飲料中霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果不確定度的評(píng)定

□ 傅德江 福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院

測(cè)量不確定度是與測(cè)量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的參數(shù)，正確評(píng)定測(cè)量不確定度對(duì)客觀分析測(cè)量結(jié)果有重要意義[1-3]。隨著實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可和資質(zhì)認(rèn)定工作的開展，很多實(shí)驗(yàn)室認(rèn)識(shí)到了評(píng)定不確定度的重要性，并在日常實(shí)驗(yàn)室中開展了這項(xiàng)工作，但微生物檢驗(yàn)中不確定度評(píng)定在實(shí)驗(yàn)室工作中的實(shí)際應(yīng)用并不多。本文對(duì)飲料中霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定。

1 材料與方法

1.1 材料

啤酒酵母ATCC 9763購于北京陸橋技術(shù)股份有限公司、孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)170316）北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.2 方法

GB 4789.15-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》[4]、JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[5]。

1.3 樣品制備

取啤酒酵母（ATCC 9763）新鮮培養(yǎng)物于滅菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠞舛鹊娜芤?，稀? 000倍后制成約1×104CFU/mL的菌懸液，取該菌懸液1 mL加入500 mL已滅菌飲料中充分混勻后制成原始檢樣。

制作10個(gè)小樣：無菌操作分別吸取10 mL上述原始檢樣充分混勻后入10個(gè)無菌試管，作為小樣。

1.4 霉菌和酵母總數(shù)測(cè)定

以無菌操作方法吸取1 mL樣品，注入盛有9 mL無菌生理鹽水的試管中，充分振搖，制成1∶10的稀釋液；吸取1∶10的稀釋液1 mL注入盛有9 mL無菌生理鹽水的試管中，混勻制成1∶100稀釋液；按同法制備梯度稀釋液備用；用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2～3個(gè)適宜稀釋度的水樣1 mL，分別注入滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿對(duì)照。然后將冷卻至46 ℃左右的孟加拉紅瓊脂約20 mL注入平皿，并旋搖混勻，同時(shí)做培養(yǎng)基空白對(duì)照；待瓊脂凝固后，置（28±1） ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5 d，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)；選擇菌落數(shù)在10～150平板計(jì)算平均數(shù)，以平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)作為檢測(cè)結(jié)果，每管均做2個(gè)平行。

2 不確定度來源分析

樣品稱樣引入的不確定度，樣品稀釋過程引入的不確定度為A類評(píng)定；

重復(fù)檢測(cè)產(chǎn)生的不確定度為B類評(píng)定。檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度具體來源見圖1。

圖1 檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度來源

3 不確定度的分量評(píng)定

3.1 樣品稱樣引入的不確定度

用500 mL量出式量筒量取225 mL稀釋液，制成1∶10的樣品勻液體。對(duì)于500 mL量筒，JJG196-2006中規(guī)定容器允差為±2.5 mL[6]，則量筒標(biāo)準(zhǔn)不確定度=1.443376。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為ure（l1）=0.006 415。

3.2 樣品稀釋過程引入的不確定度

樣品10倍系列溶液的梯度稀釋采用1 mL和10 mL量出式分度吸量管進(jìn)行。JJG196-2006常用玻璃量器規(guī)定，20 ℃時(shí)1 mL、10 mL分度吸量管的容量 允 差 為 ±0.015 mL、±0.1 mL[4]，取矩形分布，則它們的標(biāo)準(zhǔn)不確定=0.057735。相應(yīng)地它相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.008660，

3.3 重復(fù)檢測(cè)產(chǎn)生的不確定度

同一樣品重復(fù)10次，將10次重復(fù)測(cè)量的結(jié)果列入表1中。

由于微生物測(cè)量結(jié)果分散性很大，其最大值與最小值之間可相差到1個(gè)數(shù)量級(jí)，因此不能直接利用測(cè)量數(shù)據(jù)做不確定度評(píng)估，而需要對(duì)數(shù)據(jù)做對(duì)數(shù)處理，結(jié)果見表1。

表1 數(shù)據(jù)處理過程

3.4 擴(kuò)展不確定度U

根據(jù)置信概率p=0.95 和自由度v=10-1=9，由t分布表得到包含因子k=2.26。于是擴(kuò)展不確定度為：U=2.26×0.037 970=0.085 812。

換算到x坐標(biāo)，得飲料中霉菌和酵母含量x所在的區(qū)間為lgx=1.330 235±0.085 812，即：1.244 423≤lgx≤1.416 047，取反對(duì)數(shù)后可得18≤x≤26。

該樣霉菌和酵母總數(shù)平均值為21 CFU/mL，p=0.95，v=9，其霉菌和酵母含量范圍為18～26 CFU/mL。

4 結(jié)論

本論文依據(jù) GB 4789.15-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》，利用孟加拉紅瓊脂對(duì)飲料中的酵母進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定，給出不確定度。由于微生物檢測(cè)中，測(cè)量結(jié)果的發(fā)散性較大，不屬于正態(tài)分布，檢測(cè)結(jié)果必需轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)，使其靠近正態(tài)分布，便于建立數(shù)學(xué)模型用于計(jì)算。在測(cè)定時(shí)，必須嚴(yán)格控制條件，由同一試驗(yàn)人員進(jìn)行操作，測(cè)試結(jié)果取對(duì)數(shù)，評(píng)定不確定度。結(jié)果顯示，飲料中霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)的取值區(qū)間為1.330235±0.085812，該樣品中霉菌和酵母的含量范圍為18～26 CFU/mL。