)性T細(xì)胞并擴(kuò)增調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，負(fù)向調(diào)節(jié)機(jī)體的自身免疫反應(yīng)以及慢性炎癥性反應(yīng)，文獻(xiàn)[9]報(bào)道IL-35可對(duì)自身免疫性糖尿病進(jìn)行長(zhǎng)效防護(hù)，體外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)同樣證實(shí)IL-35可有效增加機(jī)體的IL-10因子的分泌，明顯抑制IFN-γ的產(chǎn)生，有效改善機(jī)體炎性癥狀[10]，而對(duì)其在PT疾病進(jìn)展中是否發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用尚未可知；MCP-1為趨化因子亞家族，其可吸引白細(xì)胞亞型至機(jī)體的炎性部位，在免疫反應(yīng)中有重要調(diào)節(jié)作用，有研究[11]指出炎性部位的單核或巨噬細(xì)胞等，在結(jié)核分枝桿菌和其毒素作用下分泌MCP-1，并促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生炎性反應(yīng)，加劇病情進(jìn)展。一直以來臨床上主要通過檢測(cè)PT患者血清中相關(guān)因子水平以評(píng)估疾病，而飛沫作為PT疾病傳播的主要途徑，考慮PT患者痰液中相關(guān)因子表達(dá)水平在PT病情預(yù)測(cè)中也有一定價(jià)值。

表4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表達(dá)在PT病情診斷中的價(jià)值分析

本次分析結(jié)果顯示，疾病組痰液細(xì)胞、血清中MCP-1表達(dá)水平較對(duì)照組明顯高，IL-35表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，且疾病組痰液細(xì)胞中MCP-1及IL-35表達(dá)水平均明顯高于血清中的水平，PT發(fā)病過程中因感染結(jié)核分枝桿菌會(huì)引發(fā)機(jī)體局部損傷，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞等被過度激活，導(dǎo)致大量的炎性因子被釋放，因而痰液細(xì)胞和血清中MCP-1水平明顯升高[12]，此外PT病理過程中機(jī)體免疫功能受損，因而痰液細(xì)胞和血清中IL-35水平明顯降低，此外本分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)痰液細(xì)胞中MCP-1、IL-35水平明顯高于血清，提示痰液細(xì)胞中MCP-1、IL-35水平異常表達(dá)較血清中更為靈敏。本分析結(jié)果還顯示，不同年齡、性別的PT患者痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平無明顯差異，提示PT患者的性別、年齡等對(duì)痰液細(xì)胞、血清中MCP-1及IL-35表達(dá)水平以及病情進(jìn)展的影響不大；進(jìn)一步分析結(jié)果顯示，疾病活動(dòng)組痰液細(xì)胞、血清中MCP-1水平明顯高于疾病穩(wěn)定組，痰液細(xì)胞、血清中IL-35表達(dá)水平明顯低于疾病穩(wěn)定組，且相關(guān)性分析顯示PT患者病情程度與痰液細(xì)胞、血清中MCP-1水平呈明顯的正相關(guān)，但與痰液細(xì)胞、血清中IL-35水平呈明顯的負(fù)相關(guān)，由此說明痰液細(xì)胞、血清中MCP-1、IL-35表達(dá)水平與PT患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，兩者均可反映PT的病情程度；研究[13]發(fā)現(xiàn)，IL-35為白介素12的家族成員，可表達(dá)于多種細(xì)胞中，與Treg關(guān)系緊密，能夠抑制人效應(yīng)性T細(xì)胞功能，此外在調(diào)節(jié)Th1、Th17等輔助性T細(xì)胞中有顯著作用，而隨著PT患者病情嚴(yán)重程度加重，機(jī)體免疫功能受損更為明顯，因此IL-35水平隨之顯著降低；在PT疾病活動(dòng)期會(huì)出現(xiàn)急性炎性反應(yīng)，機(jī)體內(nèi)單核/巨噬細(xì)胞總數(shù)隨之明顯增高，由之分泌的MCP-1水平也顯著增高[14]，相較于穩(wěn)定期明顯高，因此痰液細(xì)胞、血清中MCP-1水平可有效預(yù)測(cè)PT病情的嚴(yán)重程度，而具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。另外，本結(jié)果顯示痰液及血清中MCP-1、IL-35聯(lián)合檢測(cè)診斷PT病情程度的靈敏度和準(zhǔn)確度各為97.67%、94.34%，較痰液、血清MCP-1、IL-35各自檢測(cè)診斷的靈敏度(81.40%、72.09%)、準(zhǔn)確度(84.91%、79.25%)明顯高，說明痰液及血清中MCP-1、IL-35聯(lián)合檢測(cè)有望提高PT病情程度診斷價(jià)值。

基于以上分析，PT患者病情嚴(yán)重程度與痰液細(xì)胞、血清中MCP-1、IL-35表達(dá)水平密切相關(guān)，為PT早期病情監(jiān)測(cè)提供理論依據(jù)。但本研究為回顧性分析且樣本量較少，研究結(jié)果或存在一定偏倚，未來進(jìn)一步開展大樣本量、多中心前瞻性研究。