濰坊地區(qū)豬偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查

葛愛民，劉新勃，薛 梅，崔曉娜，陳賽賽

（1.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 261061；2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫工程研究所 210014）

偽狂犬病是由偽狂犬病毒（Pseudorabies，PRV）引起的多種動(dòng)物共患的急性、熱性傳染病[1]，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列入OIE 疫病名錄， 我國動(dòng)物檢疫中被列為二類動(dòng)物疫病[2]，2012年我國將豬偽狂犬病列為優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病病種之一[3]。 偽狂犬病毒可引起母豬出現(xiàn)返情、屢配不孕，妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎；仔豬出現(xiàn)呼吸道癥狀和神經(jīng)癥狀，病死率達(dá)20%～100%；育肥豬表現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀，飼料利用率降低，增重減慢；公豬常表現(xiàn)睪丸炎，種用價(jià)值下降。

多年以來，濰坊地區(qū)一直是生豬養(yǎng)殖密集地區(qū)，豬場(chǎng)的規(guī)?；⒓s化程度不斷提高，豬偽狂犬病的發(fā)生與流行也呈現(xiàn)復(fù)雜趨勢(shì)，與其他病原的混合感染現(xiàn)象普遍存在，病死率升高，料肉比升高，給養(yǎng)豬場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 而PRV 屬于皰疹病毒科病毒，可在豬的神經(jīng)系統(tǒng)中建立潛伏感染，在應(yīng)激條件下，病毒可在豬體內(nèi)活化并向外排毒[4]。 所以，豬場(chǎng)一旦發(fā)生偽狂犬病，很難根除，需要不斷進(jìn)行檢測(cè)，及時(shí)淘汰陽性豬。

目前規(guī)?；i場(chǎng)一般使用PRV gE 基因缺失疫苗來預(yù)防本病，結(jié)合使用PRV gE-ELISA 鑒別診斷試劑盒來監(jiān)測(cè)野毒抗體，對(duì)于豬偽狂犬病的防制起到了至關(guān)重要的作用。 本研究應(yīng)用ELISA 方法對(duì)濰坊地區(qū)35 家規(guī)?；i場(chǎng)采集送檢的血清樣品進(jìn)行PRV gE 抗體檢測(cè)， 了解豬偽狂犬病在本地區(qū)的流行狀況，為制定合理的免疫程序和偽狂犬病凈化方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 2017 年～2019 年通過現(xiàn)場(chǎng)采集和送檢方式，隨機(jī)采集了濰坊市諸城、安丘、昌邑、壽光等縣區(qū)35 家不同規(guī)模不同批次且免疫過豬PRV gE 缺失疫苗的豬場(chǎng)1028 份血清樣品，采集范圍包括母豬、公豬、育肥豬和仔豬等。

1.1.2 試劑 PRV gE-ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒為美國IDEXX公司產(chǎn)品，其他試劑由山東金鑄基藥業(yè)有限公司、山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院提供。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集與保存 采集豬前腔靜脈血，5mL/頭，用常規(guī)方法分離血清，置-20℃保存?zhèn)錂z。

1.2.2 PRV gE 抗體測(cè)定 根據(jù) 《豬偽狂犬病免疫酶試驗(yàn)方法》（NY/T 678-2003）[5]進(jìn)行操作。

使用IDEXX 公司的偽狂犬gE-ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)待檢豬血清中PRV gE 抗體水平進(jìn)行檢測(cè)，具體操作方法按試劑盒操說明書進(jìn)行。樣品與陰性對(duì)照比率（S/N）作為判定標(biāo)準(zhǔn)，若S/N≤0.6，樣品可判定為PRV gE 抗體陽性；若S/N＞0.7，樣品可判定為PRV gE 抗體陰性；0.6＜S/N≤0.7 的樣品應(yīng)重新檢測(cè)。

2 檢測(cè)結(jié)果

2.1 PRV gE-ELISA 抗體檢測(cè)結(jié)果

應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)了1028 份血清樣品，陽性樣品數(shù)量為278 份，樣品陽性率為27%；采集了濰坊地區(qū)35家不同規(guī)模豬場(chǎng)的血清樣品， 檢測(cè)呈現(xiàn)陽性的豬場(chǎng)為20 個(gè)，場(chǎng)陽性率為57.1%。

2.2 濰坊地區(qū)不同年份送檢血清的PRV gE 抗體檢測(cè)結(jié)果

表1 數(shù)據(jù)顯示，2017 年檢測(cè)血清樣品數(shù)為569 份，PRV gE抗體陽性率為27.9%（159/569），2018 年檢測(cè)302 份樣品，陽性率為26.5%（80/302），2019 年檢測(cè)157 份樣品，陽性率為24.8%（39/157），說明近幾年濰坊地區(qū)豬群偽狂犬病野毒感染仍然很常見，雖然gE 抗體陽性率逐年下降，但差別并不明顯。

表1 濰坊地區(qū)不同年份送檢血清的PRV gE 抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 濰坊地區(qū)不同檢測(cè)區(qū)域PRV gE 抗體檢測(cè)結(jié)果

由表2 可知， 從濰坊地區(qū)7 個(gè)縣區(qū)的規(guī)?；i場(chǎng)采集血清樣品進(jìn)行PRV gE 抗體檢測(cè)，陽性率基本在20%～30%，說明本地區(qū)PRV 野毒感染較為嚴(yán)重，其中壽光市陽性率最高，達(dá)30.4%；昌樂縣最低，為20.4%。

表2 濰坊地區(qū)不同檢測(cè)區(qū)域PRV gE 抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 濰坊地區(qū)不同年齡階段豬群PRV gE 抗體檢測(cè)結(jié)果

由表3 可知， 各年齡階段豬群PRV 感染情況存在差異，后備母豬的PRV gE 抗體陽性率最高 （36.7%）， 其次為保育豬（29.2%）和育肥豬（27.1%），公豬的陽性率最低（13.8%）。

表3 濰坊地區(qū)不同年齡階段豬群PRV gE 抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

gE 基因是PRV 的主要毒力相關(guān)因子[6]，國內(nèi)豬場(chǎng)一般采用PRV gE 基因缺失疫苗預(yù)防豬偽狂犬病[7]。 自從2011 年P(guān)RV 變異毒株在我國流行，豬偽狂犬病陽性豬場(chǎng)明顯增多，很多學(xué)者采用gE-ELISA 方法在不同地區(qū)進(jìn)行了大量的流行病學(xué)調(diào)查，旨在為當(dāng)?shù)刎i場(chǎng)豬偽狂犬病的防控與凈化提供參考依據(jù)。 如徐尤田等[8]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2014 年～2016 年河南信陽市PRV 野毒感染的豬場(chǎng)陽性率為65.85%，血清樣品陽性率為49.85%；魯富有[9]等調(diào)查2017 年～2018 年云南省普洱市PRV 野毒感染情況，結(jié)果顯示規(guī)?；i場(chǎng)陽性率為2.26%；戴愛玲[10]等調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2012 年～2014年閩西南地區(qū)部分規(guī)?；i場(chǎng)血清樣品總陽性率為21.8%，場(chǎng)陽性率為57.0%。本次調(diào)查應(yīng)用gE-ELISA 方法檢測(cè)了濰坊地區(qū)35家不同規(guī)模豬場(chǎng)采集的1028 份血清樣品， 陽性樣品數(shù)量為278份，樣品陽性率為27%，場(chǎng)陽性率為57.1%，說明濰坊地區(qū)豬群豬偽狂犬病帶毒現(xiàn)象仍然比較嚴(yán)重， 結(jié)合其他學(xué)者在不同地區(qū)調(diào)查的數(shù)據(jù)分析可見， 我國部分規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病的凈化形勢(shì)依然嚴(yán)峻。

2017 年～2019 年連續(xù)三年進(jìn)行采樣檢測(cè)， 樣品陽性率總體呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)， 但由于受非洲豬瘟疫情影響， 生豬存欄量下滑，同時(shí)考慮豬場(chǎng)生物安全問題，采樣變得越來越不方便，檢測(cè)樣品數(shù)量逐年減少，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果可能存在一定數(shù)據(jù)欠缺。 按照《國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012 年-2020 年）》[3]要求，2020年全國所有種豬場(chǎng)豬偽狂犬病達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)， 故各地豬場(chǎng)凈化意識(shí)普遍提高，豬群PRV gE 抗體陽性率下降也是必然結(jié)果。

7 個(gè)縣區(qū)的規(guī)?；i場(chǎng)PRV gE 抗體陽性率基本在20%～30%，說明本地區(qū)動(dòng)物疫病防控技術(shù)水平、豬偽狂犬病凈化程度的區(qū)域差別不大，也反映濰坊地區(qū)PRV 野毒感染較為嚴(yán)重。

不同年齡階段豬群PRV gE 抗體檢測(cè)結(jié)果表明， 后備母豬的PRV gE 抗體陽性率最高，可能與豬場(chǎng)引種和選育后備母豬過程中檢測(cè)凈化工作不到位有關(guān)， 而對(duì)比經(jīng)產(chǎn)母豬的陽性率下降以及公豬的陽性率最低， 說明種豬場(chǎng)的偽狂犬病凈化有了一定的成效。 所以，從動(dòng)物疫病的凈化層面看，加強(qiáng)種豬群檢測(cè)，采取邊檢測(cè)邊淘汰的手段，同時(shí)加強(qiáng)引入和選育后備豬的隔離檢疫，保證陰性后備豬群的補(bǔ)充，是達(dá)到疫病凈化的關(guān)鍵[11]。 保育豬和育肥豬的PRV gE 抗體陽性率對(duì)比哺乳仔豬有上升的現(xiàn)象，說明疫苗免疫受多種因素的影響，免疫效果并不是很好。

本次檢測(cè)調(diào)查在養(yǎng)殖區(qū)域、 采樣的數(shù)量及豬群年齡結(jié)構(gòu)方面進(jìn)行綜合考慮， 盡可能充分了解濰坊地區(qū)豬群PRV 感染情況，為豬偽狂犬病的凈化提供參考，為豬偽狂犬病的科學(xué)防控提供依據(jù)。