陰地蕨提取物對大鼠運動機能干預(yù)及抗氧化性研究

周云，宋金金，胡斌，陳安東，王則慧

（安康學(xué)院，陜西安康 725000）

陰地蕨是陰地蕨科植物陰地蕨的全草，具有清熱解毒、止咳、止血、清肝明目的藥效[1]。根據(jù)目前的研究表明，陰地蕨中含有總黃酮、皂苷、酚類、糖、多糖、有機酸、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)和強心苷等化學(xué)成分[2]。其中總黃酮是指黃酮類化合物，是一種天然產(chǎn)物，廣泛分布于各種中草藥內(nèi)[3]。陰地蕨中的黃酮類物質(zhì)主要是陰地蕨素。前期研究表明陰地蕨素對清除氧自由基、減小細胞損傷程度具有一定作用，即通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)[4]，進而提高機體抗氧化能力。本實驗對小鼠進行力竭運動的高強度訓(xùn)練后，測定其力竭運動時間，通過不同組數(shù)據(jù)比較來討論陰地蕨是否能提高小鼠機體運動能力，并通過對肝組織進行SOD（超氧化物歧化酶）活力測定，討論陰地蕨是否可以提高機體抗氧化能力。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑

陰地蕨提取物，西安澳瑞特生物科技有限公司；SOD測定試劑盒，南京建成生物工程研究所；乙醚（分析純，天津市化學(xué)試劑六廠）；蒸餾水（分析級，華南高科水處理西安有限公司）；98%冰醋酸（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）；98%乙醇（分析純，天津市化學(xué)試劑六廠）。

1.1.2 動物

24只雄性大鼠，體重140～200 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部提供。分籠飼養(yǎng)，動物飼養(yǎng)室內(nèi)溫度（24±6）℃，相對濕度45%～75%。

1.1.3 儀器

電動跑臺，中國杭州段氏制作；TGL-16G臺式高帶冷凍離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；721B型分光光度計，上海第三分析儀器廠；751B型紫外分光光度計，上海第三分析儀器廠；DK-98-1A恒溫浴鍋，天津泰斯特有限公司；BCD-203A容聲冰箱，中國科龍電器股份有限公司；Bonso-TCS-2000A電子稱，武漢自動化儀表廠。

1.2 方法

1.2.1 模型制備與分組

對小鼠進行7 d的靜養(yǎng)，使小鼠適應(yīng)實驗室環(huán)境，再按表1的方法進行為期7周的電動跑臺力竭運動訓(xùn)練，記錄運動組和運動加藥組老鼠在運動跑臺上的狀態(tài)、行為和最大運動時間，并用木棍、噪音、小型電機在其頭部、四肢軀干等部位進行刺激，以避免小鼠沒有到達力竭狀態(tài)。通過觀察，運動加藥組小鼠相比較于運動組小鼠，體型較大，更易反抗和攻擊。此外，設(shè)置安靜組小鼠置于飼養(yǎng)箱中靜養(yǎng)。

表1 實驗運動小鼠運動方案

1.2.2 給藥

對運動加藥組采用喉管注射的方式，搭載劑量為100 mg/kg的陰地蕨提取物，體積為2 mL。對安靜組及運動組注射同樣體積的生理鹽水作為實驗對照。

1.2.3 待測樣品制備

對小鼠進行完7周的電動跑臺力竭運動訓(xùn)練后，用乙醚對小鼠進行中度麻醉，并對小鼠進行解剖，摘除24只小鼠的肝組織。器官樣品取出后立即置于低溫生理鹽水進行清潔，沖洗多次，用濾紙吸取組織表面殘留生理鹽水，將肝組織于-40 ℃冰箱冷凍保存[6]。剪取肝組織樣本，并對其進行碎化處理，按1∶9生理鹽水進行配比。生理鹽水配比分3次倒入小燒杯中，第1次將小燒杯中組織倒入研磨皿并用生理鹽水清洗；第2次用生理鹽水沖洗燒杯內(nèi)壁；第3次用生理鹽水去除研磨棒上的殘留組織，進行研磨，待組織研磨成勻漿狀態(tài)后，倒入離心管中在低溫4 000 r/min下離心，時間15～20 min。取上清液進行測定或放置于-40 ℃冰箱冷凍保存[7]。

1.2.4 測試方法

采用黃嘌呤氧化分光光度法測定SOD活性[8]。

1.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS19.0分析后,以正態(tài)分布和方差齊性檢驗（±s）表示；采用單因素方差分析并進行兩兩比較，P＜0.05為具有差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 陰地蕨提取物對小鼠力竭運動時間的影響

運動組力竭運動時間為12.875±3.47 min，運動加藥組力竭運動時間為15.536±2.61 min，這說明陰地蕨提取物能起到一定的抗疲勞能力。

2.2 陰地蕨提取物對小鼠肝臟內(nèi)SOD活力的影響

表2為小鼠的SOD酶活力數(shù)據(jù)：與安靜對照相比，運動加藥組和運動組SOD酶的活性有所降低，運動加藥組的活力相對安靜組有顯著性差異（P＜0.05），運動組的活力相對于安靜組有極顯著差異（P＜0.01）；與運動組相比，運動加藥組SOD的含量有所增加。SOD是一類含金屬輔助因子的酶，對于機體最主要的作用就是清除所產(chǎn)生的超氧陰離子，氧自由基會對體內(nèi)細胞造成不同程度的損傷。研究表明，SOD可以促使氧自由基形成雙氧水，這就在一定程度上減緩甚至消除了機體細胞的損傷。氧自由基要在機體進行氧化反應(yīng)，SOD的作用就是抵抗這類氧化反應(yīng)，使機體達到平衡。在此次實驗中，通過7周的高強度力竭運動實驗，運動組小鼠的SOD活性降低，而運動加藥組的SOD活力明顯高于運動組，這是因為運動加藥組小鼠在陰地蕨提取物的抗氧化作用下，有效地清除了氧自由基，抑制了體內(nèi)的氧化反應(yīng)，使得自由基數(shù)量減少，過氧化氫由于缺少合成來源也逐步減少，這就減輕了雙氧水對SOD活力的影響[9]。與安靜組相比，運動加藥組的SOD活力略小于安靜組，這是因為陰地蕨提取物只是起到抗氧化的作用，可以減輕運動等外界因素帶來的損失，但不能使SOD活力比安靜組還高。

表2 陰地蕨提取物（STE）對小鼠SOD酶活力的影響

3 結(jié)論

陰地蕨提取物提高了小鼠的力竭運動時間，緩解了小鼠運動后的疲勞感，增強了運動后小鼠體內(nèi)的SOD活力，證明陰地蕨具有一定的抗氧化能力。這一結(jié)論證實了陰地蕨作為中藥材可以起到一系列有益作用，為陰地蕨藥用價值的開發(fā)提供了有力保障。