卡式微柱凝膠試驗(yàn)在臨床輸血檢驗(yàn)中的那些事兒

文丨劉治紅（四川省南充市身心醫(yī)院）

現(xiàn)代社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，雖然提升了人們的生活質(zhì)量與幸福感，但隨之而來(lái)的各種事故也對(duì)人們的生命造成了極大的威脅，重傷患者往往出現(xiàn)大量失血，這就使得輸血成為急救中最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，而安全、快速的輸血也能夠?yàn)榛颊叩闹委熂邦A(yù)后提供保障，減少醫(yī)患糾紛的發(fā)生。當(dāng)然，也并不只是重傷患者需要輸血，一些危重癥患者在治療中也需要輸血，這就對(duì)輸血安全提出了更高的要求。

狹義的輸血是指輸注全血，而廣義的輸血?jiǎng)t是輸注包括全血在內(nèi)的各種由血液制備的成分，嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō)，造血干細(xì)胞移植也是一種特殊的輸血。輸血在人類醫(yī)療史上已經(jīng)有超過(guò)三百年的歷史，而在1900年奧地利醫(yī)學(xué)家Landsteiner博士發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型及凝集規(guī)律，為現(xiàn)代輸血提供了堅(jiān)實(shí)的病理生理學(xué)基礎(chǔ)，在隨后的20年里，其他醫(yī)生又逐步建立了血液抗凝和交叉配血技術(shù)，輸血成為了一種常規(guī)治療方法，在所有醫(yī)院都可以進(jìn)行。有了ABO血型及凝集規(guī)律后，輸血變得更為安全，但隨著更多血型系統(tǒng)被發(fā)現(xiàn)，單純的ABO同血型輸血已經(jīng)不能夠滿足現(xiàn)代輸血的安全要求。因此，在輸血前對(duì)供血者與受供者進(jìn)行交叉試驗(yàn)是保證輸血安全的常見方式，傳統(tǒng)的輸血檢驗(yàn)方式為鹽水法，但其往往只能檢測(cè)出不相匹配的鹽水抗體即IgM抗體，但無(wú)法檢測(cè)出免疫同種抗體IgG抗體，有一定幾率會(huì)導(dǎo)致交叉配血假陰性結(jié)果，使臨床輸血存在較大安全隱患。凝聚胺試驗(yàn)也是常用的輸血檢驗(yàn)方式，雖然其敏感性較高，但操作步驟較繁瑣，且易受到凝集、肝素等因素的影響，也不具備較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

在20世紀(jì)90年代，微柱凝膠試驗(yàn)走入大眾視野，它是將抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合，其本質(zhì)就是一種凝血試驗(yàn)，我們用較為簡(jiǎn)單的方式解釋其原理：紅細(xì)胞在微柱凝膠管中與相應(yīng)抗體結(jié)合形成紅細(xì)胞凝集團(tuán)塊，在分子篩和離心力的作用下，凝集團(tuán)塊會(huì)位于膠表面或膠中，而未與抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則會(huì)通過(guò)分子篩沉到微柱管的尖底部。卡式微柱凝膠試驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)便，需要準(zhǔn)備卡式微柱凝膠免疫試劑卡，觀察凝膠卡外觀，如有干膠、雜質(zhì)、氣泡不可使用，將卡放置室溫（18-25℃）平衡，再用專用離心機(jī)離心5分鐘。之后進(jìn)行紅細(xì)胞懸液制備，用EDTA抗凝管采集受血者靜脈血，供血者標(biāo)本為枸櫞酸鹽抗凝全血，全血量2～3mL，3000r/min 離心3min或3500r/min 離心將受血者與供血者的血漿與紅細(xì)胞分離，離心后無(wú)溶血、無(wú)凝塊及明顯乳糜。各取壓積紅細(xì)胞10μl，加入含有1ml低離子強(qiáng)度的鈉溶液中，顏色應(yīng)為淡紅色且沒(méi)有絮狀物。之后進(jìn)行操作，首先需要在試管上做好供血者與受血者的信息標(biāo)注，注意分清主側(cè)管與次側(cè)管，將50μl獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液與50μl受血者血漿先后加入主側(cè)管中，將50μl受血者紅細(xì)胞懸液與50μl獻(xiàn)血者血漿先后加入次側(cè)管中，加入樣品后的試劑卡，在37℃的環(huán)境下孵育15min，使用專用離心機(jī)離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500 rpm3分鐘），取出肉眼觀察結(jié)果。若紅細(xì)胞完全沉降于凝膠管底部，表明受血者與獻(xiàn)血者無(wú)對(duì)應(yīng)的抗原抗體，此為陰性結(jié)果；若紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，發(fā)生在主側(cè)管表明受血者有針對(duì)獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)的抗體，發(fā)生在次測(cè)管表明獻(xiàn)血者血漿中有針對(duì)受血者紅細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)的抗體，即交叉配血不相合，此為陽(yáng)性結(jié)果。

就檢測(cè)結(jié)果而言，卡式微柱凝膠交叉配血試驗(yàn)的一次性正確率能夠達(dá)到95%以上，甚至有部分可以達(dá)到100%，而作為比較的鹽水法往往在75%-85%之間，兩種檢測(cè)方法的差距可以說(shuō)是一目了然。除了檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確以外，卡式微柱凝膠試驗(yàn)本身操作簡(jiǎn)單，不需要進(jìn)行洗滌，對(duì)陰性不需要再次確證試驗(yàn)，能夠在檢驗(yàn)程序上得到一定的簡(jiǎn)化，使得臨床常規(guī)應(yīng)用成為可能。與此同時(shí)，卡式微柱凝膠試驗(yàn)還能夠多份樣本一次性離心處理，這就為大批量樣本檢測(cè)提供了可能。另外，卡式微柱凝膠試驗(yàn)還具有標(biāo)本用量少，檢測(cè)結(jié)果保存時(shí)間久，易于標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化操作等優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)然，卡式微柱凝膠試驗(yàn)也并非就沒(méi)有缺點(diǎn)，首先，卡式微柱凝膠試驗(yàn)的成本較傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方式更高，出于經(jīng)濟(jì)考慮并非首選，其次是卡式微柱凝膠試驗(yàn)中的抗體篩查及配血過(guò)程需要進(jìn)行孵育，這就使得檢驗(yàn)時(shí)間有所延長(zhǎng)，并不適用于緊急情況下的輸血。

卡式微柱凝膠試驗(yàn)的檢驗(yàn)結(jié)果相對(duì)更為準(zhǔn)確，而為了保證這樣準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，我們需要檢驗(yàn)中注意標(biāo)準(zhǔn)化加樣、規(guī)范化操作，從而避免由于人為原因?qū)z驗(yàn)結(jié)果的影響，其中按照要求準(zhǔn)備標(biāo)本，能夠防止溶血、纖維蛋白等影響檢驗(yàn)結(jié)果，而按要求準(zhǔn)備試劑卡，則能夠防止由于試劑卡問(wèn)題影響檢驗(yàn)結(jié)果。還需要注意的是，卡式微柱凝膠試驗(yàn)中可能出現(xiàn)陰性對(duì)照孔假陽(yáng)性的情況，那么首先需要觀察樣本，判斷其是否存在溶血、細(xì)胞黏連等情況，如果并非樣本問(wèn)題，則需要了解患者的臨床信息，判斷其是否存在自身凝集、冷凝集等情況。必要時(shí)可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌，重新選用試劑卡，按照標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行重復(fù)檢驗(yàn)。

本文寫到這里，我們已經(jīng)了解，輸血并不是單純的將ABO血型相同的血液輸注到患者身體里那么簡(jiǎn)單，在臨床輸血前，還需要進(jìn)行輸血檢驗(yàn)，才能夠保證輸血的安全性，而卡式微柱凝膠試驗(yàn)具有操作簡(jiǎn)單、敏感度高且準(zhǔn)確率高的優(yōu)點(diǎn)，臨床應(yīng)用價(jià)值高。