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    檸條花總生物堿抗氧化活性研究

    2020-09-10 07:22:44張艷珍王菲
    中國食物與營養(yǎng) 2020年7期
    關(guān)鍵詞:生物堿抗氧化

    張艷珍 王菲

    摘?要:以檸條(錦雞兒)花為原料,采用溶劑回流法提取總生物堿,并對(duì)提取的檸條花粗生物堿采用體外實(shí)驗(yàn)?zāi)P瓦M(jìn)行抗氧化能力研究,同時(shí)與抗壞血酸和苯甲酸作對(duì)比。結(jié)果表明:檸條花總生物堿提取物具有顯著的抗氧化能力,清除能力遠(yuǎn)大于苯甲酸,略小于抗壞血酸。

    關(guān)鍵詞:檸條花;生物堿;抗氧化

    檸條(錦雞兒)主要分布于內(nèi)蒙古、甘肅、寧夏、青海等地,它生長快,生物產(chǎn)量高,根、莖、葉、花等含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),具有滋陰養(yǎng)血等藥用價(jià)值[1-2]。檸條花富含粗脂肪、粗纖維、碳水化合物、總黃酮、生物堿、多酚等,其中生物堿具有抗菌、降血糖、抗腫瘤、抗心律失常、抗血小板聚集等活性,是許多藥用植物的有效成分[3-5]。該試驗(yàn)以檸條花為原料,探討了檸條花中總生物堿提取物對(duì)有機(jī)自由基、羥自由基、超氧陰離子、亞硝酸根離子的清除作用,以期為檸條花生物堿的利用提供科學(xué)依據(jù)。

    1?材料與設(shè)備

    1.1?材料與試劑

    檸條花:購于青海省西寧市;鹽酸小檗堿對(duì)照品,中國藥品生物制品檢定所;溴甲酚綠,天津市白世化工公司;檸檬酸(分析純),天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司;磷酸氫二鈉(分析純),天津市紅巖化學(xué)試劑廠;甲醇(色譜純),天津市白世化工有限公司;鹽酸(分析純);氫氧化鈉(分析純);水為蒸餾水;氯仿為分析純;無水乙醇。

    1.2?儀器與設(shè)備

    DK-8D型電數(shù)顯水浴鍋,金壇市盛威實(shí)驗(yàn)儀器廠;TU-1800spc型紫外可見分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;BS224S型電子分析天平,賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;PH211型pH計(jì),北京哈納科儀科技公司。

    2?方法

    2.1?生物堿的提取工藝路線

    檸條花挑揀后60℃下烘干,粉碎過40目篩,稱取粉碎過的檸條花2.0g于250 mL圓底燒瓶中,采用1∶15料液比加入90%乙醇(含0.1% HCL)回流提取1h,同法提取2次,合并濾液,用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0,過濾收集濾液定容至50 mL容量瓶中,提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,揮發(fā)乙醇,即為總生物堿溶液。

    2.2?體外實(shí)驗(yàn)?zāi)P头ㄑ芯繖帡l花生物堿抗氧化能力

    經(jīng)測(cè)定,檸條花總生物堿提取物濃度為4.8g/L。取總生物堿提取液 5、15、25、35、45、50 mL,加乙醇定容至50mL,得到 0.48、1.44、2.4、3.36、4.32、4.8g/L不同濃度的總生物堿提取物液;以苯甲酸溶液和抗壞血酸溶液作為對(duì)照,待用。

    2.2.1?清除DPPH·自由基的測(cè)定?準(zhǔn)確稱取DPPH試劑3.5mg,用無水乙醇溶解,并定量轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中,用無水乙醇定容至刻度,取2mL至100 mL容量瓶中,搖勻得濃度為0.017 8mmol/L DPPH貯備液,置于冰箱中冷藏備用。取2mL 0.017 8mmol/L DPPH無水乙醇溶液,加入不同濃度的總生物堿提取液各2 mL,充分振搖后,室溫下暗處放置 10min,然后在 517nm處比色測(cè)定,用甲醇作為空白。以抗壞血酸和苯甲酸作對(duì)照試驗(yàn)[6]。清除率計(jì)算公式為式(1):

    式(1)中,A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

    2.2.2?清除羥基自由基(·OH )的測(cè)定?采用水楊酸法:取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL,分別加入2% FeSO4溶液 1 mL 、5%水楊酸溶液 1 mL 、蒸餾水6 mL、3% 過氧化氫 1 mL,37 ℃下恒溫 0.5 h,在波長 510 nm 處測(cè)定吸光度A1,用甲醇作為空白。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對(duì)照試驗(yàn)[7]。清除率計(jì)算公式為式(2):

    式(2)中,A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

    2.2.3?清除超氧陰離子(O-2)的測(cè)定?采用鄰苯三酚法。取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL,各加入 pH為8的Tris—HC1緩沖液 5mL 、蒸餾水 2mL,25 ℃下恒溫 20 min。加入 0、1%的鄰苯三酚溶液 1mL,反應(yīng) 4 min,滴加2滴濃鹽酸溶液終止反應(yīng),在 320 nm處測(cè)定吸光度 A1,空白對(duì)照測(cè)得吸光度 A0。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對(duì)照試驗(yàn)[8]。清除率計(jì)算公式為式(3):

    式(3)中,A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

    2.2.4?清除亞硝酸根離子 (NO2-)的測(cè)定?采用重氮偶合比色法。取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL,各加入0.1mol/L NaNO2溶液 0.5 mL、蒸餾水6 mL,振蕩搖勻,37 ℃下恒溫1 h。取出后加入0.4%的對(duì)氨基苯磺酸1 mL,靜置10 min。加入0.2%鹽酸萘乙胺試液0.5 mL,靜置5min,在540 nm 處測(cè)定吸光度A1、空白對(duì)照的吸光度A0。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對(duì)照試驗(yàn)[9]。清除率計(jì)算公式為式(4):

    式(4)中,A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

    3?結(jié)果與分析

    3.1?檸條花生物堿體外抗氧化活性研究結(jié)果

    3.1.1?清除有機(jī)自由基?DPPH在有機(jī)溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基,呈現(xiàn)紫紅色。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí),DPPH的孤電子配對(duì),顏色變淺,吸光度變小。顏色的變化程度與配對(duì)電子呈一定關(guān)系,因此可以用吸光度的測(cè)定來評(píng)價(jià)自由基的清除作用。由圖1可知,對(duì)照品抗壞血酸表現(xiàn)出較強(qiáng)的DPPH·自由基清除能力,苯甲酸表現(xiàn)出較弱的DPPH·自由基清除能力。在低濃度的時(shí)候,總生物堿提取物的DPPH·自由基清除能力略低于抗壞血酸,但隨著濃度的增加,清除能力顯著高于苯甲酸,略低于抗壞血酸。

    3.1.2?清除羥基自由基(·OH )?研究生物堿提取物對(duì)羥自由基的清除能力具有重要的意義[10]。由圖2可知,生物堿提取物對(duì)羥自由基具有一定的清除作用,清除率隨著樣品濃度的增加呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。綜合比較三者,生物堿提取物的清除能力明顯高于苯甲酸,稍低于抗壞血酸。

    3.1.3?清除超氧陰離子(O-2)?鄰苯三酚在堿性條件下,能迅速自氧化,釋放出超氧陰離子。加入清除劑后能夠清除其中的超氧陰離子 [11]。由圖3可知,生物堿提取物具有一定的清除超氧陰離子的作用,清除率隨著樣品濃度的上升呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)。清除率不如抗壞血酸,但明顯優(yōu)于苯甲酸。

    3.1.4?清除亞硝酸根離子 (NO-2)?由圖4可知,總生物堿提取物對(duì)亞硝酸根離子的清除率隨著樣品濃度的增大呈現(xiàn)上升趨勢(shì),且在相同的濃度下清除率大于苯甲酸而小于抗壞血酸,說明檸條花總生物堿對(duì)亞硝酸根離子具有一定的清除作用。

    4?結(jié)論

    抗氧化試驗(yàn)結(jié)果表明,檸條花總生物堿抗氧化能力預(yù)期濃度具有量效關(guān)系,檸條花總生物堿提取物具有清除有機(jī)自由基、羥自由基、超氧陰離子、亞硝酸根離子的能力,清除能力遠(yuǎn)大于苯甲酸,略小于抗壞血酸,可見檸條花總生物堿具有明顯的抗氧化活性,這預(yù)示著生物堿在抗氧化劑、抗衰老方面存在著潛在的利用價(jià)值。

    參考文獻(xiàn)

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    [11]Sezai Ercisli,Emine Orhan,Ozlem Ozdemir,et a1.The genotypic effects on the chemical composition and antioxidant activity of sea buckthom berries grown in Turkey[J].Scientia Horticulturae,2007(115):27-33.

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