創(chuàng)傷球菌屬的分類鑒定與臨床意義

高亞飛徐慧敏張昭宇楊銳

1.甘州區(qū)人民醫(yī)院，甘肅 張掖734000；2.河西學院附屬張掖人民醫(yī)院，甘肅 張掖734000

近些年來隨著分子生物學的飛速發(fā)展，臨床細菌學研究進展很快，在分類和命名上發(fā)生了很大的變化，一些新的菌種不斷被分離報道命名，特別是在革蘭陽性球菌領域，其引起的感染日趨復雜，臨床診治尤為困難，需要臨床醫(yī)生與臨床微生物檢驗師及時了解和認識，對感染細菌做出正確和快速分類鑒定，推動臨床抗感染治療的成功率。創(chuàng)傷球菌屬（Helcococcus）是近年來新分類命名的一個菌屬，目前菌種成員由最初的1個增加至5個，臨床感染病例也不斷增加。本文對創(chuàng)傷球菌屬的分類、命名、鑒定與臨床意義等的研究進展作一綜述。

1 創(chuàng)傷球菌屬分類與命名

創(chuàng)傷球菌屬是觸酶陰性，兼性厭氧的革蘭陽性球菌，隸屬于細菌域、厚壁菌門、梭菌綱、梭菌目、消化球菌科，1993年由Collins等［1］建議獨立設立的一個新菌屬。以創(chuàng)傷（wound）來命名菌屬，命名Helcococcus的寓意為傷口中的球菌，中文譯名是創(chuàng)傷球菌，菌屬內(nèi)設一個種，以美國細菌學家Kunz姓氏作為種的名字，稱Helcococcus Kunzii，中文譯為孔茲創(chuàng)傷球菌。隨后Collins等于1999年和2004年發(fā)現(xiàn)命名了羊創(chuàng)傷球菌［2］（Helcococcus ovis），瑞典創(chuàng)傷球菌［3］（Helcococcus sueciensis）。美國學者Panackal等［4］也于2004年報道分離1株“化膿創(chuàng)傷球菌”（Helcococcus pyogenica）。Chow等［5］2014年分離報道1株“西雅圖創(chuàng)傷球菌”（Helcococcus seattlensis），但“化膿創(chuàng)傷球菌”和“西雅圖創(chuàng)傷球菌”未獲得國際權威正式分類認可。目前，創(chuàng)傷球菌屬正式分類［6］3個種：孔茲創(chuàng)傷球菌，羊創(chuàng)傷球菌，瑞典創(chuàng)傷球菌，模式菌種為孔茲創(chuàng)傷球菌。

2 創(chuàng)傷球菌生物學特性

2.1 形態(tài)與染色 創(chuàng)傷球菌為革蘭陽性球菌，呈單個、成雙、短鏈、成簇狀排列，也可見四聯(lián)狀排列，不形成芽孢，無莢膜，無鞭毛?？灼潉?chuàng)傷球菌不形成鏈狀排列，多成雙、成簇狀或四聯(lián)狀排列，有報道［7］孔茲創(chuàng)傷球菌菌體大小不等，較葡萄球菌稍大。羊創(chuàng)傷球菌和瑞典創(chuàng)傷球菌多單個、成雙、短鏈排列?！盎搫?chuàng)傷球菌”革蘭染色不穩(wěn)定，與易于脫色的溶血孿生球菌相似［4］。2.2培養(yǎng)特性 創(chuàng)傷球菌為兼性厭氧菌，在有氧、厭氧或5%CO2環(huán)境均可生長。在5%羊血瓊脂平板上35℃孵育24～48h，形成針尖大小、灰白色或無色、半透明、不溶血或輕微α溶血菌落。在麥康凱平板不生長。創(chuàng)傷球菌有明顯的親脂性，在培養(yǎng)基中添加1%馬血清或0.1%的玉米吐溫80明顯刺激其生長［8］?！盎搫?chuàng)傷球菌”［4］和“西雅圖創(chuàng)傷球菌”［5］生長較緩慢，培養(yǎng)2～4d始見菌落，瑞典創(chuàng)傷球菌［3］在厭氧條件下生長良好?？灼潉?chuàng)傷球菌、瑞典創(chuàng)傷球菌和“西雅圖創(chuàng)傷球菌”，可與金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）形成衛(wèi)星狀生長現(xiàn)象。

2.3 生化特性 創(chuàng)傷球菌氧化酶陰性、觸酶陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣?？灼潉?chuàng)傷球菌吡咯烷酮芳基酰胺酶（PYR）陽性、亮氨酸氨基肽酶（LAP）陰性，在6.5%NaCl培養(yǎng)基中生長不定，在膽汁-七葉苷肉湯、10℃和45℃均不生長，水解七葉苷，分解乳糖、淀粉、糖原和海藻糖產(chǎn)酸，不水解馬尿酸鹽、不還原硝酸鹽、VP試驗陰性，對萬古霉素敏感。

3 創(chuàng)傷球菌鑒定與鑒別觸酶陰性革蘭陽性球菌群初步鑒別

根據(jù)萬古霉素（Van）敏感性、PYR和LAP三個試驗區(qū)分［9］：Van敏感、PYR陽性、LAP陰性常見于虛偽球菌屬、球鏈菌屬、綠色氣球菌和創(chuàng)傷球菌。其中虛偽球菌屬和球鏈菌屬菌體呈鏈狀排列，前者6.5%NaCl不生長，水解馬尿酸鹽，而后者相反。綠色氣球菌和創(chuàng)傷球菌菌體呈四聯(lián)狀或簇狀排列，但綠色氣球菌在血瓊脂平板上菌落較大，α溶血環(huán)明顯，在膽汁七葉苷培養(yǎng)基上生長，大多水解馬尿酸鹽；而創(chuàng)傷球菌在血瓊脂平板上菌落細小，不溶血，在膽汁七葉苷培養(yǎng)基上不生長，不水解馬尿酸鹽。

創(chuàng)傷球菌屬內(nèi)鑒定。因為創(chuàng)傷球菌屬其他菌株罕見于人類感染，臨床試驗室主要是將孔茲創(chuàng)傷球菌與其他觸酶陰性、革蘭陽性球菌屬進行鑒別。已知的觸酶陰性的革蘭陽性球菌中，只有孔茲創(chuàng)傷球菌和綠色氣球菌形態(tài)染色和生化特性很相近。這兩種菌的鑒別點：綠色氣球菌在厭氧環(huán)境不生長或生長不良，草綠色溶血環(huán)很明顯，對紅霉素敏感，分解菊糖、棉子糖、甘露醇、β半乳糖苷酶（ONPG）陽性；孔茲創(chuàng)傷球菌在厭氧環(huán)境生長，草綠色溶血環(huán)小，對紅霉素耐藥，不分解菊糖、棉子糖和甘露醇，β半乳糖苷酶（ONPG）陰性?？灼潉?chuàng)傷球菌采用梅里埃API 20 Strep系統(tǒng)鑒定，提示可疑“草綠色氣球菌”，菌株編碼大多是4100413。采用VITEK 2 Compact微生物自動化鑒定儀GP鑒定卡可獲得良好的鑒定結果［10］，有條件的實驗室應用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法（MALDI-TOF MS），結合16SrRNA基因測序技術和來協(xié)助完成鑒定。見表1。

表1創(chuàng)傷球菌屬內(nèi)各種的鑒別特征

4 創(chuàng)傷球菌抗菌藥物敏感性

創(chuàng)傷球菌對青霉素、氨芐西林、頭孢菌素類、左氧氟沙星、莫西沙星、復方新諾明、利奈唑胺、亞胺培南、萬古霉素等抗菌藥物敏感；對紅霉素多耐藥，其次是克林霉素。臨床經(jīng)驗治療建議首選β-內(nèi)酰胺類藥物和萬古霉素［11-12］。

5 創(chuàng)傷球菌的臨床意義

創(chuàng)傷球菌屬的設立已27年，由最初命名孔茲創(chuàng)傷球菌增至約5個種。但羊創(chuàng)傷球菌僅分離于動物，未見人體感染報道。瑞典創(chuàng)傷球菌曾經(jīng)從菌血癥患者血液中檢出1例，傷口分泌物檢出2例［3］。“化膿創(chuàng)傷球菌”由人工關節(jié)感染膿液中檢出1例［4］。“西雅圖創(chuàng)傷球菌”僅從尿毒癥患者血液中分離1例［5］。國內(nèi)外感染病例報告以孔茲創(chuàng)傷球菌最為常見［12］。以往認為創(chuàng)傷球菌是人類和動物皮膚的常住菌群，尤其在下肢皮膚。除引起一些免疫缺陷患者的機會感染外，很少引起人類感染性疾病?；颊叱０橛谢A疾?。ㄈ缣悄虿?、高血壓等）或免疫功能缺陷，與長期或多次住院、大量使用抗菌藥物和免疫抑制劑有關，多在人體下肢、足部發(fā)生化膿性感染，以及心內(nèi)膜炎、菌血癥、腦膜炎、軟組織膿腫、傷口、心臟植入物、人造關節(jié)化膿性感染等［11］，且感染標本常常分離出復數(shù)菌，伴隨其他病原菌一起生長，如葡萄球菌、腸桿菌科、厭氧菌等，以葡萄球菌常見［11］。但近年來孔茲創(chuàng)傷球菌引起感染日漸增多，在免疫功能正常、無基礎疾病的人群中不斷分離報道，是一種潛在的病原菌，其致病作用及臨床感染特點有待進一步闡明和認識［13］，在我國一些地區(qū)已逐漸分離報道，須引起臨床微生物檢驗師的重視，提高對該細菌的認識，做出正確和快速分類鑒定。