清熱化毒丸含量測(cè)定的研究

于遠(yuǎn)洋，周 凌，康 凱，姜范成，胡景蓮

（大連市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心，遼寧 大連 116021）

清熱化毒丸是由連翹,青黛等16味藥材組成的復(fù)方制劑。收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二冊(cè)，具有消火化毒、消腫止痛之功效，臨床上可用于治療小兒身熱煩躁，咽喉腫痛等，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅為顯微鑒別及鹽酸小檗堿、靛藍(lán)及靛玉紅的TLC定性鑒別，不夠全面?；?015版《中國(guó)藥典》要求[1]，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)HPLC法測(cè)定連翹酯苷A、黃芩苷含量，為全面控制該制劑質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材 料

Waters 2695型高效液相色譜儀；Sartorius LE244S、BP211D②型(賽多利斯)電子天平；雙頻數(shù)控超聲波清洗器。藥材購(gòu)自亳州市中正中藥材飲片有限公司，經(jīng)大連市藥品檢驗(yàn)所胡景蓮主任中藥師鑒定，為2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定品種。黃芩苷、連翹酯苷A對(duì)照品購(gòu)自中檢院。甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑為分析純；水為超純水。清熱化毒丸（某（遼寧）制藥有限責(zé)任公司；某股份有限公司制藥廠(chǎng)；本溪某制藥有限責(zé)任公司；吉林某制藥股份有限責(zé)任公司，丸重3 g）。

2 含量測(cè)定

2.1 連翹酯苷A HPLC定量測(cè)定[2]

2.1.1 色譜條件：Waters Symmetry C18色譜柱（4.6 mm x250 mm,5 μm）；乙腈-0.4%冰醋酸溶液(14：86)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm。進(jìn)樣量10 μl

2.1.2 對(duì)照品溶液制備：取連翹酯苷A對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液。供試品溶液制備，取本品0.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。

2.1.3 方法學(xué)考察：按上述條件測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程分別為：Y=14939.7233X-38736.1299 r=0.9998，結(jié)果表明，連翹酯苷A在0.0477～1.909 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。精密度符合要求，峰面積RSD（n=6）為1.2%；方法重復(fù)性良好，含有量RSD（n=6）為0.13%；供試品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，峰面積RSD（n=6）為0.7%；平均加樣回收率為100.3%，RSD（n=6）為2.5%；分別用另外三種不同品牌色譜柱Agilent Extend-C18、Agilent Eclipse Plus-C18、Thermo BDS Hypersil-C18測(cè)定，分離效果良好，耐用性符合要求；方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，圖1顯示陰性無(wú)干擾。

圖1 連翹酯苷A HPLC色譜圖

2.2 黃芩苷HPLC定量測(cè)定

2.2.1 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。色譜柱：Agilent Eclipse Plus-C18（4.6×250 mm 5μm）。進(jìn)樣量10 μl。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液。供試品溶液制備 取本品0.5 g，精密稱(chēng)定，精密加入70%乙醇50 ml，稱(chēng)定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%乙醇補(bǔ)充減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液。

2.2.3 方法學(xué)考察：按上述條件測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，Y=37208.1137X+25386.7184 r=0.9999，結(jié)果表明，黃芩苷在0.0472～1.888 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。精密度符合要求，峰面積RSD（n=6）為0.8%；方法重復(fù)性良好，含有量RSD（n=6）為0.3%；供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，峰面積RSD（n=6）為0.7%；平均加樣回收率為96.9%，RSD（n=6）為0.5%；用另三種不同品牌色譜柱Agilent Extend-C18、Thermo GOLD aQ-C18、Waters Symmetry C18測(cè)定，分離效果良好，耐用性符合要求；方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，圖2顯示陰性無(wú)干擾。

圖2 黃芩苷HPLC色譜圖

2.3 含量測(cè)定數(shù)據(jù)

按供試品溶液制法，對(duì)9批樣品進(jìn)行測(cè)定，以《中國(guó)藥典》為依據(jù)，按干燥品折算，本品中連翹酯苷A理論含量約為0.12 mg/g，實(shí)測(cè)含量遠(yuǎn)高于理論值。按樣品實(shí)測(cè)結(jié)果平均值70%制定限度，每1 g含連翹以連翹酯苷A計(jì)，不得少于1.5 mg；黃芩苷理論含量約為1.94 mg/g，由實(shí)測(cè)結(jié)果可見(jiàn)，樣品均達(dá)到理論值?？紤]工業(yè)生產(chǎn)中的損失，以實(shí)測(cè)結(jié)果平均值70%制定限度，每1 g含黃芩以黃芩苷計(jì)，不得少于1.7 mg。

3 討 論

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范化是現(xiàn)代中藥發(fā)展的瓶頸之一[3]，我國(guó)現(xiàn)行中成藥標(biāo)準(zhǔn)中藥味的鑒別數(shù)量較少，并且含有量測(cè)定指標(biāo)較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)HPLC法測(cè)定連翹酯苷A、黃芩苷含量，方法簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確，可建議用于清熱化毒丸的質(zhì)量控制。