副溶血弧菌耐藥性及其產(chǎn)生機(jī)制

王艷芬

【摘 要】 副溶血弧菌是目前世界很多國(guó)家和地區(qū)食源性疾病的主要致病菌，由于抗生素的不規(guī)范使用，副溶血弧菌的耐藥問題日益突出，給相關(guān)疾病的臨床治療帶來巨大挑戰(zhàn)。本文簡(jiǎn)要闡述了副溶血弧菌的耐藥現(xiàn)狀，在此基礎(chǔ)上，對(duì)其耐藥性的產(chǎn)生機(jī)制主要是獲得耐藥的產(chǎn)生機(jī)制進(jìn)行了分析探討。

【關(guān)鍵詞】 副溶血弧菌;耐藥性;耐藥機(jī)制

【中圖分類號(hào)】 R541 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】B ? 【文章編號(hào)】1005-0019（2020）17-232-02 ?副溶血弧菌是一種嗜鹽性的革蘭陰性菌，廣泛存在于水體、水底沉積物和水生動(dòng)物體內(nèi)。食用副溶血弧菌污染的水產(chǎn)品導(dǎo)致的食物中毒，感染者會(huì)出現(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐、發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重者可出現(xiàn)敗血癥，危及生命安全。目前，副溶血弧菌已經(jīng)成為世界很多國(guó)家和地區(qū)細(xì)菌性食源性疾病的首要致病菌。在我國(guó)，副溶血弧菌在水產(chǎn)品中的檢出率呈逐年增高趨勢(shì)，且由沿海地區(qū)不斷向內(nèi)陸地區(qū)散播。由副溶血弧菌感染引起的食源性疾病數(shù)量也呈逐年上升趨勢(shì)，成為我國(guó)食源性疾病的主要致病菌。由于抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)、畜牧業(yè)和臨床治療中的不規(guī)范使用，細(xì)菌耐藥問題日益嚴(yán)重，多重耐藥菌株的出現(xiàn)使得常規(guī)抗生素失去療效，給臨床治療帶來巨大挑戰(zhàn)。本文基于副溶血弧菌的耐藥現(xiàn)狀，就其耐藥產(chǎn)生機(jī)制進(jìn)行探討，以期能夠?yàn)橄嚓P(guān)研究提供一些參考與借鑒，促進(jìn)抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)、畜牧業(yè)以及臨床治療中的合理使用。

1 副溶血弧菌耐藥現(xiàn)狀

早在1978年，美國(guó)就發(fā)現(xiàn)副溶血弧菌對(duì)氨芐西林有很高的耐藥率，許多國(guó)家和地區(qū)分離的副溶血弧菌都普遍對(duì)氨芐西林耐藥。在環(huán)境和食品分離株中，副溶血弧菌的多耐藥現(xiàn)象比較普遍，而臨床分離株中的多耐藥現(xiàn)象并不嚴(yán)重。

就副溶血弧菌環(huán)境和食品分離株的耐藥現(xiàn)狀來說，由于不同地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境和模式的不同，從不同地區(qū)環(huán)境和食品分離的副溶血弧菌耐藥譜存在差異，且從水底沉積物中分離的菌株耐藥率要明顯高于從水體中分離的菌株耐藥率。全世界的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)主要集中在發(fā)展中國(guó)家，尤其是亞洲地區(qū)。亞洲地區(qū)水產(chǎn)品中分離到的副溶血弧菌大多為多耐藥菌株，對(duì)常見的β-內(nèi)酰胺類（氨芐西林）、磺胺類（磺胺甲惡唑）、喹諾酮類（恩諾沙星）藥物均有不同程度的耐藥，其中對(duì)氨芐西林的耐藥率最高。此外，不同水產(chǎn)品中分離到的副溶血弧菌耐藥狀況也不盡相同。除了水產(chǎn)品之外，副溶血弧菌在其他肉食（雞肉、牛肉、豬肉）的檢出率也很高，尤其是熟肉食品中分離的菌株，對(duì)多種抗生素均有不同程度的耐藥性，其中，對(duì)鏈霉素耐藥率最高，其次是氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢噻吩和卡那霉素。

就副溶血弧菌臨床分離株的耐藥現(xiàn)狀來說，對(duì)氨芐西林的耐藥率較高，對(duì)頭孢唑林、頭孢呋辛等頭孢菌素和阿米卡星等氨基糖苷類抗生素中度耐藥，對(duì)其他大部分常用抗生素如美羅培南、四環(huán)素、左氧氟沙星等比較敏感。不同來源的菌株多耐藥指數(shù)沒有明顯差別;臨床菌株對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率遠(yuǎn)高于環(huán)境菌株，其他藥物的耐藥率沒有明顯差別。

2 副溶血弧菌的耐藥機(jī)制

副溶血弧菌的耐藥性分為固有耐藥和獲得性耐藥兩種，固有耐藥指細(xì)菌對(duì)某些抗生素的天然不敏感，主要由染色體基因介導(dǎo)，一般比較穩(wěn)定。其產(chǎn)生主要包括兩個(gè)方面，一是細(xì)菌缺乏對(duì)特定抗生素的易感靶位;二是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不同，導(dǎo)致副溶血弧菌能天然抑制萬古霉素等糖肽類抗生素進(jìn)入細(xì)胞。

獲得耐藥指細(xì)菌在抗生素作用下產(chǎn)生了自身突變，耐藥基因通過接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)換等方式水平轉(zhuǎn)移，使細(xì)菌捕獲或缺失某些遺傳信息從而產(chǎn)生耐藥性。獲得耐藥是細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生和擴(kuò)散的主要原因。副溶血弧菌獲得耐藥產(chǎn)生的生化機(jī)制主要概括為：①通過增加藥物排出或減少藥物滲入，減少抗生素到達(dá)靶細(xì)胞;②通過基因突變或修飾，改變與抗生素結(jié)合的靶位，使抗生素不能發(fā)揮作用;③通過產(chǎn)生耐藥酶，水解、轉(zhuǎn)移或滅活抗生素。

3 副溶血弧菌獲得耐藥的產(chǎn)生機(jī)制

3.1 減少抗生素到達(dá)靶細(xì)胞 減少抗生素到達(dá)靶細(xì)胞是副溶血弧菌獲得耐藥產(chǎn)生的生化機(jī)制之一，主要由三個(gè)方面的作用產(chǎn)生，一是細(xì)胞膜的通透性較差;二是外排泵作用;三是生物膜系統(tǒng)的形成。

外排泵是一類膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能將抗生素等物質(zhì)有選擇性地或無選擇性地排出到細(xì)胞外。所有細(xì)菌都攜帶編碼多藥外排泵的基因，在細(xì)菌多重耐藥性方面發(fā)揮重要作用，是細(xì)菌產(chǎn)生多重耐藥性的主要機(jī)制。副溶血弧菌中含有約 50 種多藥外排泵，其中最主要的是NorM 蛋白，可以保護(hù)細(xì)菌不與藥物及其他毒物結(jié)合。

生物膜是細(xì)菌附著在固體表面生長(zhǎng)，并形成由菌體及其分泌的基質(zhì)包裹在一起的膜狀復(fù)合物。生物膜形成后，細(xì)菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性、耐藥性及抵抗宿主免疫細(xì)胞的吞噬作用明顯增強(qiáng)。細(xì)菌形成的生物膜可以構(gòu)成一個(gè)外部屏障，限制或減緩抗生素的滲入。致病性副溶血弧菌能形成生物膜，從而與載體進(jìn)行特異性的結(jié)合。生物膜的形成與菌濃度、溫度、NaCl濃度、pH值等因素密切相關(guān)，Ca2+能促進(jìn)副溶血弧菌形成生物膜。耐藥較高的弧菌形成生物膜的能力也相對(duì)較強(qiáng)。

3.2 細(xì)菌靶位基因突變 細(xì)菌與抗生素結(jié)合的靶位基因突變，導(dǎo)致抗生素不能產(chǎn)生作用，這是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的重要原因。目前對(duì)該機(jī)制研究最多的是喹諾酮類藥物的靶位基因突變。細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥主要是由于編碼 DNA 旋轉(zhuǎn)酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ的基因突變所致。大部分喹諾酮類耐藥突變發(fā)生于 gyrA 基因序列上 67～106 位氨基酸殘基之間，對(duì)環(huán)丙沙星等喹諾酮類藥物耐藥的副溶血弧菌，其gyrA基因83位氨基酸由絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?對(duì)于耐藥水平高的菌株，其parC基因也會(huì)發(fā)生點(diǎn)突變，第85位氨基酸由絲氨酸突變?yōu)楸奖彼帷?/p>

3.3 耐藥酶 細(xì)菌可以通過產(chǎn)生鈍化酶或滅活酶來破壞或滅活抗生素的活性。細(xì)菌產(chǎn)生的耐藥酶主要有β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶和大環(huán)內(nèi)酯類-林克霉素類-鏈陽菌素類鈍化酶。

副溶血弧菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類（氨芐西林、頭孢菌素）、氨基糖苷類（卡那霉素）及氯霉素類（氯霉素）抗生素的耐藥主要通過β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶及氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶等耐藥酶類介導(dǎo)。副溶血弧菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶能夠特異性地打開分子結(jié)構(gòu)中的β-內(nèi)酰胺環(huán)，使β-內(nèi)酰胺類抗生素失去抗菌活性。

4 副溶血弧菌耐藥性檢測(cè)

副溶血弧菌耐藥性檢測(cè)主要分為耐藥表型檢測(cè)和耐藥基因檢測(cè)。

細(xì)菌耐藥表型檢測(cè)的常規(guī)方法為藥敏試驗(yàn)，主要包括紙片擴(kuò)散法、肉湯稀釋法、濃度梯度法和自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)。紙片擴(kuò)散法不需要特殊的儀器，具有抗生素選擇靈活、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，是副溶血弧菌藥敏試驗(yàn)中最常采用的一種方法。。肉湯稀釋法能夠獲得最小抑菌濃度，商品化的藥敏板具有操作方便、可重復(fù)性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。濃度梯度法是通過抗生素在瓊脂板上擴(kuò)散成濃度梯度來定量測(cè)量抗生素敏感性，操作方便，可作為副溶血弧菌耐藥模糊結(jié)果的確認(rèn)。臨床常用于檢測(cè)副溶血弧菌的自動(dòng)化儀器系統(tǒng)主要為Vitek系統(tǒng)和BD Phoenix系統(tǒng)，可以全自動(dòng)地對(duì)耐藥結(jié)果進(jìn)行定性和定量的分析，具有簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)。

常用的細(xì)菌耐藥基因檢測(cè)的方法包括PCR法、DNA探針法、基因芯片技術(shù)、飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)、全基因組測(cè)序等。這些檢測(cè)方法具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度和特異度高等特點(diǎn)，同時(shí)可以結(jié)合基因克隆和測(cè)序來分析耐藥基因的結(jié)構(gòu)及突變情況。在藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，如果能知道細(xì)菌是否攜帶有耐藥基因，能更好地預(yù)測(cè)藥物治療的效果，解釋耐藥機(jī)制。

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