柴胡產(chǎn)地加工工藝探究

石典花 張 軍* 蘇本正 戴衍朋 孫立立

（1.山東省中醫(yī)藥研究院， 山東濟(jì)南250014； 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)， 山東濟(jì)南250355）

柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根。按性狀不同，習(xí)稱前者“北柴胡”，后者為“南柴胡”。柴胡味辛、苦，微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣的功效［1］。現(xiàn)代研究表明柴胡具有解熱、抗內(nèi)毒素、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳、抗菌、中樞神經(jīng)抑制等多種藥理作用［2?7］。柴胡歷來臨床需求量巨大，因此有效保障柴胡藥材及飲片質(zhì)量對(duì)于有效保障臨床療效具有重要意義。

中藥材產(chǎn)地加工是根據(jù)中藥材的性質(zhì)和儲(chǔ)運(yùn)、銷售要求進(jìn)行產(chǎn)地初步加工。目前由于中藥材市場的無序競爭和假藥、劣藥的沖擊，使中藥材及其飲片質(zhì)量現(xiàn)況不容樂觀。近年來，雖然國家加大了中藥材及飲片的監(jiān)管力度，但中藥流通中故意摻雜、摻假現(xiàn)象始終存在。基于上述問題，有學(xué)者提出中藥材產(chǎn)地加工與中藥炮制一體化概念，從源頭抓起，杜絕問題隱患，確保藥材及飲片的質(zhì)量及臨床安全［8?12］。中藥材經(jīng)過產(chǎn)地加工，不僅起到去除其非藥用部位、停止其生理狀態(tài)以便干燥等操作，而且通過合適的加工方法，使藥用部位中有效成分最大保留、毒性成分有效減少［13］?；诖?，本研究對(duì)柴胡產(chǎn)地加工工藝進(jìn)行探究，以期有效保證柴胡及其飲片質(zhì)量，保障臨床療效。

1 材料

1.1 儀器 Waters 2695 高效液相色譜儀、Waters 2996 DAD 檢測器［沃特世科技（上海） 有限公司］；瑞士MET?TLER XS205 DU10-5電子天平（梅特勒?托利多儀器上海有限公司）；LC?350 A 型超聲波中藥處理機(jī)（濟(jì)寧市中區(qū)魯超儀器廠）；WFH?201B 型紫外透射反射儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；XMT804 型電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；DHG?9146 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 試劑與藥物 本研究所用柴胡均由山東百味堂中藥飲片有限公司提供當(dāng)年產(chǎn)鮮品藥材。柴胡皂苷a、b1、b2、c、d 對(duì)照品均購自成都普瑞法科技有限公司（批號(hào)分別為PRF7032246、PRF8062241、PRF8062242、PRF71220142、PRF8082905）；柴胡對(duì)照品（批號(hào)120992?201509，中國食品藥品檢定研究院）。乙腈為色譜純，乙酸乙酯、甲醇、乙醇、硫酸、氨水均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備 柴胡藥材的加工方式分別為三成干晾干、三成干烘干、五成干晾干、五成干烘干、晾至全干、烘至全干。

柴胡飲片的加工方式分別為①鮮切2～4 mm 厚片，晾干；②鮮切2～4 mm 厚片，烘干；③晾至三成干，切2～4 mm厚片，晾干；④晾至三成干，切2～4 mm 厚片，烘干；⑤晾至五成干，悶潤后切2～4 mm 厚片，晾干；⑥晾至五成干，悶潤后切2～4 mm 厚片，烘干；⑦晾至全干，蒸30 min 切2～4 mm 厚片，晾干；⑧晾至全干，蒸30 min切2～4 mm 厚片，烘干。（其中烘干溫度均為60 ℃）。

2.2 外觀性狀鑒別 不同加工方式的柴胡藥材圖片見圖1，不同加工方式的柴胡飲片圖片及主要特點(diǎn)描述見圖2。

圖1 不同加工工藝柴胡藥材樣品性狀

圖2 不同加工工藝柴胡飲片樣品特點(diǎn)

柴胡藥材外觀性狀無明顯差異。均呈圓柱形或長圓錐形，長6～15 cm，直徑0.3～0.8 cm。根頭膨大，頂端有3～15 個(gè)莖基或短纖維狀葉基，下部有分枝。表面黑褐色或淺棕色，具縱皺紋、支根痕及皮孔。

《中國藥典》 規(guī)定柴胡飲片呈不規(guī)則厚片，外表皮淺棕色，具縱皺紋和支根痕，切面顯淡黃白色，纖維性，質(zhì)硬，氣微香，味微苦。柴胡鮮切，直徑5 mm 以下切片完整。三成干切制的飲片，直徑5 mm 以下切片完整，7 mm以上不完整且表皮易脫落，內(nèi)部濕潤，連接地上部分易碎。五成干悶潤15 min 切制的飲片，直徑2～8 mm 切片完整，1 mm 可切，但內(nèi)部微松散。全干蒸30 min，5～7 mm 較好切。同時(shí)發(fā)現(xiàn)柴胡浸潤快，失去水分速度也快。

2.3 薄層鑒別 取本品粉末0.5 g，加甲醇20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液濃縮至5 mL，作為供試品溶液。另取北柴胡對(duì)照品0.5 g，同法制備對(duì)照品溶液。再取柴胡皂苷a 對(duì)照品、柴胡皂苷d 對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL 各含0.5 mg 的混合對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502） 試驗(yàn)，吸取上述3 種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯?乙醇?水（8 ∶2 ∶1） 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈（365 nm） 下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。TLC鑒定結(jié)果見圖3～6，由圖3～6 可以看出，不同加工工藝的柴胡藥材和飲片中在柴胡對(duì)照藥材、柴胡皂苷a 和柴胡皂苷d，相應(yīng)位置上均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且均未見明顯差異。

圖3 不同干燥工藝柴胡樣品TLC 圖譜（日光）

圖4 不同干燥工藝柴胡樣品TLC 圖譜（365 nm）

2.4 檢查 按2015 年版《中國藥典》 一部柴胡項(xiàng)下【檢查】 測定，結(jié)果見表1。藥材水分為5.84～7.31%，飲片為5.12～6.96%，均符合藥典不得過10.0%規(guī)定。

2.5 浸出物 按2015 年版《中國藥典》 一部柴胡項(xiàng)下【浸出物】 測定，結(jié)果見表1。藥材含有量為24.44～26.93%，飲片為24.85～28.27%，均符合藥典不少于11.0%要求。

2.6 樣品含有量測定［14?15］

圖5 不同產(chǎn)地加工工藝柴胡樣品TLC 圖譜（日光）

圖6 不同產(chǎn)地加工工藝柴胡樣品TLC 圖譜（365 nm）

表1 不同加工工藝柴胡藥材及飲片水分和浸出物含有量（%， n＝2）

2.6.1 色譜條件 Waters symmetry shield C18色譜柱（250 mm×4.60 mm，5 μm）；流動(dòng)相水（A） ?乙腈（B），梯度洗脫（0～20 min，70%A；20～25 min，70%～65%A；25～45 min，65%A；45～80 min，65%～50%A）；體積流量1 mL／min；檢測波長0～40 min，210 nm；40～57 min，250 nm；57～80 min，210 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.6.2 對(duì)照品溶液制備 取柴胡皂苷a、柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d 對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制備成每1 mL 分別含柴胡皂苷a 0.997 mg、柴胡皂苷b10.450 mg、柴胡皂苷b20.494 mg、柴胡皂苷c 0.512 mg、柴胡皂苷d 1.013 mg 的對(duì)照品溶液。

2.6.3 供試品溶液制備 取柴胡粉末（過4 號(hào)篩） 約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入含5% 濃氨試液的甲醇溶液25 mL，密塞，30 ℃水溫超聲 （200 W，40 kHz） 處理30 min，濾過，用甲醇20 mL 分2 次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.6.4 含有量測定 分別精密吸取“2.6.2” “2.6.3” 項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，在“2.6.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定。結(jié)果見表2～3。

表2 不同加工工藝柴胡藥材中柴胡皂苷含有量測定結(jié)果（%， n＝2）

表3 不同加工工藝柴胡飲片中柴胡皂苷含有量測定結(jié)果（%， n＝2）

3 討論與結(jié)論

柴胡藥材加工方面，不同加工工藝的柴胡藥材浸出物含有量在±10%之內(nèi)，無顯著性差異。不同加工工藝的柴胡藥材中均為柴胡皂苷a 和柴胡皂苷d 的含有量最高，柴胡皂苷c 次之，柴胡皂苷b1、b2最低。結(jié)果雖以三成干烘干的柴胡皂苷總量最高，但柴胡皂苷a 和柴胡皂苷d 的總含有量不如烘至全干的含有量高。同時(shí)發(fā)現(xiàn)晾至全干、烘至全干、三成干烘干柴胡藥材的皂苷總含有量RSD 為1.40%，這3 種加工工藝的柴胡皂苷a 含有量RSD 為2.61%，柴胡皂苷d 含有量的RSD 為1.26%，因此3 種加工工藝的柴胡藥材中皂苷a、d、皂苷總含有量及浸出物值均差別不大，所以從節(jié)約能源成本和操作難易程度來看，柴胡藥材以晾干較為適宜。

柴胡飲片加工方面，以藥材全干后蒸30 min 再切2～4 mm 厚片，烘干，制得的飲片中柴胡皂苷a 和柴胡皂苷d的含有量最高，且該加工工藝的柴胡皂苷總量也最高，浸出物含有量也相對(duì)較高，由此初步得出柴胡飲片最佳產(chǎn)地加工工藝為： 取柴胡藥材，洗凈，蒸30 min，切2～4 mm厚片，烘干。不同加工工藝的柴胡飲片浸出物含有量在±10%之內(nèi)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)鮮切晾干、三成干切晾干、三成干切烘干、五成干切晾干、五成干切烘干5 種方法所得的柴胡飲片皂苷總含有量RSD 為1.52%，柴胡皂苷a 含有量RSD為3.39%，柴胡皂苷d 含有量RSD 為3.60%，因此從節(jié)約成本方面考慮，認(rèn)為鮮藥材到五成干藥材切后晾干均較為適宜。