犬冠狀病毒病的診斷與防治措施

張春宏

一、病原學(xué)

冠狀病毒又稱為日冕病毒，是自然界中分布廣泛的一類單股RNA 病毒，是許多家畜、寵物包括人類疾病的重要病原，引起多種急、慢性疾病。第九次國際病毒學(xué)分類委員會報告將冠狀病毒科分為3 個屬即α、β 和γ屬。其中犬冠狀病毒同豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、貓冠狀病毒均屬于α屬冠狀病毒；新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）、中東呼吸綜合征（MERS）、嚴重急性呼吸綜合征（SARS）均屬于β屬冠狀病毒；γ屬冠狀病毒有兩個種即禽冠狀病毒和白鯨冠狀病毒。

犬冠狀病毒（CCV）的病毒粒子呈圓形或橢圓形，長約80～120nm，寬約75～80nm，有囊膜，囊膜表面呈花瓣狀纖突。經(jīng)有機溶劑處理或長時間的凍存，均可導(dǎo)致病毒粒子形態(tài)改變，失去花冠樣的纖突，隨之喪失感染性。該病毒對有機溶劑如乙醚、氯仿等敏感，易被甲醛等物質(zhì)滅活，但對酸和胰酶有較強的抵抗力，在pH3.0 的條件下還能存活，這是病毒經(jīng)胃酸作用后仍有感染活性的原因。CCV 可以通過胞飲作用進入易感細胞，并在細胞漿內(nèi)復(fù)制，病毒通過空泡與細胞膜融合或細胞崩解而釋放。

二、流行病學(xué)

1971 年Binn等科學(xué)家首次成功分離出CCV 后，CCV 才得以被廣泛而深入的研究，此后，世界各地相繼有關(guān)于CCV 的報道，報導(dǎo)顯示CCV 是引起犬腹瀉的重要病原體。我國于1985 由徐漢坤等首次于犬群中分離得到了CCV并證實CCV 感染率較高且有超過犬細小病毒（Canine Parvovirus, CPV）的趨勢。

該病一年四季均可流行，不同年齡段、性別的犬均易感，其中2～4 月齡的犬發(fā)病率最高，是一種輕度的傳染病，但具有高度傳染性，且易與其它病原微生物混合感染。該病以患病犬和帶毒犬的糞便為主要傳染源，被污染的飲水及飼料亦可以直接或間接的傳染給易感動物。CCV 主要傳播途徑由糞到口，特點是感染發(fā)病率高、致死率低，但有些情況下感染CCV能致命，特別是與其它腸道病原體發(fā)生混合感染。

三、臨床癥狀

該病潛伏期一般為1～5 天，犬感染CCV 所表現(xiàn)的臨床癥狀取決于所感染毒株的毒力、病犬的年齡、體況以及機體的免疫水平等。急性型病例臨床上表現(xiàn)病程短，有些病犬尤其是幼犬發(fā)病后1～2 天內(nèi)死亡。該病病初表現(xiàn)為口渴、厭食，隨著病程的發(fā)展，出現(xiàn)嘔吐癥狀，每日嘔吐多次且程度均不同，嘔吐物初見胃內(nèi)未消化的食物，后期可見黃色泡沫樣和黏液混合物。糞便初期呈糊狀，后期呈水狀糞便，帶腥臭味，出現(xiàn)血便時，病犬劇烈腹痛，喜臥，肛門括約肌松弛，排便失禁，呼吸急促，出現(xiàn)脫水和酸中毒等癥狀。病程7～10 天，臨床上患病的幼犬比成年犬癥狀嚴重，而成年犬多呈自限性腹瀉，腹瀉后很快會恢復(fù)正常。

四、診斷

(一）臨床診斷

嘔吐和腹瀉是該病的典型臨床癥狀。病犬精神萎靡，呈嗜睡狀，食欲不振或廢絕，體溫升高?？诳?、鼻鏡干燥、嘔吐，持續(xù)數(shù)天出現(xiàn)腹瀉。糞便呈粥樣或水樣，紅色、暗褐色或黃綠色，惡臭，混有黏液或少量血液。

（二）實驗室診斷

該病在流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化上與許多可引起腹瀉相關(guān)的疾病相似，如犬細小病毒病。所以，要作出確診還應(yīng)輔助以實驗室手段進行。

1.病原分離與鑒定

采集病犬糞便拭子，離心處理后，在無菌條件下取上清液用0.22μm 的濾器過濾后接種于長滿單層的犬腎傳代細胞（MDCK）上置于37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

在接種培養(yǎng)36～48h 后，置于顯微鏡下可見細胞變圓，脫落，沒有明顯的細胞輪廓，細胞邊緣模糊，看不見明顯細胞核，有漂浮的死細胞，則出現(xiàn)典型的細胞病變（CPE）。收獲病毒，處理后置于電鏡下觀察到病毒典型形態(tài)即可做出確診。電鏡下，典型的CCV 粒子有“皇冠”狀結(jié)構(gòu)，均一排列在囊膜表面，間隔有序。

2.分子生物學(xué)診斷

利用NCBI 的Genbank 數(shù)據(jù)庫中由Pratelli等報道的CCV(M)基因序列設(shè)計特異性引物，擴增得到特異性片段，回收處理后送測序。測序結(jié)果于Genbank中報導(dǎo)序列作比對進而做出確診。

五、防治措施

（一）藥物治療

對該病的治療無特效藥，治療時應(yīng)首先注射高免血清或高免免疫球蛋白。該病因腹瀉造成脫水較重，故應(yīng)輸液，補充葡萄糖、電解質(zhì)、三磷酸腺苷，并配合抗菌、止吐、止血類藥進行對癥治療。

（二）預(yù)防措施

有研究表明，CCV 的感染有呈全球流行的趨勢，且易發(fā)生突變、重組，感染宿主較為廣泛，所以關(guān)于CCV 的相關(guān)研究具有較大的公共衛(wèi)生意義。預(yù)防CCV 最根本的措施是定期注射疫苗，由于CCV 可以垂直傳播，采取給妊娠母犬注射疫苗，激發(fā)妊娠母犬產(chǎn)生相應(yīng)抗體，幼犬通過乳汁獲得免疫力和抵抗力。一旦發(fā)現(xiàn)患病犬應(yīng)及時隔離，將病犬的排泄物及時清理并對接觸物進行消毒，避免環(huán)境中CCV 的存在，還應(yīng)改善犬的飼養(yǎng)環(huán)境，保持犬舍衛(wèi)生。