非小細胞肺癌患者中EGFR與TTF-1表達及與患者預(yù)后關(guān)系的研究

黃銀梅 吳曉文 蔡東林 馬宏武

廣東省汕頭市潮陽區(qū)大峰醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 515154

肺癌是呼吸系統(tǒng)常見惡性腫瘤，依據(jù)病理學(xué)與生物學(xué)特性不同，可分為非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌(SCLC)兩種，其中前者占比超過80%，是肺癌最常見的類型。NSCLC在組織學(xué)上包括鱗癌、腺癌、大細胞癌等，多數(shù)缺乏神經(jīng)內(nèi)分泌特性，對放化療敏感性差，常規(guī)治療預(yù)后欠理想，有數(shù)據(jù)顯示患者5年生存率不足20%[1]，有待尋求新的治療手段。近年，細胞分子生物學(xué)快速發(fā)展，基因靶向技術(shù)得到重大突破，為NSCLC治療開辟了新途徑。研究發(fā)現(xiàn)，不同基因類型與蛋白表達的NSCLC，腫瘤生物學(xué)特征不同，預(yù)后也存在差異。尋找可以反映腫瘤生物學(xué)特征及判斷預(yù)后的特異性腫瘤標(biāo)志物，也由此成為現(xiàn)代臨床NSCLC治療研究熱點。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)對甲狀腺和肺來源的腫瘤具有高選擇性，特別是對于肺腺癌具有高度特異性，是近年臨床新發(fā)現(xiàn)的腫瘤分子標(biāo)記物[2]。表皮生長因子受體(EGFR)是上皮生長因子EGF信號傳導(dǎo)受體，參與調(diào)解增殖、分化、存活、遷移等多種細胞活動，EGFR基因突變陽性者對肺癌靶向治療敏感性高，預(yù)后也更為理想[3]。另有報道指出，TTF-1陽性表達的腺癌EGFR突變率(87.5%)明顯高于TTF-1陰性表達的腺癌(9.6%)，兩者間存在一定相關(guān)性[4]。為深入探究NSCLC患者EGFR與TTF-1表達情況及與預(yù)后的關(guān)系，為臨床提供參考，文章?lián)袢?016年1月—2017年12月我院收治的191例NSCLC患者展開研究，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2016年1月—2017年12月為時限，從我院收治肺癌患者中擇取191例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)病理組織學(xué)確診原發(fā)性NSCLC，標(biāo)本來源手術(shù)切除、纖支鏡活檢、CT引導(dǎo)穿刺均可，病理資料齊全；(2)接受EGFR與TTF-1檢測，檢測前未行放化療和分子靶向藥物治療；(3)患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)肺轉(zhuǎn)移癌；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)中途失訪或退出，隨訪資料缺失。入選病例中，男103例，女88例，年齡43～82歲，中位年齡64歲。病理類型：腺癌109例，鱗癌68例，鱗腺癌10例，其他4例。TNM分期：Ⅰ期40例，Ⅱ期47例，Ⅲ期59例，Ⅳ期45例。細胞分化：低分化96例，中分化37例，高分化58例。

1.2 方法 獲取患者新鮮肺癌組織標(biāo)本，常規(guī)制成5μm石蠟切片備用。以免疫組化SABC法檢測TTF-1蛋白表達，采用購自武漢博士德公司的鼠抗人TTF-1單克隆抗體(一抗)、即用型SABC(過氧化物酶)試劑盒和DAB顯色液。以多重?zé)晒釶CR法檢測EGFR基因突變，采用廈門艾德生物醫(yī)藥公司生產(chǎn)的人類EGFR突變基因檢測試劑盒，主要檢測外顯子18-21位點基因片段和S768I、T790M突變。檢測操作嚴(yán)格遵照試劑說明書要求與實驗室標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程，全程質(zhì)量控制。請我院病理科2名資深醫(yī)師共同閱片。結(jié)果判讀：TTF-1表達于細胞核，呈黃色或棕黃色，以TTF-1陽性表達細胞數(shù)占計數(shù)總細胞數(shù)<5%為陰性(-)，5%～25%為弱陽性(+)，25%～50%為陽性(++)，>50%為強陽性(+++)。以樣本外控出現(xiàn)S型擴增曲線且Ct≤34.0為EGFR基因突變陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計陽性數(shù)據(jù)，檢驗EGFR基因突變陽性與TTF-1陽性表達關(guān)系。觀察EGFR基因突變陽性與TTF-1陽性表達同NSCLC病理的關(guān)系。另隨訪統(tǒng)計患者生存時間(以死亡為終點事件)，觀察EGFR、TTF-1不同表達與NSCLC生存時間關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 以SPSS21.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料百分?jǐn)?shù)(%)表示，行F檢驗，Spearman等級相關(guān)分析EGFR與TTF-1關(guān)系，Kaplan-Meier生存分析法分析EGFR、TTF-1與患者生存時間的關(guān)系，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EGFR與TTF-1陽性率統(tǒng)計 191例NSCLC患者中，EGFR基因突變陽性54例，包括Exon19缺失27例、Exon 21突變22例、其他5例，基因突變陽性率28.27%。TTF-1陽性107例(見圖1)，包括弱陽性37例、陽性31例、強陽性39例，陽性表達率56.02%。

a b

2.2 EGFR與TTF-1表達同NSCLC病理的關(guān)系 不同病理類型的NSCLC中， EGFR基因突變陽性率有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，不同TNM分期與分化程度的NSCLC中，EGFR基因突變陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，不同病理類型、TNM分期與分化程度的NSCLC，TTF-1的陽性表達均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，見表1。

表1 EGFR與TTF-1表達同NSCLC病理的關(guān)系[n(%)]

2.3 EGFR與TTF-1表達相關(guān)性 EGFR與TTF-1在NSCLC中的表達情況見表2，經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，EGFR基因突變與TTF-1表達呈正相關(guān)(r=0.497，P=0.001)。

表2 EGFR與TTF-1在NSCLC中的表達情況

2.4 EGFR和TTF-1與患者生存時間的關(guān)系 Kaplan-Meier法繪制生存曲線，計算相關(guān)關(guān)系，結(jié)果顯示EGFR基因突變不同類型患者、TTF-1不同表達患者的生存時間有統(tǒng)計學(xué)差異，見表3。

表3 EGFR和TTF-1與患者生存時間的關(guān)系

3 討論

TTF-1是由氨基酸組成的多肽，屬于NKX2轉(zhuǎn)錄因子家族成員，由染色體14q13的單一點位基因編碼，主要表達于甲狀腺，另見于肺、腦等組織。在肺組織中，TTF-1選擇性表達于支氣管細胞和Ⅱ型上皮細胞中，可以激活表面活性物質(zhì)A、B、C基因轉(zhuǎn)錄活性，控制clara細胞分泌肺特異蛋白基因，在促進肺發(fā)育、維持肺組織形態(tài)功能正常中具有重要作用[5]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1與肺癌的發(fā)生和進展有關(guān)，可能是驅(qū)動肺癌表達的核心蛋白。有報道指出，TTF-1在肺腺癌組織中呈特異性高表達，陽性率達75%以上，但在肺鱗癌中幾乎不表達，可以為肺腺癌與肺鱗癌的鑒別診斷提供依據(jù)[6]。本研究中，腺癌患者TTF-1陽性表達(88.99%)亦顯著高于鱗癌(2.94%)，與文獻報道相符。有學(xué)者以免疫組化法檢測原發(fā)性肺腺癌標(biāo)本TTF-1，結(jié)果顯示TTF-1陽性率與腫瘤分化程度呈正相關(guān)[7]。另也有關(guān)于TTF-1蛋白表達與肺癌TNM分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性的報道。另有一項研究證實，TTF-1高表達肺癌患者中位生存率明顯高于TTF-1無表達和低表達者，可作為肺癌生存預(yù)后評價指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，不同TNM分期與分化程度的患者，TTF-1表達也存在統(tǒng)計學(xué)差異，TTF-1陽性表達者，中位生存時間更長。由此可以看出，臨床分期越晚、細胞分化越差的NSCLC，TTF-1陽性表達率越低，患者生存時間越短，提示TTF-1表達缺失可能預(yù)示NSCLC高侵襲性，預(yù)后不良。

EGFR是一種絡(luò)氨酸激酶型受體，屬于ErBb家族成員，可以通過結(jié)合表皮生長因子(EGF)啟動細胞核內(nèi)信號導(dǎo)轉(zhuǎn)，參與細胞生長分裂。但受遺傳、輻射、空氣污染、長期吸煙等因素影響，EGFR一旦發(fā)生基因突變，會瘋狂表達EGFR蛋白，導(dǎo)致細胞膜表面過多EGF受體與EGF結(jié)合，造成細胞異常生長、增殖和分裂，最終引發(fā)癌癥[9]。NSCLC患者EGFR陽性表達率可達60%～80%，且不同病理類型的腫瘤組織持續(xù)性表達水平存在差異，而對于NSCLC患者EGFR基因突變率，文獻報道的差異較大，但陽性者普遍以外顯子19缺失和外顯子21突變最為常見，占比分別約45%和40%。明確EGFR基因有無突變及突變類型，是NSCLC靶向治療重要前提和依據(jù)。有報道指出，EGFR基因突變在NSCLC中的檢出率高于SCLC，但不同病理類型、TNM分期與分化程度的NSCLC基因突變率基本相當(dāng)[10]。本研究中，不同病理類型NSCLC基因突變陽性率有統(tǒng)計學(xué)差異，與文獻報道結(jié)論不符，考慮可能與病例選擇偏倚有關(guān)，有待進一步證實。有報道指出，TTF-1陽性表達可以很好地預(yù)測EGFR基因突變，靈敏度達92%[11]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1過表達與EGFR基因突變存在一致性，NSCLC患者中TTF-1與EGFR同時陽性者占比超過85%[12]。本研究顯示，EGFR基因突變與TTF-1表達呈正相關(guān)，與文獻報道結(jié)論相符。另有研究發(fā)現(xiàn)，EGFR基因突變的NSCLC患者化療有效率高于陰性患者，指出可將其作為肺癌預(yù)后獨立預(yù)測因子。本研究經(jīng)Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)，不同EGFR基因突變類型患者的預(yù)后也存在差異，19號外顯子缺失的NSCLC患者生存時間更長，考慮與不同基因突變患者靶向藥物治療敏感度與耐藥性不同有關(guān)，具體有待深入研究。

綜上所述，EGFR與TTF-1表達可以在一定程度上反映非小細胞肺癌病理特征及預(yù)后情況，聯(lián)合應(yīng)用可以更好地指導(dǎo)本病臨床診療，為患者預(yù)后評估提供依據(jù)。