磷酸川芎嗪滴丸溶出度測定方法的研究

孟 薇

（阜新市檢驗檢測認(rèn)證中心，遼寧 阜新 123000）

磷酸川芎嗪屬于鈣離子拮抗劑的一種，存于川芎根莖內(nèi)，屬于川芎嗪的磷酸鹽，存在抑制血小板集聚、活血化瘀、動脈擴張以及調(diào)節(jié)微循環(huán)等功效[1]。此種藥物在臨床中缺血性腦血管疾病治療中使用率較高，例如高血壓、冠心病、腦栓塞誘發(fā)腦梗死、腦血栓、腦供血不足等[2]。此種藥物屬于處方藥，通常有膠囊劑、注射劑和片劑，而近幾年新研究出一種劑型為磷酸川芎嗪滴丸，主要是利用固體分散技術(shù)所制[3]。此種劑型存有生物利用率高、吸收迅速、易等優(yōu)勢。而藥物的生物利用率和質(zhì)量與溶出度密切相關(guān)?，F(xiàn)階段國內(nèi)磷酸川芎嗪滴丸的溶出方法主要包括籃法和槳法，檢測方式主要包括UV吸收系數(shù)法和UV對照品比較法，均有一定的差異性[4-5]。因此本次針對磷酸川芎嗪滴丸溶出度測定方式進(jìn)行了研究，同時分析了6批藥物在不同溶出介質(zhì)的溶出曲線。詳情報道如下。

1 試藥和儀器

1.1 試藥：磷酸川芎嗪對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100845-201002）100 mg；磷酸川芎嗪滴丸（批號：140638、140628、160104、151123、150804、160332）；陰性樣品。

1.2 儀器：①電子天平(BP-210S)。②針頭式微孔濾膜過濾器：津騰0.45 μm孔徑、13 mm直徑。③高效液相色譜柱：迪馬C18（5μ，250 mm×4.6 mm）。④高效液相色譜儀：島津高效液相色譜儀（LC-2030檢測器）。⑤溶出度儀：。

1.3 試劑：甲醇為色譜純、其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出曲線

2.1.1 測定溶出曲線：①選擇6丸磷酸川芎嗪滴丸，根據(jù)釋放度和溶出度測定法（《中國藥典》2015年版四部通則0931第二法）[6]，溶出介質(zhì)分別為500 mL水、磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）、醋酸鹽緩沖液（pH=4.5）、鹽酸溶液（pH=1.2），以每分鐘50轉(zhuǎn)為轉(zhuǎn)速，分別在5 min、10 min、15 min和20 min時采集3 mL溶出液，并選擇微孔濾膜（0.45 μm）進(jìn)行處理，取續(xù)濾液為供試品溶液，同時置入體積和溫度相同的溶出介質(zhì)。稱取10 mg磷酸川芎嗪對照品并放入量瓶（100 mL）內(nèi)，置入水溶解稀釋，充分搖勻后分別用水、磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）、醋酸鹽緩沖液（pH=4.5）或鹽酸溶液（pH=1.2）制成10μg/mL的磷酸川芎嗪對照品溶液。取供試品溶液和對照品溶液各20 μL并置入高效液相色譜儀，分析每丸藥品的磷酸川芎嗪溶出量。②色譜條件：20 μL進(jìn)樣體積、295 nm為檢測波長、30 ℃柱溫、1 mL/min為流速、流動相為甲醇-水（35∶65）、填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠。③四種溶出介質(zhì)配制：水：純化水。磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）：分別取0.2 mol/L氫氧化鈉溶液（1000 mL水稀釋0.2 mol/L氫氧化鈉，充分搖勻）112 mL和0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液（1000 mL水稀釋27.22 g磷酸二氫鉀，充分搖勻）置入1000 mL水中。醋酸鹽緩沖液（pH=4.5）：用適量水溶解2.99 g醋酸鈉（1000 mL水稀釋114 mL冰醋酸，充分搖勻），再置入2 mol/L醋酸溶液14 mL，加入1000 mL水稀釋。鹽酸溶液（pH=1.2）：用1000 mL水稀釋7.65 mL鹽酸。

2.1.2 溶出曲線：四種溶出介質(zhì)中的磷酸川芎嗪滴丸的溶出曲線詳情，見圖1、2、3、4。

圖1 平均累積溶出度（%）

圖2 平均累積溶出度（%）

圖3 平均累積溶出度（%）

圖4 平均累積溶出度（%）

2.2 溶出度方式：選擇每分鐘50轉(zhuǎn)的低轉(zhuǎn)速，四種溶出介質(zhì)均能夠快速溶出6批藥品，15分鐘的溶出量超過85%，隨意取樣溶出量差距＜5%。四種介質(zhì)中的同一批次藥品溶出行為無較大差距。因此選擇溶出度方式：溶出介質(zhì)500 mL水、每分鐘50轉(zhuǎn)為轉(zhuǎn)速、槳法。由于受到制劑和用藥方式的影響，需參照磷酸川芎嗪片與磷酸川芎嗪膠囊的限度和溶出度取樣時間，將取樣半小時修改為20 min，標(biāo)示量的80%為限度不變。

2.3 溶出方法學(xué)檢驗：檢驗溶出介質(zhì)為水的溶出度方法：①專屬性檢驗：根據(jù)處方比例選擇適當(dāng)?shù)年幮詷悠凡⒅萌胨?，充分溶解成空白樣品，再通過溶出曲線測定方式檢驗，敷料無影響；②線性關(guān)系檢驗：選擇適量磷酸川芎嗪對照品，加水制為濃度溶液，根據(jù)溶出曲線測定方式檢驗。結(jié)果：r=0.9999為相關(guān)系數(shù)、A=32339ρ-5797.9為回歸方程，TMPP為1.0416～18.751 μg/mL，和峰面積有線性關(guān)系。③精密度檢驗：選擇“2.4樣品檢測”中的20 μL供試品溶液和對照品溶液（批號：151123）。結(jié)果：6次持續(xù)平行進(jìn)樣。結(jié)果：RSD為0.72%與0.92%，n=6，存有較高的精密度。④回收率檢驗：根據(jù)處方比例選擇磷酸川芎嗪對照品溶液110%、80%、50%和空白輔料，加水制為含有11 μg/mL、8 μg/mL、5 μg/mL主成分的溶液，充分搖勻，之后選擇微孔濾膜（0.45 μm）進(jìn)行處理，取續(xù)濾液通過溶出曲線測定法檢測。結(jié)果：回收率高達(dá)99.9%，RSD=0.47%。⑤溶液穩(wěn)定性檢驗：選擇“2.4樣品檢測”中的適量供試品溶液和對照品溶液（批號：150804），在室內(nèi)常溫下放置0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、28 h、36 h、48 h，或者置于（37±0.5）℃的水中0 h、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h，分別采取20 μL，根據(jù)溶出曲線測定方式中的色譜條件測定法檢驗。結(jié)果：峰面積RSD是1.43%、1.19%或0.53%、1.11%。⑥吸附性檢驗：溶出度儀取樣系統(tǒng)吸附性：選擇6丸藥品（批號：140638），溶出介質(zhì)為500 mL水，設(shè)置溫度為37 ℃，以每分鐘50轉(zhuǎn)為轉(zhuǎn)速，槳法，20 min時進(jìn)行自動取樣和手動取樣，分別取10 mL，通過微孔濾膜（0.45 μm）進(jìn)行處理，取續(xù)濾液進(jìn)行色譜條件檢測，對每丸溶出量使用外標(biāo)法計算。結(jié)果：手動取樣和自動取樣的溶出量無顯著差異，RSD在0.13%～0.98%，見表1；微孔濾膜吸附性：選擇“2.4樣品檢測”中的適量的供試品溶液和對照品溶液（批號：150804），選擇希波氏、津隆以及島津過濾器過濾，除去6 mL、4.5 mL、3 mL、1.5 mL、0 mL初濾液，選擇續(xù)濾液進(jìn)行色譜條件檢測。三種過濾器未吸附主成分TMPP，能夠用于過濾本實驗中的試驗待測溶液；⑦定量限：選擇“2.4樣品檢測”中的3 mL對照品溶液，用水稀釋后進(jìn)行色譜條件測定，6.2 ng為定量限、11.03為主成分信噪比。⑧耐用性檢驗：選擇6丸藥品（批號：150804），溶出介質(zhì)為500 mL水，根據(jù)溶出曲線測定方法進(jìn)行操作，并使用兩種不同廠家的色譜柱、高效液相色譜儀、自動溶出儀開展溶出曲線耐用性檢測。溶出度不受不同的色譜柱、液相色譜儀、溶出儀的影響，耐用性較高。

表1 磷酸川芎嗪滴丸測定溶出度儀取樣系統(tǒng)吸附性檢驗

表2 磷酸川芎嗪滴丸溶出度檢測（%）

2.4 樣品檢測：選擇各批次的藥品各6丸，槳法，溶出介質(zhì)選擇500 mL水，37 ℃為溫度，以每分鐘50轉(zhuǎn)為轉(zhuǎn)速，20 min時采取10 mL溶液，通過微孔濾膜（0.45 μm）處理，供試品溶液為續(xù)濾液。并用水溶解適量磷酸川芎嗪對照品，稱定后用水溶解，制成含有10 μg/mL TMPP溶液，歸為對照品溶液。之后選取以上溶液通過HPLC進(jìn)行色譜條件檢測，最后計算每丸溶出量，見表2。

3 討 論

3.1 選擇溶出介質(zhì)：臨床研究顯示，TMPP的pH值與飽和溶解度存有一定聯(lián)系，溶解度會根據(jù)pH值的提升而降低[7-8]。在水、磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）、醋酸鹽緩沖液（pH=4.5）、鹽酸溶液（pH=1.2）這四種使用率較高的溶出介質(zhì)內(nèi)，同等溫度條件下，TMPP溶解度較低的為水，這就說明磷酸川芎嗪滴丸用水作為介質(zhì)，其溶出度的區(qū)分力較高。

3.2 檢測方式：選擇“2.4樣品檢測”中的適量供試品溶液和對照品溶液，分別使用UV吸收系數(shù)法、UV對照品比較法、HPLC，對比6批樣品的溶出度，結(jié)果提示，UV吸收系數(shù)法、UV對照品比較法所得的溶出度一致，溶出量差值＜2%，然而使用對照品比較法得到的溶出量高于吸收系數(shù)法，大致為3%～5%。對照品比較法操作相對簡單、檢測所用時間較短，以水就可作為溶劑，不會對環(huán)境造成較嚴(yán)重影響，同時也不會受到輔料的干擾，但在磷酸川芎嗪滴丸內(nèi)，還會存有一定劑量的雜質(zhì)，但不會嚴(yán)重干擾測定結(jié)果，這也就說明此種方式結(jié)果的HPLC精準(zhǔn)性較高、專屬性較強[9]。

3.3 溶出度批內(nèi)差異因素：本次實驗所選的藥品規(guī)格均為5 mg，檢測含量均勻度提示，每丸之間的含量差異較明顯，均一性稍低，因此樣品檢測和耐用性檢驗的溶出度檢測結(jié)果批內(nèi)存有較明顯的差異，同時一些丸劑完全溶出后也無法得到80%的標(biāo)準(zhǔn)量。藥品在水、磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）、醋酸鹽緩沖液（pH=4.5）、鹽酸溶液（pH=1.2）中的快速溶出詳情中，雖然溶散時限可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，能夠?qū)Ρ绢愃幤愤M(jìn)行質(zhì)量控制，分析吸收之前的溶解詳情，但無法將主成分溶出量具體顯示。針對一些含量均勻差的藥品，使用收載溶出度檢查的效果較好[10]。

總而言之，水、磷酸鹽緩沖液 (pH=6.8)、醋酸鹽緩沖液 (pH=4.5)、鹽酸溶液（pH=1.2）四種溶出介質(zhì)中6批磷酸川芎嗪滴丸的溶出曲線對比，以水為溶出介質(zhì)的溶出度檢測方式效果較好，并存在可靠性、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，可以準(zhǔn)確將制劑溶出詳情反映，進(jìn)而對藥品質(zhì)量進(jìn)行有效控制，此外還可以為此種藥品的溶出度修訂和統(tǒng)一提供參考。