魯山縣H5、H7亞型禽流感血清學調(diào)查

任光輝

[摘 要] 為了解河南省魯山縣使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗免疫效果，為今后科學決策免疫程序提供依據(jù)，本文隨機選取魯山縣家11個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共50個場群為調(diào)查對象，采用血凝抑制試驗方法對1 670份血清進行H5、H7亞型禽流感免疫抗體檢測。結(jié)果顯示，使用（H5+H7）二價滅活疫苗場群占64.0%，H5、H7亞型群體合格率分別為76.0%和50.0%，個體合格率分別為86.3%和59.5%;未使用（H5+H7）二價滅活疫苗的風險是使用該疫苗的3.8倍。這表明使用（H5+H7）二價滅活疫苗免疫效果較好，建議對不合格抗體的養(yǎng)殖場戶及時補免。

[關(guān)鍵詞] H5亞型;H7亞型;禽流感;血清學;魯山縣

[中圖分類號] S855.3 [文獻標識碼] B [文章編號] 1674-7909（2020）21-113-2

禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類（家禽和野禽）傳染病[1]。病毒根據(jù)血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的抗原性不同進行分類，目前HA分為H1～H16亞型，NA分為N1～N9亞型。由H5、H7亞型毒株引起的疾病稱為高致病性禽流感（HPAI），發(fā)病急，發(fā)病率和病死率可達100%，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定通報動物疫病，被我國列為優(yōu)先防控和重點防范的一類動物疫病[2]。2004年和2017年，我國分別對H5、H7亞型禽流感實行強制免疫和抗體監(jiān)測，并要求采用重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）集中免疫[3]。為了解河南省魯山縣高致病性禽流感免疫效果，制訂科學合理的免疫程序，開展評價工作，正確判斷禽流感防控形勢，2019年10月魯山縣畜牧局組織開展本次免疫效果監(jiān)測，以便提供可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 抽樣設(shè)計

抽樣設(shè)計方法采用先群體抽樣再個體抽樣[4]。根據(jù)《2019年平頂山市動物疫病監(jiān)測與流行病學調(diào)查計劃》，按照估計免疫抗體陽性率方法，設(shè)85%的預(yù)期免疫抗體合格率（p），10%的可接受誤差（d），在95%的置信水平（CL）下，根據(jù)公式N=1.962×p×（1-p）/d 2計算出抽樣場數(shù)N=49個。并結(jié)合魯山縣春秋季強制免疫實際，對11個鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機抽樣50個場群開展集中監(jiān)測。場群內(nèi)采取系統(tǒng)抽樣，依據(jù)場群分類不同，在家禽養(yǎng)殖場抽取1 490份、活禽交易場所抽取150份、散養(yǎng)戶抽取30份，共采集樣品1 670份。具體抽樣設(shè)計見表1。

1.2 樣品采集

無菌操作翅靜脈采集雞血液，每只2～3 mL，3 000 r/min離心10～15 min，析出血清，做好標記，-20 ℃保存?zhèn)錂z。

1.3 檢測試劑

禽流感H5亞型病毒（Re-8株）血凝抑制試驗抗原，批號2019062;禽流感H7亞型病毒（H7N9株），批號2019071。以上2種試劑均為哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.4 檢測方法與判斷標準

按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936—2003）[5]中血凝抑制試驗（HI）檢測H5、H7亞型禽流感免疫抗體。判斷標準按照個體HI抗體效價≥24為免疫合格個體，群體免疫抗體合格率≥70%為免疫合格群體，H5和H7群體免疫抗體合格率均≥70%為免疫合格場群[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 H5、H7亞型禽流感免疫整體情況

在50個場群中，有32個場群使用重組禽流感（H5+H7）二價滅活疫苗，占場群數(shù)量的64.0%（32/50）;H5亞型場群合格率為76.0%（38/50），個體合格率為86.3%（1 442/1 670）;H7亞型場群合格率為50.0%，個體抗體合格率為59.5%（993/1 670）。養(yǎng)殖場的H5、H7亞型群體合格率和個體合格率均高于散養(yǎng)戶和活禽交易點，且差異顯著（P<0.05）。

2.2 使用不同疫苗的場群抗體合格率比較

在50個場群中，32個使用（H5+H7）二價滅活疫苗，18個使用其他禽流感類型疫苗和未免疫。比較使用（H5+H7）二價滅活疫苗場群與使用其他疫苗和未免疫場群的H5、H7亞型免疫抗體，可以看出前者個體免疫抗體合格率均大于70%，分別比后者高出27.5%、187.3%，差異極顯著（P<0.01）;同時，前者群體合格率也大于未使用的群體合格率，分別高于37.9%、124.8%，差異極顯著（P<0.01）。不使用（H5+H7）二價滅活疫苗導致禽流感群體免疫合格率低于70%的風險是使用（H5+H7）二價滅活疫苗的2.6倍（OR=2.6，95%CL：1.1～13.0）。

2.3 群間分布

家禽種類不同，H5、H7亞型禽流感場個體免疫抗體情況存在差別。雞和其他禽類（鴨、鵝）全部場群合格率分別為50%和0，無統(tǒng)計學意義。雞和其他禽類（鴨、鵝）的H5亞型個體合格率分別為86.1%、91.4%，差異不顯著（P>0.05）;H7亞型個體合格率分別為62.1%、0，差異極顯著（P<0.01）。

2.4 空間分布

分析魯山縣高致病性禽流感空間分布，結(jié)果顯示，魯山縣11個鄉(xiāng)鎮(zhèn)區(qū)域內(nèi)群體合格率和個體合格率不均衡，存在較大差異。D、F、K鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H5、H7亞型場群合格率和個體合格率均高于70%，占鄉(xiāng)鎮(zhèn)總數(shù)的27.3%（3/11），符合國家要求;而A、E、H、I和J鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H7亞型免疫抗體未檢測到，占鄉(xiāng)鎮(zhèn)總數(shù)的45.5%（5/11）。

3 討論

高致病禽流感對養(yǎng)禽業(yè)危害巨大，我國將高致病性禽流感納入強制免疫計劃，實行H5亞型和H7亞型高致病性禽流感100%免疫。2017年秋季，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求使用H5+H7二價滅活疫苗替代重組禽流感病毒H5二價或三價滅活疫苗，對家禽實施免疫[3]。魯山縣按照平頂山市統(tǒng)一部署，要求家禽養(yǎng)殖場戶使用H5+H7二價滅活疫苗開展高致病性禽流感免疫。本次檢測對魯山縣高致病性禽流感免疫抗體水平進行初步整體情況了解和判斷，為下一步做好禽流感免疫工作打下基礎(chǔ)。

本次檢測是在秋季強制免疫21 d后進行的抽樣抗體檢測，從本調(diào)查檢測數(shù)據(jù)看，場群免疫密度達不到100%。進一步對抽樣檢測點進行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，主要是對該病重視度不夠，部分養(yǎng)禽場戶沒有按照要求替換使用（H5+H7）二價滅活疫苗。從群間分布看，雞的H5亞型個體免疫抗體合格率低于其他家禽（鴨、鵝），差異不顯著（P>0.05），而H7亞型個體免疫合格率遠高于其他家禽，這可能與疫苗種類不同，其疫苗毒株的免疫原性存在差別有關(guān)。根據(jù)空間分布調(diào)查來看，全區(qū)有3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H5、H7個體免疫抗體水平符合國家要求，其余鄉(xiāng)鎮(zhèn)未達標。因此，建議開展免疫普查，強化免疫效果監(jiān)測與評價，積極落實“先打后補”，對未達標鄉(xiāng)鎮(zhèn)進行補免。

對比使用（H5+H7）二價滅活疫苗和未使用場群的個體免疫抗體合格率，前者H5、H7亞型個體抗體免疫合格率均符合國家的規(guī)定，高于70%，而后者雖然H5個體抗體免疫合格率符合國家要求，但是H7亞型不符合要求，甚至沒有檢測出抗體。這與錢昌銀等[7]調(diào)查結(jié)果一致。風險分析也進一步證實了使用（H5+H7）二價滅活疫苗的安全可靠性。

4 結(jié)論

本次血清學調(diào)查結(jié)果表明，使用（H5+H7）二價滅活疫苗免疫可以達到免疫保護水平，效果優(yōu)于未使用的。建議加大宣傳力度，要求家禽養(yǎng)殖場戶使用（H5+H7）二價滅活疫苗，對免疫不合格者進行補免。

參考文獻

[1]甘孟候.禽流感[M].2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[2]王家敏，沈武玲，于國偉.禽流感研究進展[J].吉林農(nóng)業(yè)學科，2012（5）：62-65.

[3]中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.關(guān)于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知[EB/OL].（2017-08-20）[2020-06-16].http：//www.moa.gov.cn/nybgb/2017/dbq/201801/t20180103_6134000.htm.

[4]劉華，占松鶴，何長生，等.安徽省規(guī)模禽場高致病性禽流感血清學橫斷面研究與風險因素分析[J].中國動物檢疫，2019（12）：1-7.

[5]中國人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.高致病性禽流感診斷技術(shù)：GB/T 18936—2003[S].北京：中國標準出版社，2003.

[6]中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.《2019年國家動物疫病監(jiān)測與流行病學調(diào)查計劃》的通知[EB/OL].（2019-05-30）[2020-06-16].http：//www.xmsyj.moa.gov.cn/gzdt/201905/t20190530_6315850.htm.

[7]錢昌銀，程曉峰，劉華，等.2017年安徽省合肥市禽流感抗體檢測[J].中國動物檢疫，2018（12）：26-28，42.