熒光RAA檢測方法快速診斷一起豬附紅細胞體病

鄭秀紅，袁 莉，喬啟波，李麗婧，杜秋明*

1.吉林省龍井市德新鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林龍井 133400；2.吉林省龍井市老頭溝鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，吉林龍井 133400；3.吉林省延邊州動物疫病預(yù)防控制中心，吉林延吉 133000；4.吉林省龍井市動物疫病預(yù)防控制中心，吉林龍井 133400

1 概述

附紅細胞體可寄生在多種動物的紅細胞表面、血漿、骨髓等部位，使感染動物發(fā)生附紅細胞體病[1～3]，該病也可以感染人，是一種人獸共患傳染病[4～7]。豬附紅細胞體病可在不同日齡的豬群發(fā)生，仔豬的發(fā)病率和死亡率都相對較高，母豬感染情況也較為嚴重。本病的傳染源主要是患病豬和隱性感染的豬只。本病可通過虱子、蚊子、蜱蟲、疥螨等媒介昆蟲傳播，也可通過豬只咬尾、舔舐傷口等方式傳播，不更換注射器，使用同一支注射器對多個豬只進行免疫或注射也可造成該病的傳播。發(fā)病豬臨床多表現(xiàn)為體溫升高、精神沉郁、眼結(jié)膜蒼白或黃染、貧血、生長緩慢、甚至死亡。黃疸、皮下組織水腫、心包積液、肝脾腎腫大、淋巴結(jié)水腫是該病的主要病理變化。該病的臨床癥狀和病理變化均無特異表征，是導(dǎo)致該病臨床診斷困難的主要原因。

2 常規(guī)實驗室檢測方法

因通過臨床癥狀和病理變化無法對該病進行準(zhǔn)確的診斷，為提高診斷的準(zhǔn)確性和檢出率，血液鏡檢、血片染色、ELISA等血清學(xué)檢測方法相繼應(yīng)用到該病，但上述方法在敏感性、特異性上都存在不足，致使該病的檢出率和診斷準(zhǔn)確性未能得到大幅度提高。PCR方法的應(yīng)用讓檢測該病的敏感性和特異性都得到了提高，但PCR檢測對儀器、檢測環(huán)境、人員技術(shù)水平、都有特定要求，操作復(fù)雜、耗時較長不適合臨床快速診斷。

3 熒光RAA檢測方法

熒光RAA檢測方法是利用重組酶介導(dǎo)的等溫擴增技術(shù)在37～42 ℃恒溫條件下完成靶模板鏈的擴增，并利用熒光探針方法檢測熒光信號[8]。重組酶介導(dǎo)的等溫擴增技術(shù)的應(yīng)用提高了檢測方法的敏感性，熒光探針方法保證了檢測的特異性。整個過程不像PCR方法需要頻繁的升降溫度，對儀器要求不高，檢測用時短，在20 min內(nèi)均可完成。該方法敏感、特異、耗時短、操作簡便的特點適合臨床快速檢測。

4 檢測診斷

2020年3月，一生豬養(yǎng)殖戶豬只出現(xiàn)發(fā)熱、貧血、消瘦、毛色暗淡等癥狀，對出現(xiàn)癥狀的豬只隨機挑選3頭，每頭采集血液樣本1份，對采集的樣本分別進行豬瘟、高致病性藍耳病、非洲豬瘟PCR檢測和豬附紅細胞體熒光RAA檢測。結(jié)果豬瘟、高致病性藍耳病、非洲豬瘟PCR檢測均為陰性，3份樣本豬附紅細胞體熒光RAA檢測均為陽性（圖1），根據(jù)檢測結(jié)果并結(jié)合臨床癥狀確診發(fā)病豬群患有豬附紅細胞體病，并根據(jù)診斷結(jié)果指導(dǎo)養(yǎng)殖戶對該病進行防治，經(jīng)7 d的治療，該豬群臨床癥狀逐漸消失。

5 討論

防治豬附紅細胞體病應(yīng)加強飼養(yǎng)管理減少因混群等原因?qū)е碌囊?、舔舐傷口等方式傳播，合理補充微量元素減少咬尾事件發(fā)生，在治療注射和免疫注射時做到“一畜一針”，避免因注射交叉使用造成的該病傳播，做好防蟲工作減少媒介昆蟲傳播。

近年動物疫情形勢復(fù)雜，疫病種類不斷增加，豬附紅細胞體病也常常呈現(xiàn)繼發(fā)感染和混合感染的情況，在診斷該病時要注意與其它疫病的鑒別診斷，在選擇診斷方法時盡可能的選擇敏感性高和特異性強的檢測方法，以確保檢出率和診斷的準(zhǔn)確性。

圖1 豬附紅細胞體熒光RAA檢測結(jié)果