云南省部分規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟抗體水平調(diào)查

宿 放，韓佃剛，，譚啟光，葉玲玲，張文娟，王修庚，尹尚蓮，徐 佳，陳 韜，艾 軍，信吉閣

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南昆明 650201；2.昆明海關(guān)，云南昆明 650200；3.玉溪市紅塔區(qū)大營(yíng)街街道農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，云南玉溪 653103；4.蘭坪縣啦井鎮(zhèn)人民政府農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，云南蘭坪 671408；5.梁山縣扶貧開(kāi)發(fā)辦公室，山東梁山 272600；6.金宇保靈生物藥品有限公司，內(nèi)蒙古呼和浩特 010030；7.云南博測(cè)檢測(cè)有限公司，云南昆明 650228）

我國(guó)是生豬養(yǎng)殖大國(guó)，生豬存欄數(shù)和出欄數(shù)始終位居世界首位，養(yǎng)豬業(yè)在國(guó)民經(jīng)濟(jì)和“菜籃子工程”中占有重要地位。然而，豬病嚴(yán)重影響了我國(guó)生豬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，其中豬瘟（classical swine fever，CSF）導(dǎo)致的病死豬總數(shù)占每年病死豬總數(shù)的1/3 以上[1]。CSF 是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的豬的一種高度接觸性、出血性和致死性傳染病，傳染速度快，發(fā)病率和死亡率高，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，是我國(guó)的一類(lèi)動(dòng)物疫病，嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)[2-3]。目前，免疫接種是預(yù)防CSF的有效辦法，通過(guò)合理的免疫接種可大幅度降低豬群發(fā)病率和死亡率[4]。然而受豬場(chǎng)管理不規(guī)范、免疫程序不科學(xué)、野毒感染持久、毒株變異復(fù)雜等多種因素影響，免疫抗體陽(yáng)性率低或免疫失敗現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，導(dǎo)致豬場(chǎng)時(shí)而散發(fā)非典型病例[5]。而抗體檢測(cè)結(jié)果可直接反映疫苗免疫效果，判斷動(dòng)物是否獲得對(duì)該病的抵抗力[6]。為評(píng)估云南省規(guī)?；i場(chǎng)的CSF免疫效果，對(duì)云南省不同地區(qū)38 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的2 663 份血清進(jìn)行了抗體檢測(cè)，以期為云南省各地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)CSF 防控策略的制定提供參考。

1 材料

1.1 血清樣品

所采樣品來(lái)源于云南省7 個(gè)地區(qū)38 個(gè)存欄數(shù)在300 頭以上的規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)。各養(yǎng)豬場(chǎng)均按各自的免疫程序進(jìn)行CSF 免疫，采樣時(shí)距離末次免疫均在20 d 以上，時(shí)間集中在2019年3—8月。根據(jù)各養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)際情況，按存欄量的5%～10%，場(chǎng)內(nèi)隨機(jī)抽選免疫后的健康豬只，共采集血清樣本2 663 份。采樣豬群涵蓋種豬群、后備豬群和商品豬群。樣本具體組成見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)樣本組成

1.2 主要試劑與儀器

CSFV ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)PG01），購(gòu)自美國(guó)IDEXX 公司；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（型號(hào)MULiskan Go）、臺(tái)式冷凍離心機(jī)（型號(hào)Fresc017），均購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific 公司；單道及多道移液器，購(gòu)自德國(guó)Eppendorf 公司；恒溫培養(yǎng)箱（型號(hào)303A-4），購(gòu)自上海申安醫(yī)療器械廠(chǎng)。

2 方法

2.1 檢測(cè)方法

采用阻斷ELISA 方法，檢測(cè)CSFV 抗體。具體操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.2 結(jié)果判定

當(dāng)陰性對(duì)照平均OD450值＞0.500、陽(yáng)性對(duì)照阻斷率＞50%時(shí)結(jié)果有效。阻斷率=（陰性對(duì)照平均OD450值-樣本OD450值）/陰性對(duì)照平均OD450值×100%。被檢樣本阻斷率≥40%，判為陽(yáng)性；阻斷率≤30%，判為陰性；阻斷率在30%～40%之間，判為可疑，數(shù)日后重測(cè)，如仍為可疑，判為陽(yáng)性，否則為陰性。參考李維誠(chéng)等[7]的研究，被檢樣本阻斷率≥50%，判為抗體合格。

2.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

用SPSS 20.0 軟件的Waller-Duncan 法，對(duì)CSFV 抗體阻斷率進(jìn)行差異顯著性分析，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 表示差異顯著。同時(shí)計(jì)算阻斷率的離散程度（變異系數(shù)），變異系數(shù)越大，表示豬群抗體水平整齊度越差。

變異系數(shù)＝標(biāo)準(zhǔn)差/平均值×100%。

3 結(jié)果與分析

3.1 整體情況

本次共檢測(cè)2 663 份血清，平均樣品陽(yáng)性率為84.93%，合格率為78.82%，平均阻斷率為77.61%，離散度為19.03%，抗體合格率高于國(guó)家免疫方案中不低于70%的要求。

3.2 地區(qū)分布

從不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表2）看，7 個(gè)地區(qū)間合格率差別較大，其中滇南、滇西地區(qū)抗體合格率較高，在83%以上，抗體水平整齊度也較高，而滇東北地區(qū)最低，僅為64.63%，且離散度也最大，抗體水平整齊度最差。

不同地區(qū)、不同豬群CSFV 抗體合格率統(tǒng)計(jì)結(jié)果（圖1）顯示：不同豬群的地區(qū)差異較大，如滇西北地區(qū)種公豬最高（100%），滇東北地區(qū)最低（85.71%）；滇西南地區(qū)種母豬最高（96.30%），滇東北地區(qū)最低（75.00%）；滇東地區(qū)后備豬最高（100%），滇西北地區(qū)最低（60.00%）；滇南地區(qū)商品豬最高（81.08%），滇中地區(qū)最低（54.27%）。

3.3 群間分布

從不同豬群統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表3）看，抗體合格率由高到低依次為種母豬（92.58%）、種公豬（89.79%）、后備豬（85.38%）和商品豬（65.12%），其中商品豬未達(dá)到70%的要求。

表2 不同地區(qū)CSFV 抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1 不同地區(qū)、不同豬群合格率分布

表3 不同豬群CSFV 抗體檢測(cè)結(jié)果

4 討論

IDEXX 公司的抗體檢測(cè)試劑盒暫不能區(qū)分所檢測(cè)抗體為感染抗體還是免疫抗體[8]。本次調(diào)查的豬場(chǎng)中，大部分的養(yǎng)殖水平及疫病防控能力較好，均按常規(guī)免疫程序進(jìn)行了CSF 疫苗免疫，且近幾年來(lái)均未出現(xiàn)疫情暴發(fā)，因此可以將所檢測(cè)抗體視為免疫抗體。李維誠(chéng)等[7]研究表明，用IDEXX 試劑盒檢測(cè)CSFV 疫苗抗體，阻斷率達(dá)到50%時(shí)的抗體水平相當(dāng)于中和抗體滴度1:32，只有此水平的中和抗體才對(duì)豬群具有保護(hù)力。因此，本調(diào)查以IDEXX 公司CSFV 疫苗抗體阻斷ELISA 檢測(cè)抗體的阻斷率達(dá)到50%，為判斷抗體合格的最低標(biāo)準(zhǔn)。研究[9-10]表明：抗體合格率在90%以上時(shí)，表明達(dá)到了比較理想的狀態(tài)；阻斷率大于40%、小于50%，只代表抗體陽(yáng)性，并不能說(shuō)明中和抗體能抵抗野毒侵襲。

抗體離散度是衡量豬群免疫后抗體水平均勻度和整齊度的判定指標(biāo)，理論上離散度越小越好，離散度過(guò)高有散發(fā)疫情的危險(xiǎn)[11-12]。本次調(diào)查的云南省7 個(gè)地區(qū)38 家豬場(chǎng)的整體CSFV 抗體合格率為78.82%，雖然達(dá)到了國(guó)家免疫方案中免疫抗體合格率≥70%的要求，但未達(dá)到理想狀態(tài)（90%），仍有15.07%的CSFV 抗體為陰性，說(shuō)明存在發(fā)生疫情的潛在風(fēng)險(xiǎn)；不同豬群免疫抗體差異分析發(fā)現(xiàn)，種母豬抗體合格率最高，為92.58%，達(dá)到了理想的免疫保護(hù)狀態(tài)，而種公豬、后備豬和商品豬抗體合格率分別為89.79%、85.54%和77.34%，未達(dá)到理想狀態(tài)，尤其是商品豬相差更遠(yuǎn)，發(fā)生疫情風(fēng)險(xiǎn)更大。不同豬群免疫抗體水平的差異可能是由多種原因造成的，比如免疫程序差異、自身免疫力差異、母源抗體干擾等。商品豬合格率較低也有可能與本次所測(cè)商品豬日齡大小不一、免疫時(shí)間不統(tǒng)一有關(guān)。

不同地區(qū)免疫抗體合格率存在差異，其中滇南、滇西、滇東和滇西北地區(qū)合格率較高，分別為84.72%、83.61%、82.20%和81.58%，而滇東北地區(qū)抗體合格率最低，僅為64.63%，且未達(dá)到國(guó)家免疫方案中的要求。對(duì)不同地區(qū)、不同豬群分析發(fā)現(xiàn)，滇東北地區(qū)種母豬抗體合格率為75.00%，滇西北地區(qū)后備豬為60%，滇中地區(qū)商品豬為54.27%，提示這些豬群尤其需要盡快調(diào)整免疫程序，提高抗體保護(hù)水平。

抗體合格率的地區(qū)差異可能與不同地區(qū)豬場(chǎng)的疫苗免疫及補(bǔ)免程序、飼養(yǎng)環(huán)境、日常飼養(yǎng)管理水平、生物安全防護(hù)措施、免疫接種操作技術(shù)水平等多種因素有關(guān)。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，部分豬場(chǎng)免疫程序不合適，造成豬群免疫效果不佳，進(jìn)而出現(xiàn)免疫空檔期。豬場(chǎng)應(yīng)開(kāi)展母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定，或根據(jù)連續(xù)的抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果，確定和調(diào)整免疫程序[13]。通過(guò)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)豬群不同生長(zhǎng)階段是否出現(xiàn)免疫空檔期，以便及時(shí)加強(qiáng)免疫，及早控制疫情，降低疫病發(fā)生概率與風(fēng)險(xiǎn)[14]。未達(dá)到理想免疫狀態(tài)的豬場(chǎng)需要查找可能的原因，適當(dāng)調(diào)整免疫方案，提高免疫保護(hù)水平，切實(shí)達(dá)到有效預(yù)防CSF 的目的。

抗體檢測(cè)是評(píng)估疫苗抗體水平和制定科學(xué)免疫程序的重要手段[15]。本研究?jī)H是一段時(shí)間內(nèi)的檢測(cè)，結(jié)果只能說(shuō)明某段時(shí)間內(nèi)豬群的免疫狀況。在規(guī)?；i場(chǎng)的生產(chǎn)實(shí)踐中，只有連續(xù)或定期地進(jìn)行系統(tǒng)的疫病動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，將監(jiān)測(cè)結(jié)果與豬群免疫情況、臨床表現(xiàn)有機(jī)結(jié)合起來(lái)分析，才能及時(shí)了解豬場(chǎng)疫病的流行情況和疫苗免疫效果，及時(shí)調(diào)整免疫方案，保證豬群的健康穩(wěn)定狀況。

5 結(jié)論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，云南省7 個(gè)地區(qū)38 家規(guī)?；i場(chǎng)的種公豬、種母豬、后備豬和商品豬群的豬瘟免疫保護(hù)水平較高，整體上達(dá)到了國(guó)家免疫方案中的不低于70%的要求，但存在一定的地區(qū)差異和豬群差異，其中滇東北地區(qū)以及商品豬群的免疫保護(hù)水平較低，存在發(fā)生疫情風(fēng)險(xiǎn)，需要加強(qiáng)免疫和檢測(cè)。