超聲波-微波協(xié)同輔助萃取紫蘇葉黃酮工藝優(yōu)化及其抗氧化活性研究

（齊齊哈爾工程學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161005）

紫蘇是一年生直立草本植物，在中國(guó)常用于中藥，具有極強(qiáng)的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前，針對(duì)紫蘇資源的開(kāi)發(fā)多集中在紫蘇油上。大多數(shù)植物油是非常好的亞油酸來(lái)源，但只有很少的植物油在飲食中含有大量的α-亞麻酸（α-linolenic acid，α-LNA）。其中，紫蘇籽油中n-3脂肪酸含量最高，約占57%[1-2]。一些研究表明，α-LNA及其高級(jí)衍生物在生理學(xué)上具有某些獨(dú)特和必需的功能[3]，n-3脂肪酸攝入的增加會(huì)具有降低血脂的功能[4-5]。據(jù)報(bào)道，紫蘇油可改善學(xué)習(xí)能力、視網(wǎng)膜功能、抗氧化、抑制癌變和轉(zhuǎn)移等[6]。紫蘇葉也具有極高的經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值，是一種良好的保健食物來(lái)源之一。其具有抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體對(duì)外界致敏原的抵抗能力、抑菌、抗腫瘤等生物活性，主要是其含豐富的酚類化合物，如精油、迷迭香酸、花青素、咖啡酸、維生素和礦物質(zhì)[7-13]。因此，針對(duì)于紫蘇葉中黃酮的提取，對(duì)其資源的開(kāi)發(fā)以及高值化應(yīng)用具有重要的經(jīng)濟(jì)效益和實(shí)際意義[14]。

但目前關(guān)于紫蘇葉的研究多集中于提取及純化上，且提取工藝主要包括溶劑提取法[15-16]、超聲輔助提取法和微波輔助提取等工藝[17-18]。但是關(guān)于利用超聲微波協(xié)同輔助萃取紫蘇葉黃酮的工藝鮮有報(bào)道。超聲-微波協(xié)同輔助萃取是超聲輔助法和微波輔助法發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù)，是超聲與微波的有機(jī)結(jié)合，充分利用了微波的高能穿透效應(yīng)和超聲空化碰撞效應(yīng)，克服了常規(guī)提取、超聲輔助提取和微波輔助提取的缺點(diǎn)，并且提取速度快，效率高[19-20]。此外，研究表明黃酮具有抗氧化、抗衰老、抗炎、鎮(zhèn)痛和抗腫瘤等生物活性，在保健品、醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域均具有廣闊的實(shí)用價(jià)值[21-23]。但是關(guān)于紫蘇葉黃酮的體內(nèi)抗氧化活性還尚未見(jiàn)報(bào)道。

因此，本文以紫蘇葉為原料，利用超聲-微波協(xié)同輔助萃取紫蘇葉黃酮，以紫蘇葉黃酮提取量為指標(biāo)，確定其最佳提取工藝參數(shù)，并通過(guò)H2O2誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞構(gòu)建氧化應(yīng)激模型，測(cè)定紫蘇葉黃酮對(duì)巨噬細(xì)胞增殖率及胞內(nèi)抗氧化物酶系的影響，進(jìn)一步探討其體內(nèi)抗氧化活性研究，為紫蘇葉黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)和紫蘇葉生物活性物質(zhì)的深度開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紫蘇葉：吳氏生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司；蘆丁對(duì)照品：上海源葉有限公司；RAW264.7巨噬細(xì)胞：武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院；DMEM高糖培養(yǎng)基：索萊寶生物有限公司；低內(nèi)毒素胎牛血清、磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）、胰酶消化液、CCK-8 試劑盒：碧云天生物制劑研究所；抗氧化物酶試劑盒：上海酶聯(lián)有限公司；乙醇、過(guò)氧化氫、氫氧化鈉、硝酸鋁、抗壞血酸（分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CW-2000超聲-微波協(xié)同輔助萃取儀（超聲功率固定300 W）：上海新拓微波溶樣測(cè)試技術(shù)有限公司；Pulverisette 14多功能粉碎機(jī)：德國(guó)飛馳有限公司；BBS-SDC超凈工作臺(tái)：山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司；MSE124S-OCE-DU電子分析天平：賽多利斯（上海）貿(mào)易有限公司；HF-90 CO2培養(yǎng)箱：上海力康醫(yī)療設(shè)備有限公司；UV-2600型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：日本島津公司；ELX-800酶標(biāo)儀：賽默飛有限公司。

1.3 方法

1.3.1 黃酮提取工藝及提取量的測(cè)定

將紫蘇葉在60℃的條件下烘干4 h，多功能粉碎機(jī)粉碎后過(guò)40目篩，準(zhǔn)確稱取20.0 g紫蘇葉粉置于燒杯內(nèi)，在不同的料液比、乙醇濃度的條件下，置于超聲-微波協(xié)同輔助萃取儀進(jìn)行萃取，于不同的提取時(shí)間和微波功率下提取紫蘇葉黃酮，提取液8 000 r/min離心10 min，采用以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)的比色法測(cè)定黃酮含量[24]，于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度，并計(jì)算紫花葉黃酮的提取量。

式中：C為提取液中黃酮含量，mg/mL；V為提取液體積，mL；M為紫蘇葉質(zhì)量，g。

1.4 超聲波-微波協(xié)同輔助萃取黃酮工藝條件的選擇

1.4.1 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)置4個(gè)因素的不同水平，即料液比1∶5、1∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25（g/mL），乙醇體積分?jǐn)?shù) 60%，提取時(shí)間10 min，微波功率100 W；乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%、60%、70%、80%、90%，料液比 1∶10（g/mL），提取時(shí)間10 min，微波功率100 W；提取時(shí)間5、10、15、20、25 min，液料比 1 ∶10（g/mL），乙醇體積分?jǐn)?shù) 60%，微波功率 100 W；微波功率 0、100、300、500、700 W，液料比 1∶10（g/mL），乙醇體積分?jǐn)?shù) 60%，提取時(shí)間 10 min；研究不同提取條件對(duì)紫蘇葉黃酮提取效果的影響。

1.4.2 響應(yīng)面優(yōu)化超聲波-微波協(xié)同輔助萃取紫蘇葉黃酮工藝

根據(jù)單因素試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)進(jìn)行Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以黃酮提取量為指標(biāo)，確定最優(yōu)黃酮提取條件，試驗(yàn)因素水平編碼見(jiàn)表1。

表1 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平編碼表Table 1 Factors and code levels

1.5 紫蘇葉黃酮抗氧化活性的檢測(cè)

參照何力[25]的方法進(jìn)行紫蘇葉黃酮的純化（純化后的紫蘇葉黃酮純度為84.68%），在此基礎(chǔ)上進(jìn)行抗氧化活性試驗(yàn)。

1.5.1 細(xì)胞的培養(yǎng)和分組

試驗(yàn)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和紫蘇葉黃酮試驗(yàn)組。其中正常對(duì)照組：不加紫蘇葉黃酮和H2O2干預(yù)處理，只加入等體積的無(wú)胎牛血清的培養(yǎng)基溶液；模型對(duì)照組：不加紫蘇葉黃酮干預(yù)，加入等量的無(wú)胎牛血清的培養(yǎng)基溶液培養(yǎng)24 h后，加入終濃度為2 mmol/L H2O2溶液刺激1 h；紫蘇葉黃酮試驗(yàn)組：紫蘇葉黃酮（總濃度分別為 50、100、200、400 μg/mL）干預(yù)24h后，加入終濃度為2 mmol/L H2O2溶液刺激1h。具體細(xì)胞培養(yǎng)的方法參照郭增旺等[26]的方法進(jìn)行。

1.5.2 紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2誘導(dǎo)RAW264.7氧化損傷細(xì)胞存活率的影響

參照馬萍等[27]的方法，并略加改動(dòng)。按CCK-8法試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行試驗(yàn)，并測(cè)定存活率。其計(jì)算公式如下所示。

1.5.3 紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2誘導(dǎo)HepG2氧化損傷細(xì)胞的胞內(nèi)抗氧化酶系的影響

參照馬萍等[27]的方法，并略加改動(dòng)。按照1.5.1分組方法處理細(xì)胞后，采用預(yù)冷的PBS緩沖液進(jìn)行洗滌3遍后刮取細(xì)胞，并加入100 μL細(xì)胞裂解液，收集裂解液后4℃、12000×g離心10min。取上清液按照試劑盒說(shuō)明書操作檢測(cè)過(guò)氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD），谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）及過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）的酶活力。

1.6 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)均重復(fù)3次測(cè)定值的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，采用SPSS 20.0軟件的對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析（One Way ANOVA），P＜0.05表明具有差異顯著性，采用Design Expert 8.0軟件分析響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

配制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制黃酮濃度與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)線性回歸方程：A=8.110 7C+0.005 6，其中R2=0.996 2，則紫蘇葉黃酮提取量的計(jì)算公式如下所示。

式中：M為紫蘇葉的質(zhì)量，g；A為紫蘇葉黃酮提取液的吸光度值。

2.2 單因素試驗(yàn)分析

2.2.1 料液比對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響

料液比對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響見(jiàn)圖1。

圖1 料液比對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響Fig.1 Effect of liquid ratio on the extraction of flavonoids from perilla leaf

由圖1可知，隨著溶劑體積的增加，紫蘇葉黃酮提取率呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，且當(dāng)料液比為1∶15（g/mL）時(shí)，紫蘇葉黃酮的提取率達(dá)到最高。當(dāng)溶劑體積較少時(shí)，浸提體系的溶質(zhì)和溶劑更易達(dá)到相互擴(kuò)散的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致紫蘇葉黃酮的提取量較低；隨著溶劑體積的升高，紫蘇葉里的黃酮成分更易擴(kuò)散到溶液中，導(dǎo)致黃酮的提取量提高；但當(dāng)溶劑體積過(guò)高時(shí)，射流空化所作用的能量更多的輻射在溶劑上，導(dǎo)致紫蘇葉中的溶質(zhì)分子所吸收的能量有所下降，還伴隨著溶出了其他脂溶性雜質(zhì)[28]，這不但會(huì)降低黃酮的提取量而且造成后續(xù)濃縮的工業(yè)成本升高，故選擇料液比為1 ∶15（g/mL）。

2.2.2 乙醇濃度對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響

乙醇濃度對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響見(jiàn)圖2。

圖2 乙醇濃度對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響Fig.2 Effect of ethanol concentration on the extraction of flavonoids from perilla leaf

由圖2可知，隨乙醇濃度的增加，紫蘇葉黃酮的提取率呈先增大后減小的趨勢(shì)，且在乙醇濃度為60%時(shí)，提取量達(dá)到最大值。隨著乙醇濃度的升高會(huì)引起紫蘇葉細(xì)胞的溶脹系數(shù)的改變進(jìn)而促進(jìn)了乙醇及水分子在細(xì)胞內(nèi)外的流動(dòng)，從而使提取量增加[29]；而當(dāng)乙醇濃度超過(guò)60%后，材料細(xì)胞的溶脹系數(shù)不在變化，此時(shí)溶劑極性的下降可能成為了影響提取量的主要因素，導(dǎo)致醇溶性雜質(zhì)、色素及脂溶性雜質(zhì)與黃酮分子相互競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)合溶劑分子，引起黃酮類化合物的溶解度和結(jié)合率的降低[30]，導(dǎo)致黃酮提取量下降。因此，選擇乙醇濃度為60%。

2.2.3 提取時(shí)間對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響

提取時(shí)間對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響見(jiàn)圖3。

圖3 提取時(shí)間對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響Fig.3 Effect of jet cavitation time on the extraction of flavonoids from perilla leaf

由圖3可知，隨著提取時(shí)間的增加，黃酮提取量先增加后減小，且提取時(shí)間為20 min時(shí)黃酮提取量達(dá)到最大。在超聲與微波的協(xié)同作用會(huì)增強(qiáng)分子的振蕩和碰撞[31]，紫蘇葉黃酮會(huì)快速進(jìn)入乙醇溶液，有助于增加黃酮提取量；但提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)破壞黃酮的結(jié)構(gòu)，同時(shí)黃酮類化合物會(huì)隨著溶劑的不斷蒸發(fā)而損失或降解[32]，從而引起黃酮提取量降低。因此，選擇提取時(shí)間為20min。

2.2.4 微波功率對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響

微波功率對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響見(jiàn)圖4。

圖4 微波功率對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響Fig.4 Effect of microwave power on the extraction of flavonoids from perilla leaf

由圖4可知，紫蘇葉黃酮提取量隨著微波功率的升高呈先升高后下降的趨勢(shì)，且在微波功率為300W時(shí)提取量達(dá)到最高。這可能是由于微波能促進(jìn)植物細(xì)胞壁的破裂和分子的布朗運(yùn)動(dòng)，進(jìn)而促進(jìn)了紫蘇葉黃酮分子的溶出，導(dǎo)致紫花葉黃酮的提取率隨著微波功率的升高而逐漸升高[33]。但是過(guò)高的微波功率會(huì)導(dǎo)致紫蘇葉黃酮發(fā)生一定的氧化反應(yīng)和降低，且會(huì)促進(jìn)其他醇溶性雜質(zhì)的溶出，進(jìn)而導(dǎo)致其提取率的下降[34]。因此，選擇最佳的微波功率為300 W。

2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果分析

2.3.1 試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒓捌滹@著性檢驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，采用Design Expert 8.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，分析各因素對(duì)紫蘇葉黃酮提取量（Y）的影響，試驗(yàn)方案及結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 試驗(yàn)方案及結(jié)果Table 2 Experiment structural matrix and results

用Design Expert 8.0軟件對(duì)表2的結(jié)果進(jìn)行多元回歸分析，得到紫蘇葉黃酮提取量（Y）與料液比（X1）、乙醇濃度（X2）、提取時(shí)間（X3）、微波功率（X4）的編碼的二次多項(xiàng)式回歸方程如下：

Y=8.10+0.62X1+0.14X2+0.39X3+0.40X4-0.16X1X2+0.035X1X3-0.49X1X4+0.60X2X3+0.12X2X4+0.04X3X4-0.46X12-0.79X22-1.03X32-0.82X22

其中模型決定系數(shù)R2=0.958 6校正的R2=0.917 2。

回歸模型方差分析見(jiàn)表3。

表3 方差分析Table 3 Analysis of variance（ANOVA）for the quadratic model

從表3中可以得出模型的F值為23.15，對(duì)應(yīng)的P值小于0.000 1，表明達(dá)到極顯著水平，且失擬項(xiàng)P為0.102 8大于0.05，表明差異不顯著，這說(shuō)明該模型對(duì)紫蘇葉黃酮的提取量具有較好的擬合度，可用于模型分析。由F值可知，各因素的主次順序?yàn)椋毫弦罕龋疚⒉üβ剩咎崛r(shí)間＞乙醇濃度?；貧w方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果：X1、X3、X4的一次項(xiàng)及二次項(xiàng)均達(dá)到極顯著水平（P<0.01），X2的一次項(xiàng)差異不顯著（P＞0.05）、二次項(xiàng)達(dá)到極顯著性水平（P＜0.01）；交互項(xiàng) X1X4，X2X3達(dá)到極顯著（P＜0.01），其他交互項(xiàng)均不顯著。

2.3.2 因素交互效應(yīng)分析

響應(yīng)面相互作用見(jiàn)圖5。

圖5 交互效應(yīng)圖Fig.5 Interaction effect diagram

由圖5可知，紫蘇葉黃酮提取量隨著各因素的編碼水平增高呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)。通過(guò)比較各因素等高線的密集程度發(fā)現(xiàn)，乙醇濃度等高線的密集程度顯著低于料液比、提取時(shí)間和微波功率的等高線，這表明乙醇濃度對(duì)紫蘇葉黃酮提取量的影響因子顯著低于料液比、提取時(shí)間和微波功率；通過(guò)比較因素交互作用中心和底部等高線的中心點(diǎn)位置發(fā)現(xiàn)，圖5a和5b的兩者位置均發(fā)生了明顯偏移，這表明料液比-微波功率間的交互作用和乙醇濃度-提取時(shí)間的交互作用均較為顯著，這些結(jié)果均和方差分析結(jié)果一致。因此，交互作用表明只有4個(gè)試驗(yàn)因素進(jìn)行合理組合的情況下，才能獲得最優(yōu)的紫蘇葉黃酮的提取工藝。

2.3.3 最優(yōu)工藝驗(yàn)證

根據(jù)優(yōu)化試驗(yàn)得到紫蘇葉黃酮的最佳提取工藝參數(shù)為：料液比為 1 ∶17（g/mL），乙醇濃度為 62%，時(shí)間為20 min，微波功率為300 W，在此條件下預(yù)測(cè)得到黃酮提取量為8.28 mg/g。根據(jù)此條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)后獲得的實(shí)際提取量為8.33 mg/g，誤差小于1.0%，說(shuō)明優(yōu)化后的工藝條件可靠，方程擬合良好，具有參考價(jià)值。

2.4 紫蘇葉總抗氧化活性分析

2.4.1 紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2刺激RAW264.7細(xì)胞增殖的影響

紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2刺激RAW264.7細(xì)胞增殖的影響見(jiàn)表4。

表4 紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2刺激RAW264.7細(xì)胞增殖的影響Table 4 Effects of perilla leaf flavonoids on the proliferation of RAW264.7 cells stimulated by H2O2

細(xì)胞的增殖率是反映外界環(huán)境對(duì)細(xì)胞損傷的最直觀指標(biāo)。氧化應(yīng)激環(huán)境可以導(dǎo)致胞內(nèi)活性氧升高和氧化應(yīng)激酶系失活，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生氧化損傷和引起細(xì)胞凋亡[35]。H2O2是一種常見(jiàn)的氧化應(yīng)激源，在氧化應(yīng)激試驗(yàn)中常作為模型藥物進(jìn)行構(gòu)建體外氧化應(yīng)激損傷模型，其分子中的O22-能和胞內(nèi)鐵離子和膜上脂質(zhì)物質(zhì)及蛋白質(zhì)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成細(xì)胞氧化損傷[36]。由表4可知，與正常組相比，氧化應(yīng)激模型組的細(xì)胞存活率顯著下降（P<0.05），這表示H2O2構(gòu)建的RAW264.7氧化應(yīng)激模型成功，可用于后續(xù)試驗(yàn)；與氧化應(yīng)激模型組相比，紫蘇葉黃酮在劑量高于100 μg/mL可顯著提高細(xì)胞的存活率（P<0.05），且呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系。這表明紫蘇葉黃酮在一定程度上對(duì)RAW264.7具有保護(hù)作用，能顯著緩解H2O2對(duì)RAW264.7的氧化應(yīng)激損傷，從而提高細(xì)胞的存活率，具有一定的抗氧化效果。

2.4.2 紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2刺激RAW264.7胞內(nèi)抗氧化酶系的影響

紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2刺激RAW264.7胞內(nèi)抗氧化酶系的影響見(jiàn)表5。

表5 紫蘇葉黃酮對(duì)H2O2刺激RAW264.7胞內(nèi)抗氧化酶系的影響Table 5 Effects of perilla leaf flavonoids on intracellular antioxidant enzymes stimulated by H2O2in RAW264.7

機(jī)體存在自身的氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)體系如酶抗氧化系統(tǒng)進(jìn)行防御外界氧化應(yīng)激源對(duì)機(jī)體造成傷害[37]。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、總超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）是抗氧化物酶系的重要組成部分，其抗氧化物酶系酶活力的水平直接反映出機(jī)體對(duì)外界氧化應(yīng)激源的平衡調(diào)控能力[38]。由表5可知，與正常組相比，氧化應(yīng)激模型組的胞內(nèi)酶活力顯著下降（P<0.05），這表示H2O2降低RAW264.7細(xì)胞胞內(nèi)的抗氧化酶活力，導(dǎo)致細(xì)胞氧化動(dòng)態(tài)平衡遭到嚴(yán)重的破壞；與模型組相比，當(dāng)紫蘇葉黃酮在劑量高于100 μg/mL可顯著提高胞內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px的酶活性（P<0.05）。這表明紫蘇葉黃酮預(yù)培養(yǎng)后可顯著緩解H2O2所引起的胞內(nèi)抗氧化物酶系酶活力的降低和提高機(jī)體對(duì)外界氧化應(yīng)激的調(diào)控能力。這和之前紫蘇葉黃酮能緩解H2O2所引起細(xì)胞存活率降低的結(jié)果相一致。以上結(jié)果表明，紫蘇葉黃酮的抗氧化作用可能與調(diào)節(jié)機(jī)體的抗氧化物酶系酶活力，恢復(fù)機(jī)體的氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)系統(tǒng)有關(guān)，但是其具體抗氧化機(jī)理還需要進(jìn)一步的研究。

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，影響紫蘇葉黃酮提取量因素大小順序?yàn)榱弦罕龋疚⒉üβ剩咎崛r(shí)間＞乙醇濃度，最佳提取工藝參數(shù)為料液比是1∶17（g/mL）、乙醇濃度是62%、時(shí)間是20 min、微波功率是300 W，此工藝條件紫蘇葉黃酮的提取量為8.33 mg/g；抗氧化試驗(yàn)顯示，紫蘇葉黃酮能顯著提高氧化應(yīng)激環(huán)境下RAW264.7細(xì)胞的存活率，恢復(fù)胞內(nèi)抗氧化物酶系酶活力。這表明紫蘇葉黃酮能通過(guò)提高胞內(nèi)抗氧化酶系的活性進(jìn)行緩解氧化應(yīng)激損傷，是一種新型的天然抗氧化物。