HPLC法測(cè)定腦力寶丸中遠(yuǎn)志皂苷元含量

高晗 李哲

【摘 要】 目的：建立腦力寶丸中遠(yuǎn)志皂苷元的HPLC含量測(cè)定方法。方法：采用C18柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），以甲醇-0.05% H3PO4（70∶ 30）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長：210 nm;柱溫：35℃;流速：1.0 mL·min-1。結(jié)果：遠(yuǎn)志皂苷元的線性范圍為59.68～298.4 μg·mL-1，平均回收率為100.07% ，RSD=0.87% 。結(jié)論：該方法操作簡便、準(zhǔn)確性好、專屬性強(qiáng)，可作為腦力寶丸中遠(yuǎn)志皂苷元的含量測(cè)定方法。

【關(guān)鍵詞】 HPLC;腦力寶丸;遠(yuǎn)志皂苷元

【中圖分類號(hào)】R284.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）13-0049-03

Abstract：Objective To establish a method for determination of Presenegenin in Naolibao Pill by using high performance liquid chromatograph Methods The HPLC method was conducted on a C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm） with methanol-0.05% H3PO4 solution（70： 30） as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml·min-1 and detection wavelength was 210nm，column temperature was 35℃. Results The method is highly specific， the linear range of Presenegenin was 59.68-298.4 μg·ml-1 with an average recovery 100.07%，RSD=0.87%.Conclusion The method is simple， accurate with a good reproducibility and is reliable for quality control of Naolibao Pill.

Keywords：HPLC; Naolibao Pill; Presenegenin

腦力寶丸由遠(yuǎn)志、地黃、五味子、菟絲子、地骨皮、茯苓、石菖蒲、川芎、維生素B1、維生素E組成，載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊(cè)》，為中西復(fù)方制劑，具有滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)心安神之功效[1]，主要用于肝腎陰虛所致的健忘失眠、煩躁夢(mèng)多、潮熱盜汗、神疲體倦等證。遠(yuǎn)志為君藥之一，具有寧心安神之功效[2]。其主要活性成分——遠(yuǎn)志皂苷元，為遠(yuǎn)志總皂苷堿水解的產(chǎn)物。本實(shí)驗(yàn)以遠(yuǎn)志皂苷元為指標(biāo)成分，建立腦力寶丸HPLC含量測(cè)定質(zhì)量控制方法。

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀（美國安捷倫科技公司）， 檢測(cè)器G7115A 進(jìn)樣器G7129C;METTLER-ALC-210.4電子分析天平（上海梅特勒托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥 腦力寶丸，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司（批號(hào)：1101231、1101232、1101241）;遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111572-200702，）;甲醇，色譜純（Thermo Fisher）;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長的選擇 取遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)照品溶液，在200～400 nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在210 nm處有最大吸收，故選擇210 nm作為檢測(cè)波長。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱： ACCHROM xAqua -C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）柱;流動(dòng)相：甲醇-0.05% H3PO4（70：30）;檢測(cè)波長：210 nm;流速1.0 mL·min-1;柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL;理論板數(shù)按遠(yuǎn)志皂苷元峰計(jì)算應(yīng)不低于3500。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)照品（經(jīng)減壓干燥）7.5 mg，至25 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解，稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含0.3 mg的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液4 mL于10 mL量瓶中，流動(dòng)相將其稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備 取腦力寶丸30丸，除掉包衣，研細(xì)，取約2.5 g，精密稱定，加入50 mL甲醇，水浴加熱回流30 min，濾過，甲醇洗滌濾渣3次，每次10 mL，合并濾液與洗液，減壓蒸干，殘?jiān)尤?0% 鹽酸溶液50 mL，采用水浴加熱回流1 h，放冷，濾過，濾渣用水洗滌至中性，連同濾紙置錐形瓶中，加入甲醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液放置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 專屬性 制作缺少遠(yuǎn)志的陰性樣品（取除遠(yuǎn)志外其余藥材，按法定工藝進(jìn)行制備），采用供試品溶液制備方法制備成陰性對(duì)照溶液，并進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果顯示，遠(yuǎn)志陰性對(duì)照溶液在與遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)照品相同保留時(shí)間處未見明顯色譜峰，證明該方法專屬性良好。如圖1所示。

2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)照品儲(chǔ)備液各2、3、4、6、10 mL于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋得濃度分別為59.68、89.52、119.36、179.04、298.40 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別以2.2所示色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=8.629 x-45.925（r=0.9999），結(jié)果表明，遠(yuǎn)志皂苷元在59.68～298.4 μg ·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，以2.2所示色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD=0.80%。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品，6份，以2.4所示方法分別制備供試品溶液，以2.2所示色譜條件測(cè)定，測(cè)得遠(yuǎn)志皂苷元平均含量為每丸0.47 mg，RSD= 1.41%。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h進(jìn)樣，以2.2所示色譜條件測(cè)定遠(yuǎn)志皂苷元含量，結(jié)果RSD= 0.85%，說明供試品溶液在12h內(nèi)可基本穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量的樣品（遠(yuǎn)志皂苷元含量：每丸0.47 mg）6份，各1.25 g，采用加樣回收法，精密加入一定量遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)照品，照2.4所示方法和2.2所示色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.11 樣品測(cè)定 按上述HPLC含量測(cè)定法，對(duì)3批腦力寶丸（批號(hào)：1101231、1101232、1101241）進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算遠(yuǎn)志皂苷元含量，結(jié)果分別為每丸0.47 mg、0.48 mg、0.48 mg，RSD=1.21 %。

3 討論

腦力寶丸標(biāo)準(zhǔn)中遠(yuǎn)志皂苷元含量測(cè)定方法采用薄層掃描法，得出的結(jié)果精密度較低、誤差較大，筆者通過建立遠(yuǎn)志皂苷元HPLC含量測(cè)定方法，提高了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度，減小了測(cè)量誤差。實(shí)驗(yàn)中分別考察了甲醇-水、乙腈-水-冰醋酸（40∶ 60∶ 0.2）[3]、甲醇-0.05%磷酸[4-5] 3種不同的流動(dòng)相體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇-0.05%磷酸（70∶ 30）作為流動(dòng)相，遠(yuǎn)志皂苷元峰的峰形對(duì)稱，達(dá)到分離度的要求，該方法操作簡便、專屬性強(qiáng)，可為腦力寶丸中遠(yuǎn)志皂苷元的含量測(cè)定方法。

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（收稿日期：2020-05-11 編輯：陶希睿）