菟絲子及其混偽品的鑒別研究概況

李君玲

(宜春學(xué)院，江西 宜春 336000)

菟絲子[1]為旋花科植物南方菟絲子Cuscuta australis R.Br.或菟絲子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟種子。味辛、甘，性平，歸肝、腎、脾經(jīng)，具有補(bǔ)益肝腎，固精縮尿，安胎，明目，止瀉的功效，外用消風(fēng)祛斑。臨床常用于治療肝腎不足，腰膝酸軟，陽痿遺精，遺尿尿頻，腎虛胎漏，胎動(dòng)不安，目昏耳鳴，脾腎虛瀉。2010年以前的歷版藥典中關(guān)于菟絲子的原植物來源均為菟絲 子Cuscuta chinensis Lam.， 而從2010年版開始關(guān)于菟絲子的原植物來源則增加了南方菟絲子 Cuscuta australis R.Br.。菟絲子是一味常用的中藥，目前市場(chǎng)出現(xiàn)了很多的混偽品，相關(guān)學(xué)者對(duì)菟絲子及其混偽品的鑒別也做了大量的研究工作。為了中藥菟絲子的正確鑒別和臨床應(yīng)用的安全、有效，筆者對(duì)十幾年來關(guān)于菟絲子的混偽品及其常用的鑒別方法進(jìn)行了梳理，概述如下。

1 混偽品

目前，市場(chǎng)上關(guān)于菟絲子商品的混偽現(xiàn)象主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：第一、同科屬植物種子混充菟絲子使用。如同為旋花科菟絲子屬的金燈藤(大菟絲子、日本菟絲子) Cuscuta japonica Choisy、歐洲菟絲子Cuscuta europaea L.、啤酒花菟絲子Cuscuta lupuliformis Krocker、單柱菟絲子Cuscuta monogyna Vahl、杯花菟絲子Cuscuta cupulata Engelm.、原野菟絲子Cuscuta campestris Yunck.等的種子摻入到菟絲子商品中。第二、不同科屬植物的種子或果實(shí)偽充菟絲子使用(見表1)。第三、摻雜現(xiàn)象。常見雜質(zhì)主要有泥沙。第四、人工偽造品。常見的有用石灰、淀粉、水泥、泥沙等加工成菟絲子形狀的偽造品。

表1 菟絲子混偽品(不同科屬)

2 鑒別方法

2.1 性狀鑒別法[1-14,16]

通過用肉眼或放大鏡觀察菟絲子及其混偽品的大小、形狀、表面、氣味、水試等方面的特征，進(jìn)而達(dá)到區(qū)分、鑒別的目的?，F(xiàn)總結(jié)歸納菟絲子及其混偽品的主要性狀鑒別特征如下。(見表2)

表2 菟絲子及其混偽品的性狀鑒別特征

芥子白芥子:表面具細(xì)微的網(wǎng)紋,有明顯的點(diǎn)狀種臍;味辛辣。黃芥子:表面光滑,放大鏡下可見細(xì)微網(wǎng)紋,一端具一圓形淡褐色種臍;研碎后加水浸濕,則產(chǎn)生辛烈的特異臭氣。二者水煮后,表面無黏性,無“吐絲”現(xiàn)象。天仙子扁腎形或扁卵形;表面具細(xì)密的網(wǎng)紋,略尖的一端有點(diǎn)狀種臍;味微辛。沙苑子腎形而稍扁;表面光滑,邊緣一側(cè)微凹處具圓形種臍;嚼之有豆腥味。青葙子扁圓形,少數(shù)呈圓腎形;表面黑色或紅黑色,光亮,中間微隆起,側(cè)邊微凹處有種臍。韭菜子半圓形或半卵圓形,略扁,長(zhǎng)2～4mm,寬1.5～3mm;表面黑色,一面突起,粗糙,有細(xì)密的網(wǎng)狀皺紋,另一面微凹,皺紋不甚明顯;有點(diǎn)狀突起的種臍;氣特異,味微辛。冬葵子腎形;棕黃色或黑褐色。車前子橢圓形、不規(guī)則長(zhǎng)圓形或三角狀長(zhǎng)圓形,略扁;表面具細(xì)皺紋,一面有灰白色凹點(diǎn)狀種臍;質(zhì)硬;表面有黏性,但無“吐絲”現(xiàn)象。秫米(粟)水煮后,無“吐絲”現(xiàn)象。蕪青子表面細(xì)密網(wǎng)狀紋飾,一側(cè)可見兩條微凹陷的淺溝,一端有點(diǎn)狀突起的種臍;質(zhì)脆,易以指甲壓碎;水煮后,種子膨脹,但表面無黏性,無“吐絲”現(xiàn)象。水蓑衣子心臟形,扁平;表面平滑,無網(wǎng)文,具毛,臍點(diǎn)微凹;舌舔粘舌。蕓苔子放大鏡下觀察網(wǎng)狀紋理,一端有黑色而近圓形的種臍石薺苧子表面具細(xì)密網(wǎng)紋,間隙淺凹;質(zhì)輕脆,易壓碎;水煮后,表面無黏性,無“吐絲”現(xiàn)象。大頭菜子大頭菜子表面一端有類白色線形腫臍;易以指甲壓碎;味微苦;開水浸泡無粘性。千穗谷子卵圓形或近圓形,側(cè)扁,雙凸透鏡狀,形如飛碟;表面近平滑,具明顯的邊緣,種臍位于一端,微小;水煮可見白色扁平的胚根,似吐絲。人工偽造品石灰制丸表面光滑,無種皮、種臍、胚;質(zhì)較重,易用指甲壓碎;水煮后無變化,沉于水底不溶散,無“吐絲”現(xiàn)象,水被染色。淀粉制丸表面光滑,無種皮、種臍、胚;質(zhì)較輕,易用指甲壓碎;水煮后沉于水底不溶散,手捏黏性,無“吐絲”現(xiàn)象。水泥制丸表面光滑;質(zhì)硬沉重壓手,指甲壓不碎;水煮后沉于水底不溶散,無“吐絲”現(xiàn)象,水被染色。泥沙制丸表面無種皮、種臍、胚;易用指甲壓碎;水煮后沉于水底溶散成沙土,無“吐絲”現(xiàn)象。

2.2 微性狀鑒別法[15-18,25]

微性狀鑒別法是一種采用體視顯微鏡、生物顯微鏡和袖珍顯微鏡等與計(jì)算機(jī)軟件結(jié)合,觀察、拍攝藥材表面的細(xì)微特征信息,以達(dá)到鑒別中藥材的目的。該方法具有檢測(cè)儀器攜帶方便、操作簡(jiǎn)單、檢驗(yàn)快速、費(fèi)用少，適合基層中藥鑒定與檢驗(yàn)運(yùn)用等特點(diǎn)。目前關(guān)于菟絲子及其混偽品的微性狀鑒別研究，主要采用體視顯微鏡和掃描電鏡來獲得菟絲子及其混偽品的細(xì)微特征?，F(xiàn)總結(jié)歸納菟絲子及其混偽品的主要微性狀鑒別特征如下。(見表3)

表3 菟絲子及其混偽品的微性狀鑒別特征

2.3 顯微鑒別法[1,9,14,19,22,24-25]

顯微鑒別法是指用顯微鏡對(duì)藥材或飲片的切片、粉末、解離組織或表面制片中組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。目前關(guān)于菟絲子及其混偽品的顯微鑒別研究，主要從組織特征和粉末特征兩個(gè)方面進(jìn)行研究。以下是關(guān)于菟絲子及其混偽品的主要顯微鑒別特征的歸納和總結(jié)。(見表4)

表4 菟絲子及其混偽品的顯微鑒別特征

3 理化鑒別法

3.1 一般理化鑒別法

張正康[12]采用鹽酸鎂粉反應(yīng)鑒別菟絲子及大頭菜子，結(jié)果表明：菟絲子溶液顯桃紅色 ,大頭菜子不顯色；采用薄層色譜法鑒別后，結(jié)果表明，在紫外光燈 ( 365 nm)下,菟絲子顯 4個(gè)斑 點(diǎn) ,大頭菜子顯 3個(gè)斑點(diǎn)，二者存在明顯區(qū)別。顧琳娜[26]等人采用鹽酸鎂粉反應(yīng)鑒別菟絲子及其混偽品蕪青子，結(jié)果表明：菟絲子溶液顯桃紅色，而蕪菁子溶液不顯顏色。陳 曦[27]等人利用菟絲子中主含黃酮類成分，通過鹽酸鎂粉反應(yīng)，薄層色譜檢識(shí)黃酮苷、黃酮苷元，很好的區(qū)別了菟絲子及其混偽品芥子；利用芥子中主含生物堿類成分，通過生物堿沉淀試劑，薄層色譜檢識(shí)生物堿，也實(shí)現(xiàn)了區(qū)別菟絲子及其混偽品芥子的目的，此外通過薄層色譜法對(duì)二者氨基酸類成分、揮發(fā)油類成分進(jìn)行檢識(shí)，結(jié)果二者亦存在明顯差異。劉文泉[28]等人采用碘試液鑒別菟絲子正品、偽品和摻偽正品，結(jié)果表面，菟絲子表面顏色不改變, 而偽品瞬間全部變成黑紫色, 其中摻入的正品立刻顯現(xiàn)。金蕾[23]采用鹽酸鎂粉反應(yīng)鑒別菟絲子及蕪青子，結(jié)果表明：菟絲子溶液顯淡紅色；芫青子溶液顯淡黃色。從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，利用菟絲子含黃酮類成分的特點(diǎn)，可較好的將菟絲子與其大多數(shù)的不同科屬的混偽品進(jìn)行區(qū)別。

3.2 色譜法

3.2.1 薄層色譜法

盧立瓊[9]等采用薄層色譜法，菟絲子苷、紫云英甙、金絲桃苷、槲皮素為對(duì)照，鑒別菟絲子、歐洲菟絲子、蕓苔子，結(jié)果表明：在紫 外 光 燈 (365 nm)下，菟絲子和歐洲菟絲子在四個(gè)對(duì)照品相同位置均顯現(xiàn)斑點(diǎn)，而蕓苔子只在槲皮素和金絲桃苷相同位置處呈現(xiàn)斑點(diǎn)。佘玫惠[13]采用薄層色譜法對(duì)正品菟絲子與南方菟絲子、歐菟絲子、日 本菟絲子進(jìn)行鑒別研究，結(jié)果表明,四者在薄層色譜方面存在著明顯不同的斑點(diǎn) 。王建偉[14]等人采用薄層色譜法對(duì)菟絲子和4個(gè)偽品進(jìn)行鑒別，結(jié)果表明：在紫外光燈(254nm)下，正品菟絲子呈現(xiàn)2個(gè)藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，4個(gè)偽品樣品均無斑點(diǎn)。劉文泉[28]等人采用薄層色譜法鑒別上述三種藥材，結(jié)果表明：在紫外燈 ( 365nm )下, 正品菟絲子在 Rf值 0.78處有亮藍(lán)紫色 熒光。摻 50% 正品菟絲子的偽品在 Rf值 0.69處有黃色熒 光、Rf值 0.78處有亮藍(lán)紫色熒光。偽品在 Rf值 0.69處有 黃色熒光。傅厚道[29]采用薄層色譜法，以菟絲子對(duì)照藥材和金絲桃苷對(duì)照品味對(duì)照，對(duì)菟絲子和蕪青子進(jìn)行鑒別，結(jié)果表明：在與菟絲子和金絲桃苷相對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)位置處，供試品蕪菁子無斑點(diǎn)顯示。郭澄[30]等人以山奈酚和槲皮素為對(duì)照品，采用薄層色譜法對(duì)菟絲子、南方菟絲子及同科屬混偽品——金燈藤、原野菟絲子、歐洲菟絲子、杯花菟絲子、單柱菟絲子進(jìn)行鑒別。結(jié)果表明：上述七種均含有山奈酚和槲皮素兩種成分，而且南方菟絲子中山奈酚的含量較高；菟絲子、南方菟絲子、原野菟絲子、金燈藤、單柱菟絲子在Rf 0.5-0.7之間無斑點(diǎn)；金燈藤、單柱菟絲子在Rf0.5區(qū)域內(nèi)有較多斑點(diǎn)；杯花菟絲子、歐洲菟絲子在Rf 0.5-0.7之間各有四個(gè)斑點(diǎn)。因此黃酮類成分不但可以用于菟絲子為不同科屬偽品的鑒別，還可以用于同科屬易混品的鑒別。

3.2.2 高效液相色譜指紋圖譜法

傅厚道[29]以金絲桃苷為對(duì)照品，采用 高效液相色譜法測(cè)定，結(jié)果表明，蕪菁子在金絲桃苷特征峰處無對(duì)應(yīng)峰，而菟絲子有。馮華[34]等人在大菟絲子藥材的HPLC指紋圖譜中標(biāo)定12個(gè)共有峰，不同產(chǎn)地的大菟絲子相似度均大于0.97，而與菟絲子(南方菟絲子 Cuscuta australis R． Br．)藥材的相似度在0.60 以下。因此HPLC指紋圖譜的建立可作為大菟絲子藥材與菟絲子藥材有效識(shí)別方法，且高效液相色譜指紋圖譜法用于菟絲子及其混偽品的鑒別方面具有簡(jiǎn)便、快捷、可靠的優(yōu)點(diǎn)。

3.3 光譜法

3.3.1 紫外光譜

薛漓[19]在400-230 nm范圍內(nèi)測(cè)定菟絲子和蕓苔子(氯仿溶液)的紫外吸收光譜，結(jié)果表明：菟絲子在281.0±6 nm處有吸收峰，而蕓苔子在此處無吸收峰，紫外吸收光譜法可有效的對(duì)二者進(jìn)行的鑒別。趙樹鵬[21]在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定菟絲子和歐洲菟絲子的紫外吸收光譜，結(jié)果表明：菟絲子在255 nm、270 nm、290 nm處有吸收峰，而歐洲菟絲子在286 nm、312 nm、326nm處有吸收峰，二者的吸收峰位置存在明顯的不同，因此紫外吸收光譜法可對(duì)二者進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒別。郭 澄[30]等人用 紫 外 光 譜在 200-400 nm 間 掃 描 , 得 4 種 溶 劑條 件 下 不 同菟絲子的最大波長(zhǎng)。 結(jié)果表明：pet溶劑下測(cè)定，菟絲子和南方菟絲子在：336 nm和315 nm有峰，而歐洲菟絲子和金燈藤(大菟絲子)則無此峰；在氯仿溶劑下測(cè)定，菟絲子在268 nm處有峰，而南方菟絲子無此峰。侯 惠 蟬[31]等人以采用紫外光譜法鑒別菟絲子和蕪青子，結(jié)果表明，菟絲子在293 nm處有最大吸收波長(zhǎng)，而混偽品蕪青子則在332 nm處存在最大吸收波長(zhǎng)。趙惠萍[32]等人在200-400 nm范圍內(nèi)測(cè)定菟絲子和蕓苔子(乙醇溶液)的紫外吸收光譜，結(jié)果表明：菟絲子在207 nm、268 nm、295 nm處有吸收峰，而蕓苔子在210 nm,333 nm處有吸收峰，紫外吸收光譜法可有效的對(duì)二者進(jìn)行的鑒別。

3.3.2 紅外光譜法

孫榮梅[33]等人對(duì)菟絲子和金燈藤采用近紅外光譜結(jié)合移動(dòng)窗口偏最小二乘法波段選擇進(jìn)行主成分分析，結(jié)果表明二者基本可以區(qū)分，分類正確率達(dá)93%。近紅外光譜用于菟絲子同屬混淆品的鑒別具有簡(jiǎn)便快捷、直觀、省時(shí)、環(huán)保等特點(diǎn)。洪慶紅[34]等人采用水平衰減全反射傅里葉變換紅外光譜法測(cè)定了菟絲子及其偽品——金燈藤、紫蘇子、芥子的 FTIR，并對(duì)FTIR數(shù)據(jù)進(jìn)行了聚類分析。結(jié)果表明菟絲子與三種混偽品相差顯著。該法用于菟絲子及其混偽品的鑒別具有簡(jiǎn)便、有效的特點(diǎn)。

3.4 電泳法

3.4.1 凝膠電泳法

郭澄[35]等人用凝膠電泳對(duì)菟絲子及其混偽品進(jìn)行鑒別。他們將菟絲子的電泳譜分為兩個(gè)區(qū)域, A區(qū)譜帶的Rf<0.5,B區(qū)譜帶的Rf>0.5。 又根據(jù)染色深淺將電泳譜帶分成4級(jí), 色深者為1級(jí)帶, 色淺者為2級(jí)、3級(jí), 譜帶擴(kuò)散者為4級(jí) 。結(jié)果表明：南方菟絲子只是在A區(qū)比菟絲子多了l條3級(jí)帶，二者在B區(qū)均有2條4級(jí)帶, 其余的譜帶均相同；而歐洲菟絲子則在B區(qū)有3條4級(jí)帶； 大菟絲子則無B區(qū)譜帶。而菟絲子的混偽品紫蘇子在A區(qū)有2條1級(jí)帶,B區(qū)有1條1級(jí)帶；白芥子在A、B區(qū)各有1條1級(jí)帶。正品菟絲子與同科屬易混品、偽品的圖譜存在明顯區(qū)別，凝膠電泳法可作為菟絲子及其混偽品的可靠鑒別方法。 林慧彬[36]采用SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳 ( SDS PAGE)技術(shù)對(duì)菟絲子及其混偽品——天仙子、紫蘇子、韭菜子、白芥子、沙苑子進(jìn)行蛋白質(zhì)分析。結(jié)果表明，偽品的蛋白質(zhì)條帶與菟絲子差別十分明顯，該法可以有效的區(qū)別菟絲子及其混偽品。韓麗麗[37]等人采用聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)技術(shù)對(duì)菟絲子及其混偽品——韭菜子、沙苑子進(jìn)行蛋白質(zhì)分析。結(jié)果表明，菟絲子與偽品之間存在明顯差別，該法可以用于菟絲子及其混偽品的鑒定。

3.4.2 高效毛細(xì)管電泳法

高效毛細(xì)管電泳法(HPCE) 是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離分析的液相分離方法。與傳統(tǒng)的凝膠電泳法相比, 它具有高效 、快速、低耗、樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單 、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。胡平[38]等人采用高效毛細(xì)管電泳法，對(duì)同科屬植物菟絲子、南方菟絲子和金燈藤種子的堿溶性和酸溶性蛋白進(jìn)行提取和檢測(cè)。結(jié)果表明：三者在蛋白成分和含量上存在顯著差異，HPCE法可有效的用于菟絲子同科屬易混品的鑒別。

4DNA分子標(biāo)記法

4.1 快速PCR法

蔣超[39]等人采用快速PCR法對(duì)菟絲子及其混偽品樣品的ITS片段進(jìn)行擴(kuò)增、并在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入SYBR Green染料，最后在365 nm 紫外波長(zhǎng)下進(jìn)行熒光檢測(cè)。結(jié)果表明：在各樣品PCR產(chǎn)物不稀釋情況下，菟絲子顯示出明亮的綠色熒光，而紫蘇子、青葙子、沙苑子、油菜子、急性子均不發(fā)出熒光，因此可將菟絲子與上述5個(gè)混偽品區(qū)別開來；在PCR產(chǎn)物稀釋8倍情況下，菟絲子仍顯熒光，而白芥子、萊菔子、冬葵子已不顯示熒光，因此可將菟絲子與上述3個(gè)混偽品區(qū)別開來。快速PCR法具有無需測(cè)序或凝膠電泳，可直接、快速地獲得藥材真?zhèn)舞b別結(jié)果，方法簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)。它的缺點(diǎn)就是引物二聚體也可被熒光染料，導(dǎo)致鑒別結(jié)果的誤判。但可通過對(duì)稀釋后的PCR產(chǎn)物進(jìn)行熒光染色可避免假陽性問題的出現(xiàn)。

目前關(guān)于菟絲子的鑒別方法主要以性狀、微性狀、顯微及一般理化鑒別為主，這些方法具有簡(jiǎn)單、快速、鑒別成本低等優(yōu)點(diǎn)，但需要具有相關(guān)藥材鑒別經(jīng)驗(yàn)，比較適合基層藥材鑒別的應(yīng)用。而色譜法、光譜法、DNA分子標(biāo)記等方法則具有操作方便、結(jié)果準(zhǔn)確度高、不需相關(guān)藥材鑒別經(jīng)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，但鑒別成本偏高、對(duì)儀器設(shè)備的依賴性更高，比較適合鑒定機(jī)構(gòu)、科研院所等部門或單位應(yīng)用。

5 小結(jié)與討論

市售菟絲子藥材混偽現(xiàn)象可能的原因主要是：一、藥源少，有意摻雜制假；二、菟絲子屬于多來源中藥，同科屬偽充較難避免；三、藥材形狀小、不易辨識(shí)，不同科屬及雜質(zhì)摻入難發(fā)現(xiàn)。針對(duì)上述現(xiàn)象，筆者認(rèn)為可以采取以下措施更好的保證菟絲子藥材的質(zhì)量：一、同科屬植物作為菟絲子來源的可行性研究；二、菟絲子同科屬種子和常見混偽品的快速、簡(jiǎn)便鑒別方法研究；三、加強(qiáng)藥材流通領(lǐng)域的監(jiān)督與管理；四、開展菟絲子藥材的規(guī)?；鸵?guī)范化種植，從源頭上保證菟絲子藥材的質(zhì)量，為臨床提供安全、有效的菟絲子藥材。